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木瓜蛋白酶致大鼠肺气肿中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是一种具有促进细胞生长增殖作用的多肽类生长因子，在维持机体的生长发育及促进多种组织的损伤修复中起着十分重要的作用。我们通过对木瓜蛋白酶（Papain）致大鼠肺气肿模型肺组织和肺泡巨噬细胞bFGF mRNA表达的研究，来探讨其在肺气肿形成过程中与肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原增长的关系。 材料与方法（1）肺气肿动物模型的制备与分组：健康Wistar大鼠42只，体重200～250 g，雌雄不拘（由同济医科大学实验动物中心提供），随机分为肺气肿模型1，3，5，7，15，30天组和正常对照组，每组6只。以2%戊巴比妥钠（50 mg/kg）腹腔注射麻醉动物后，实验组气管内注射8%木瓜蛋白酶(美国Sigma公司)0.05 ml/100 g，对照组以同样方法注入相应量的生理盐水。（2）组织细胞标本制作：以2%戊巴比妥钠（50 mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，行气管插管，向肺内灌注生理盐水，每次5～10 ml，共8次，回收支气管肺泡灌洗液，离心，弃上清，同法用RPMI1640（美国Gibco产品）培养液洗涤细胞1次，用含10%新生小牛血清（Gibco产品）的RPMI1640调细胞浓度至1×106/ml，加入铺有盖玻片的6孔培养板中，置37℃，5% CO2培养箱（Hera Cell德国产）培养24 h后，肺泡巨噬细胞贴壁，取出长有细胞的盖玻片，用4%多聚甲醛固定20～30 min，再用酒精梯度脱水后，置-70℃冰箱保存备用。灌洗肺后取下双肺，向肺内注入4%多聚甲醛，直至肺膨胀边缘变锐、胸膜展平，结扎气管，浸泡于4%多聚甲醛中固定10 h。取左下肺叶常规石蜡包埋、切片、HE染色。（3）免疫组织化学染色：用即用型链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(Strept Avidin-Biotin-enzyme Complex，SABC)免疫组织化学染色试剂盒和兔抗鼠collagen Ⅰ及collagen Ⅲ多克隆抗体及DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）进行免疫组织化学染色。（4）bFGFmRNA原位杂交：用bFGF寡核苷酸探针和敏感加强型原位杂交检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）对组织细胞标本原位杂交。
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用撕片法显示胎儿小肠壁外纵肌外侧面微血管分布
通常观察微血管都是用肠系膜铺片,但不能显示微血管与器官组织的关系.为了观察胎儿小肠壁外纵肌外侧面微血管的分布,我们选用足月胎儿的小肠,用撕片法来显示,现报告如下.方法:取足月胎儿小肠(空肠)约1.5cm,用Zamboni's液固定4～6hr,依次剥离粘膜、粘膜下层、环行肌层和浆膜,保留外纵行肌层,切成A、B、C三段,每段0.5cm ,剪开后分别做如下处理:A段直接铺于载玻片上,不进行脱水、透明、染色;B段用酒精梯度脱水、二甲苯透明但不染色;C段进行脱水、透明、HE染色;A、B、C三段进行铺片时,皆为内侧面贴于载玻片,用显微镜观察.结果:A片可见微血管呈网状分布,鲜红色 ,与其它组织有鲜明对比,可以观察到微血管的分布密度,保持了微血管的原形原貌,真实自然,富于立体感,其缺点是不易长期保存;B片结果同A片,虽然B片进行了常规脱水、透明,但微血管仍然呈红色,富于立体感,且易于长期保存;C片观察结果不如A、B片效果好,微血管与深部肌组织都显示颜色,而且微血管不呈红色,其原形原貌及立体感不强. 结论:用撕片法(B)可以很好地显示胎儿小肠壁外纵肌外侧面微血管的分布.
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带金属种植体的牙周组织制片技术
目的:介绍带金属种植体的组织制片技术.方法:采用树脂包埋,组织磨片的技术.结果:方法简单:材料易寻:结果优良.结论:该方法简单,磨片效果优良.
