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衰老胃黏膜上皮细胞分泌表型分析
目的 探讨细胞衰老在胃黏膜衰老相关性病变中的作用. 方法 采用200 μmol/LH2O2诱导胃黏膜上皮细胞GES-1衰老,观察细胞生长曲线,通过SA-β-Gal染色、Western blot检测p53和p16INK4a蛋白表达观察细胞衰老情况;Real-time PCR检测衰老GES-1细胞衰老相关分泌表型(SASP)相关因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、白介素β(TGF-β)、干扰素-γ(IFN-γ)和血管表皮生长因子(VEGF A) mRNA表达,并收集细胞条件培养液,ELISA方法检测IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β、IFN-γ和VEGF表达. 结果 200 μmol/L H2O2处理组GES-1细胞在3d后生长增殖停滞,第10天时细胞变大变平、SA-β-Gal染色增加(P＜0.001)、p16INK4a和p53蛋白表达水平明显增加,证实H2O2成功诱导GES-1细胞衰老.和对照组比,衰老GES-1细胞中SASP相关因子IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β、IFN-7的mRNA水平升高(t=2.94、3.38、3.15、3.64、2.97,P=0.015、0.000、0.000、0.000、0.000),VEGF-A的mRNA水平明显降低(t=2.31,P=0.20和对照组);衰老GES-1细胞条件培养液中IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β1和IFN-γ浓度分别是(3.12±0.21)μg/L、(4.26±0.15)μg/L、(3.37±0.14)μg/L、(5.34±0.19)μg/L、(2.90±0.47)μg/L,高于阴性对照组(P＜0.001),而VEGF浓度是(0.21±0.03) μg/ml,低于阴性对照组(P＜0.05). 结论 氧化应激诱导胃黏膜上皮细胞衰老,衰老胃黏膜上皮细胞分泌表型改变,可能是细胞衰老促进慢性胃炎和胃癌的主要机制.
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X射线照射联合Veliparib诱导小鼠乳腺癌细胞衰老的相关研究
目的 电离辐射联合多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)抑制剂能够加速肿瘤细胞衰老,衰老的肿瘤细胞分泌水平会发生变化.本研究探讨X射线照射联合Veliparib诱导小鼠乳腺癌细胞衰老及其衰老相关分泌表型(senescenceassociated secretory phenotype,SASP)的变化.方法 采用X射线照射联合Veliparib处理小鼠乳腺癌细胞株4T1,诱导衰老肿瘤细胞模型;采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色试剂盒检测细胞SA-β-gal作为评估衰老的指征,根据细胞大小及颗粒流式分选大衰老肿瘤细胞;荧光定量PCR检测衰老相关分泌表型,比较对照组、Vel组、X射线组、X射线+ Vel组的相对表达量,观察X射线+Vel组细胞因子表达的动态变化;采用多重液相蛋白定量技术(cytometric beads array,CBA)检测细胞上清液中TNF-α、IFN-β和IFN-γ的浓度;荧光定量PCR检测流式分选出的大衰老细胞和非衰老细胞的分泌表型.结果 X射线+Vel组细胞在照射后第4天出现明显的衰老指征;对照组、Vel组、X射线组、X射线+Vel组中大衰老肿瘤细胞的比例分别为(2.633±0.961)％、(2.867±1.069)％、(20.133±3.570)％和(58.200±6.583)％,析因设计方差分析显示X射线照射(F=273.720,P＜0.001)及药物Veliparib(F=75.691,P＜0.001)的主效应差异均有统计学意义,X射线照射与药物Veliparib的交互效应显著(F=73.858,P＜0.001);X射线+Vel组大衰老细胞比例明显高于对照组(t=14.468,P＜0.001)、Vel组(t=14.371,P＜0.001)及X射线组(t=8.805,P=0.001).在SASP mRNA相对表达量方面,X射线及Veliparib的主效应与两者的交互效应均有统计学意义,X射线+Vel组p21、IFN-β、TNF-α、CCL5、CXCL9和CXCL10 mRNA的相对表达量高,与对照组、Vel组、X射线组相比,差异均具有统计学意义,均P＜0.001;各细胞因子在联合处理后第4天出现表达高峰,随后下降;X射线+Vel组细胞上清液中TNF-α、IFN-β、IFN-γ的浓度高,X射线+Vel组均明显高于对照组(P＜0.001)与X射线组,P＜0.001;流式分选出的衰老细胞较非衰老细胞p21、SASP表达水平更高,差异具有统计学意义,均P＜0.05.结论 X射线照射联合veliparib诱导4T1细胞衰老并导致其分泌表型发生明显变化,主要表现为免疫刺激的正向作用.
