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氧化低密度脂蛋白对U937细胞凋亡的影响及其机制的研究
目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对培养的单核巨噬系细胞株U937细胞凋亡的影响,并进一步探讨凋亡产生的机制.方法应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Caspase-3、8、9的测定采用免疫组织化学技术.结果ox-LDL组细胞调亡率增加,并且随着作用时间的延长和浓度的增加,凋亡呈递增后递减变化,U937细胞在用ox-LDL培养后LOX-1和Caspase3、8、9表达都增加.结论ox-LDL可诱导U937细胞凋亡,ox-LDL诱导U937细胞凋亡既有线粒体通路,又包含了死亡受体.
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牛蒡甙元在人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞生长与凋亡中的影响
目的 人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLS)已被证实在类风湿性关节炎发生和发展过程中具有至关重要的作用.本实验目的在于研究牛蒡甙元对RAFLS增殖和凋亡的影响.方法 RAFLS经过牛蒡甙元处理后,通过噻唑蓝和膜联蛋白V/碘化丙啶分析细胞的活性和凋亡,用免疫印迹分析检测细胞凋亡相关基因的变化情况.结果 RAFLS在经过10、20、30μM牛蒡甙(RAFLS)已被证实在类风湿性关节炎发生和发展过程中具有至关重要的作用.本实验元处理后细胞活性分别降低了23％、30％、38％,半数抑制浓度为38μM;同时诱导细胞凋亡分别为9％、15％、21％,凋亡原因为线粒体膜电位减低,细胞色素C释放至胞质,促凋亡蛋白Bax上调,以及抗凋亡蛋白Bcl-2下调.在经过牛蒡甙元处理的RAFLS中,线粒体通路的激活诱导了胱解酶9、胱解酶3和ADP核糖聚合酶(PARP)的分解.此外,牛蒡甙元还能抑制P65的核转位、减少IκBα的降解、降低Akt的磷酸化.结论 研究结果显示,牛蒡甙元在RAFLS中通过调节NF-κB和Akt信号通路,能够抑制细胞增殖,并诱导线粒体凋亡.
关键词： 增殖 线粒体信号通路 NF-κB蛋白激酶B -
ABT-199体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt4细胞增殖凋亡影响及其机制研究
目的 大多数肿瘤细胞对化疗诱导细胞凋亡的耐受与Bcl-2家族蛋白有关,ABT-199是针对抗凋亡蛋白Bcl-2的选择性拮抗剂.本研究旨在探讨ABT-199体外对急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞株增殖凋亡的影响及其机制.方法 体外培养Molt4细胞,CCK8法检测不同浓度ABT-199对Moh4的增殖抑制作用,DAPI细胞核染色后荧光显微镜观察细胞凋亡特征,Annexin Ⅴ/PI双染法检测不同浓度ABT-199对Molt4细胞的诱导凋亡作用,JC-1染色法检测不同浓度ABT-199作用于Moh4细胞后线粒体膜电位的变化,蛋白质印迹法检测经ABT-199处理后线粒体信号通路相关蛋白(Bcl-2、PARP和cleaved Caspase-3蛋白)表达水平的变化.结果 ABT-199对Molt4细胞具有抑制增殖的作用,48 h的IC50值为(4.63±0.15) μmol/L.荧光显微镜观察显示,ABT-199处理Moh4细胞后细胞核染色质染色浓聚,细胞核碎裂,出现凋亡小体,且随着药物浓度的增加上述形态变化更加明显;Annexin Ⅴ/PI检测细胞凋亡结果显示,0、1、2、4、8 μmol/L的ABT-199诱导细胞凋亡的百分比分别为(3.09±1.16)％、(11.59±5.58)％、(25.37±7.42)％、(46.38±7.05)％和(80.60±11.18)％,给药组与对照组的凋亡比例差异有统计学意义,x2=18.286,v=4,P=0.001.JC-1检测结果显示,ABT-199能促使Molt4细胞的线粒体膜电位下降,呈浓度依赖性,给药组与对照组的线粒体膜电位下降比例差异有统计学意义,x2 =17.386,v=4,P=0.002.蛋白质印迹法检测结果显示,给药组线粒体通路中Bcl-2表达水平显著下降(x2=9.024,v=3,P=0.029),并出现Caspase-3下游底物多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP ribose poly-merase,PARP)的裂解,同时出现了Caspase-3裂解片段的累积.结论 ABT-199在体外能抑制急性T淋巴细胞白血病Molt4细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制与激活线粒体信号通路相关.
