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短发夹RNA抑制外源荧光素酶在肝癌细胞中的表达
目的:构建含荧光素酶(1uciferase,luc)基因的短发夹状RNA(shorr hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其在肝癌细胞Bel-7402中抑制外源荧光素酶的表达.方法:设计的两条反向重复的多聚核苷酸序列,退火形成双链DNA,再与双酶切后的载体PGE-1连接,构建pshRNA-luc重组质粒,与荧光素酶基因表达质粒pCMV-luc共转染肝癌细胞株BEL-7402,检测其对荧光素酶表达的影响.结果:PCR和DNA序列分析证实了重组质粒构建成功.pshRNA-luc对共转染的pCMV-luc中的荧光素酶具有明显的抑制作用,抑制率可达86%(P＜0.01).结论:构建的pshRNA-luc表达质粒能有效地抑制荧光素酶在肝癌细胞中的表达,为RNA干扰用于肿瘤的基因治疗打下基础.
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脊髓性肌萎缩症SMN1基因携带者筛查技术研究进展
1 背景介绍脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是全球常见的致死性常染色体隐性遗传疾病之一,活婴发生率为1/5000～1/10000,人群携带率为1/35～1/50[1].临床上根据SMA发病年龄和病程的不同,将患者分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅳ型,其中占患者比例约70％的工型临床表型为严重,常于6个月内起病,多数于2岁内夭折[2].1995年,SMA相关基因被定位于5号染色体长臂1区(5ql1.2～13.3),并发现了反向重复的运动神经元生存基因(survival motor neuron,SMN)[3].该基因有2个序列高度相似的拷贝:靠近端粒的决定性基因SMN1及靠近着丝粒的修饰SMN2,两者之间仅存在5个碱基的差异,而在编码区内只存在1个碱基的差异,即第7号外显子上的840C＞T.由于SMN所在的染色体区域存在众多重复和假基因簇等易导致结构不稳定的序列,导致SMN基因发生缺失或转换的频率较高,相应的表现为人群SMN基因拷贝数组合复杂多变.
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金黄色葡萄球菌P83中插入片段ISSA1的特征与分布
目的:研究金黄色葡萄球菌P83中插入片段ISSA1的特征与分布.方法:根据曼尼阿蒂斯方法制备金黄色葡萄球菌P83的染色体DNA,利用核苷酸序列分析鉴定ISSA1,并通过Southern印迹法对其检测.结果:ISSA1是属于IS30家族的一个新的插入元件,并广泛存在于葡萄球菌中.结论:在细菌中ISSA1能够水平转移.