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衰老相关分泌表型的研究进展
衰老被视为一种被动过程,但是随着研究的深入发现衰老细胞分泌一些因子能主动改变周围环境,这些因子被称为衰老相关分泌表型(SASP).SASP包含多种因子,如生长因子、蛋白酶和炎性因子等,这些分泌因子依赖其所处的生物环境既可以诱导自身衰老又能促进细胞增殖,具有双向调节作用.尽管目前对于SASP的调节尚不完全清楚,但核因子κB、CCAAT增强子结合蛋白β、p38丝裂原激活蛋白激酶能够调节SASP的分泌.该文就近年来对SASP的研究进展予以综述.
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衰老与颞下颌关节骨关节病
骨关节病是导致中老年人慢性残疾常见的原因之一,其病因和病理机制目前尚不明确.颞下颌关节骨关节病是一种能够累及整个颞下颌关节组织,导致患者口颌功能障碍及严重疼痛的慢性退行性疾病.近年来,衰老在骨关节病发生发展中的作用越来越受到重视.本文主要就衰老对颞下颌关节软骨细胞及软骨基质影响的研究进展做一概述,供研究参考.
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胃癌衰老细胞相关分泌表型条件培养基对人胃癌细胞系BGC823增殖的影响
目的 探讨胃癌衰老细胞相关分泌表型条件培养基(SASP-CM)对人胃癌细胞系BGC823增殖能力的影响.方法 取BGC823细胞分为3组:胃癌SASP-CM组、正常肿瘤细胞条件培养基(CTR-CM)组和正常培养基(NOR-CM)组.利用紫杉醇(PTX)处理BGC823细胞构建衰老细胞模型并制备SASP-CM.使用β半乳糖苷酶染色验证衰老细胞模型的建立;酶联免疫吸附实验检测SASP-CM中主要的衰老细胞相关分泌表型(SASP)因子的浓度;CCK-8法及细胞克隆形成实验检测SASP-CM对BGC823细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 35 nmol/L PTX诱导BGC823细胞72 h可建立稳定的细胞衰老模型,此条件下衰老细胞比例高,为(66.95±3.54)％.SASP-CM中主要的SASP因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、CXC趋化因子配体1(CXCL1)、CC趋化因子配体2(CCL2)、γ干扰素(INF-γ)的浓度均高于CTR-CM(P均＜0.01).培养48、72、96 h时SASP-CM组细胞的增殖活性均高于CTR-CM组和NOR-CM组(P均＜0.05).SASP-CM组细胞的相对克隆形成率高于CTR-CM组(P＜0.01)和NOR-CM组(P＜0.05).SASP-CM组的S期细胞比例均高于CTR-CM组和NOR-CM组(P均＜0.01),各组间细胞凋亡率差异无统计学意义.结论 胃癌SASP-CM促进BGC823细胞增殖.
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细胞衰老相关分泌表型因子及其分子调控机制研究进展
细胞衰老是增殖细胞脱离细胞周期呈永久性生长停滞的状态,其显著特点之一是分泌大量生物活性物质,即细胞衰老相关分泌表型(SASP)因子.SASP因子的分泌大致可分为DNA损伤快速旁分泌期、SASP早期、SASP成熟期3个阶段.SASP因子的分子调控机制复杂,涉及DNA损伤反应、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、核因子B(NF-B)及CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)激活、SASP基因表观遗传学改变、基因转录后调控和自噬等.SASP因子能改变细胞微环境导致的多种病理状态的发生,已成为调节衰老效应的药物靶标,为肿瘤和年龄相关性疾病提供了新的治疗方向.基于此,本文对SASP因子进行了分类,总结了其在生物过程中的作用,并深入探讨其调控机制.
