首页 > 文献资料
-
大蒜素对大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响
目的观察大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149细胞系)谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)等表达变化,了解大蒜素对CCL-149细胞抗氧化能力的影响.方法在以四甲基偶氮唑盐(MTT)法确定大蒜素适当作用浓度的基础上,用不同浓度大蒜素(0、0.1、1.0、5.0μg/ml)作用CCL-149不同时间(6、12、24、48 h),用分光光度法检测细胞内GSH、MDA的变化;用Western blot法检测细胞内γ-GCS蛋白的表达,分析不同处理剂量、不同处理时间大蒜素对细胞内GSH、MDA及γ-GCS的影响.结果 (1)大蒜素浓度≤5μg/ml不影响细胞活力.(2)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在处理6 h后细胞内GSH含量[6 h组GSH含量分别为(16.45±0.69)、(16.81±0.79)、(17.80±1.10)mg/g蛋白]较对照组[(13.38±1.16)mg/g蛋白]显著增加(t=3.92～4.78,P均＜0.05),MDA含量[(1.07±0.02)、(1.02±0.06)、(1.00±0.05)nmol/mg蛋白]较对照组[(1.23±0.05)nmol/mg蛋白]下降(t=5.75～6.34,P均＜0.05).细胞内GSH水平升高至24 h达顶峰,48 h有所下降,仍较对照组高,相同时间点不同大蒜素浓度组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).(3)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在刺激6、12、24 h细胞内γ-GCS蛋白表达(24h为0.693±0.027、0.646±0.081、0.667±0.077)较对照组(0.531±0.007)显著增强(t=2.82～9.92,P＜0.05),各观察指标未呈现剂量依赖性.结论大蒜素能增强大鼠肺泡上皮细胞的抗氧化作用,可能与其促进γ-GCS的表达有关.
关键词： 谷氨酸-半胱氨酸连接酶 谷胱甘肽 丙二醛 大蒜素 大鼠肺泡上皮细胞 -
磷脂转运蛋白参与烟草提取物诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡
目的：研究磷脂转运蛋白(PLTP)在烟草提取物对大鼠Ⅱ型肺泡上皮凋亡中的作用。方法体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24 h，分别加入0.5%，1.0%和2.0%烟草提取物共培养24 h或48 h；委托上海吉玛公司合成siRNA-PLTP，并将siRNA-PLTP转染入RLE-6TN中，下调PLTP的表达后，观察烟草烟雾对RLE-6TN细胞凋亡的影响。Hochest染色后观察细胞核的形态学改变；流式细胞术检测细胞凋亡率；蛋白质印迹法（Western blot）检测PLTP的表达量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活性。结果经不同浓度的（0.5%，1.0%，2.0%）烟草提取物作用后，细胞早期凋亡率由（1.68±0.098）%增加至（18.663±0.964）%（P<0.001）；Hoechst染色可见部分凋亡细胞，核发白、固缩、染色质边集等现象；PLTP的表达和caspase-3的活性增加；将PLTP敲降后，可部分逆转烟草提取物诱导的RLE-6TN细胞中caspase-3的活性的增加（P<0.05）。结论 PLTP参与烟草提取物诱导大鼠肺泡上皮细胞的凋亡。
关键词： 烟草提取物 大鼠肺泡上皮细胞 凋亡 磷脂转运蛋白 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3
