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CMTM7基因在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨CMTM7基因在肝细胞癌(hepatoceUular carcinoma,HCC)及其癌旁正常组织中的表达及其临床意义.方法 采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测75例HCC及其对应癌旁正常组织中CMM7基因的表达,分析其与HCC临床病理特征及与患者预后的关系.结果 CMTM7在HCC中的表达(20.00％,15/75)明显低于其癌旁正常组织(81.33％,61/75),组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).CMTM7表达与HCC患者性别、年龄、吸烟史、饮酒史、乙型肝炎病毒感染、肿瘤家族史、肿瘤数目、病理分级、临床分期、是否合并肝硬化及远处转移等无关,与肿瘤大小、TNM分期和甲胎蛋白水平有相关性(P＜O.05).CMTM7阴性组患者的术后生存时间明显低于阳性组,提示CMTM7阴性表达可能与HCC患者的预后有关.结论 CMTM7基因表达下调可能与HCC的发生、发展密切相关.
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鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定
目的:制备鼠抗人CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)蛋白的单克隆抗体,探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,混合后免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为MC9和2C9,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域(CMTM7163-175),可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry, ICC).2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域(CMTM719-44),该单抗只能用于Western blot分析.初步的功能研究提示,CMTM7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体,为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.
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基于RNA干扰CMTM7对肺腺癌A549细胞凋亡的影响
目的:探讨基于RNA干扰CMTM7对肺腺癌A549细胞凋亡的影响.方法:选择肺腺癌A549细胞株分为siRNA组、阴性对照组与空白对照组,在对数生长的A549细胞中转染RNA干扰CMTM7载体、脂质体空载体和不进行转染,观察A549细胞的生长、凋亡与细胞周期状况.结果:MTT实验显示siRNA转染组的抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组的对比无明显差异(P＞0.05).流式细胞术实验表明siRNA转染组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组的对比无明显差异(P＞0.05).流式细胞术实验表明siRNA转染组的G0/G1期细胞数目较阴性对照组和空白对照组增多明显(P＜0.05),同时siRNA转染组的S、G2/M期细胞数目较阴性对照组和空白对照组明显减少(P＜0.05),阴性对照组和空白对照组对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:RNA干扰CMTM7能够促进肺腺癌A549细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,其作用机制可能通过干扰细胞周期而实现.