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丝裂霉素C诱导小鼠NIH-3T3细胞出现衰老相关分泌表型
衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP)是指随细胞衰老而出现的分泌功能亢进,其分泌的因子参与细胞衰老、免疫调节、血管生成、细胞增殖及肿瘤侵袭等过程.与人类细胞相比,目前小鼠细胞的体外SASP模型尚十分缺乏,而建立该模型将为研究SASP的发生机制及生物学作用提供便利.为此,本文以INK4a基因座缺失(编码p16mK4a蛋白)的小鼠NIH-3T3细胞系及野生型小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEF)为研究对象,用丝裂霉素C (mitomycin C,MMC)诱导细胞DNA损伤,并通过细胞形态、衰老相关β-半乳糖苷酶(1β-gal)活性染色、EdU整合率、Westernblot、定量RT-PCR及ELISA等检测方法,观察细胞的衰老情况及SASP因子的表达和分泌水平.结果显示,MMC(1μtg/mL)处理12h或24 h,并继续培养到第8天后,NIH-3T3细胞体积变大,β-gal染色阳性(蓝染)细胞的百分率明显升高,分别达到77.4％和90.4％,并伴有P21蛋白表达上调及EdU整合率下降(P＜0.01).同时,IL-6、TNF-α、IL-1a和IL-1β等常见SASP基因的mRNA表达水平显著上调,ELISA检测证明IL-6的分泌量亦显著升高(P＜0.01).相反,尽管MMC处理12h或24 h也能诱导野生型MEF出现细胞体积增大、β-gal染色阳性率升高(分别达71.7％和80.2％)及P21表达上调,但其IL-6的分泌量无显著上升.本研究表明,MMC能诱导NIH-3T3和野生型MEF出现细胞衰老,但只有NIH-3T3细胞出现了典型的SASP现象.衰老NIH-3T3细胞可能是研究小鼠SASP的合适模型.
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细胞老化介导皮肤衰老的研究进展
衰老是年龄相关的机体退行性变,皮肤改变是其直观的表现之一.细胞老化源于细胞周期的持久性阻滞,它既是衰老的重要标志,也是衰老发生发展的重要机制.随着皮肤的衰老,在表皮和真皮中老化细胞均逐渐累积并进一步加剧衰老,而清除老化细胞则可使皮肤年轻化.细胞老化参与衰老进程可能与激活DNA损伤反应通路、上调阻滞细胞周期的调节蛋白、分泌衰老相关表型增多等机制有关.干预细胞老化有望在将来成为临床抗衰老的新思路和新手段.
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衰老相关分泌表型的研究进展
细胞衰老的同时常伴随着衰老相关分泌表型( senes-cence-associated secretory phenotype, SASP )的产生。 SASP 由促炎细胞因子、生长因子、趋化因子和基质重塑酶等一系列细胞因子组成,它们可以导致机体慢性低度炎症和疾病,并可以反作用于衰老细胞及其邻近细胞加速它们的衰老进程,并可作为新的细胞衰老效应机制。该文通过对SASP生物学功效、分泌调节、机制、以及与相关疾病关联的探讨,提高我们对SASP的认知,引发我们对SASP相关疾病疗法的思考。
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细胞衰老相关分泌表型的生物学作用及产生机制
衰老相关分泌表型(SASP)是指衰老细胞出现的分泌功能增强,其分泌的多种细胞因子在体内发挥重要调节作用.在不同刺激引起的细胞衰老模型中,SASP普遍存在且种类繁多,主要包含生长因子、趋化因子、促炎细胞因子、胞外蛋白酶和不可溶蛋白等.SASP在体内作用取决于所处环境,可对机体产生有益或有害影响.SASP—方面可促进胚胎发育及组织修复,招募并激活免疫细胞,抑制肿瘤发展;另一方面可引起慢性炎症,促进肿瘤生长、侵袭.该文总结了SASP生物学作用及发生机制的研究进展.
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细胞衰老在特发性肺纤维化中的作用及机制研究进展
特发性肺纤维化(IPF)是一种不明原因的慢性进行性间质性肺炎,年龄是其独立的高危因素.随着年龄增长,衰老细胞积累,已有多种证据表明细胞衰老可通过衰老相关分泌表型(SASP)、端粒功能障碍、线粒体功能障碍、DNA损伤、表观遗传学改变、炎症反应和蛋白质稳态失衡等多种机制来促进IPF的发生发展.本文就细胞衰老在IPF中的作用和机制进行总结概述,不仅能够加深对IPF发病机制的认识,同时也能为IPF的预防、诊断和治疗提供理论支撑.