关键词： 急性T淋巴细胞白血病 Molt4 ABT-199 线粒体信号通路 -
酸枣仁皂苷A抗过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的作用及机制研究
目的:观察酸枣仁皂苷A对过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的保护作用及其机制.方法:采用差速贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以500 μmol/L过氧化氢作用4h建立心肌细胞氧化损伤模型,以酸枣仁皂苷A(20mg/L)在造模前干预24h.四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Caspase活性定量检测caspase-3及caspase-9的活性.结果:模型组经500μmol/L过氧化氢作用4h后,细胞活力显著下降,凋亡率显著增高.与模型组比较,酸枣仁皂苷A提高细胞活力及显著降低细胞凋亡率.模型组的caspase-3及caspase-9活性显著升高.与模型组比较,酸枣仁皂苷A组的caspase-3及caspase-9活性显著下降.结论:酸枣仁皂苷A可抑制过氧化氢诱导心肌细胞损伤,这可能与其抑制线粒体信号通路中caspase-3及caspase-9的活性有关.
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华蟾素联合多柔比星通过Fas/线粒体通路促进肺癌A549细胞凋亡
目的 探究华蟾素联合多柔比星对肺癌A549细胞凋亡及Fas/线粒体通路的影响.方法 用不同浓度华蟾素(0、0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL)、不同浓度多柔比星(0、0.25、0.5、1.0、2.0μg/mL)或联合用药(多柔比星0.5μg/mL分别与华蟾素0、0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL联合使用)处理A549细胞.四甲基偶氮唑(MTT)法检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测华蟾素联合多柔比星对A549细胞凋亡的影响;蛋白质印迹(Western blot)技术检测A549细胞Fas/线粒体凋亡通路相关蛋白的表达变化.结果 MTT结果显示,华蟾素和多柔比星对A549细胞均具有增殖抑制作用(P<0.05),且呈时间-剂量依赖关系.0.5μg/mL多柔比星分别与0.1、0.2、0.4、0.8μg/mL华蟾素联合处理下,A549细胞的增殖抑制率呈时间-剂量依赖性.②流式细胞仪结果显示,与空白对照组比较,单用0.4μg/mL华蟾素或0.5μg/mL多柔比星处理后A549细胞凋亡率显著上升(P<0.05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞凋亡率显著上升(P<0.05).③Western blot结果显示,与空白对照组比较,单用0.4μg/mL华蟾素或0.5μg/mL多柔比星处理后A549细胞Fas、FasL、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P<0.05);与单独用药比较,两药联合处理后A549细胞Fas、FasL、TNF-R1、Bax及Cyt-c表达显著上调、Bcl-2表达显著下调、裂解型Caspase-3/8/9显著增多(P<0.05).结论 华蟾素联合多柔比星可显著促进肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与Fas/线粒体凋亡通路强化有关.
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从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制
为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制,采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理,以诱导热休克蛋白的表达,观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用.结果发现,热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白70及αB -晶状体蛋白表达明显增加,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放,抑制Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活化及随后的心肌细胞凋亡.以上结果提示,热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡,为临床防治心血管疾病提供了新的信息.
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过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡
为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制,采用0.5 mmol/L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞.末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡;Caspase活性定量检测及Western-blot发现Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9同时被激活;而Western-blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆.以上结果提示,氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡,从而为临床防治与细胞凋亡相关的心血管疾病提供了新的信息.
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热休克蛋白抑制过氧化氢所致C2C12细胞凋亡的机制
目的:探讨热休克蛋白抑制活性氧所致C2C12细胞凋亡的分子机制.方法:采用热休克对体外培养的C2C12细胞进行预处理,以诱导热休克蛋白的表达;Hoechst33258染色观察过氧化氢(H2O2)所致的C2C12细胞凋亡;凋亡蛋白酶活性检测试剂盒和Western-blotting检测凋亡蛋白酶-3,8,9的活性;细胞组分分离后Western-blotting检测细胞色素C的释放.结果:热休克预处理导致C2C12细胞热休克蛋白70,αB-晶状体蛋白表达明显增加,同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放,抑制凋亡蛋白酶-3,8,9活化及随后的C2C12细胞凋亡.结论:热休克蛋白通过干预线粒体信号通路与死亡受体通路的活化抑制过氧化氢导致的C2C12细胞凋亡,从而为临床防治心血管疾病提供了新的信息.
