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活化转录因子3对绿脓杆菌致急性肺损伤小鼠肺组织核因子-κB表达的影响
目的 探讨活化转录因子3(ATF3)对绿脓杆菌所致急性肺损伤小鼠肺组织NF-κB表达的影响.方法 采用荧光标记绿脓杆菌(PA)溶液(浓度为1.5× 108 cfu/ml)50μl经鼻滴注,构建C57BL/6野生型和ATF 3敲基因小鼠急性肺损伤模型,行肺组织切片及HE染色,观察肺组织病理变化.用Western blot的方法检测ATF3在小鼠肺组织中的表达,以及检测WT小鼠和ATF3-KO小鼠分别吸入生理盐水、PA后6h时肺组织P-P65、P-65、IKB-α表达的变化.结果 经鼻滴入PA6h后小鼠肺组织切片表现为:大量中性粒细胞浸润、肺泡结构破坏、肺泡出血及肺间质水肿,证实经鼻滴入PA诱导的急性肺损伤模型构建成功.野生型小鼠吸入生理盐水后肺组织中ATF3于3h达高峰,与空白组及6、12、24 h表达存在明显差异(P＜0.05);野生型小鼠吸入PA后肺组织中ATF3分别于3h及24h处高峰,其中24 h峰值高于3h峰值,均较空白组存在显著差异(P＜0.05).ATF3-KO小鼠吸入PA(KA组)6h后P-P65、P-65、IKB-α表达显著高于KC组及WA组、WC组,存在显著差异(P＜0.05).结果显示,吸入PA后ATF3-KO小鼠NF-κB活性明显增加.结论 TLR4/NF-κB信号通路可能是ATF3调控ALI肺部炎症损伤的途径之一.
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活化转录因子3与急性肺损伤
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由各种直接和间接损伤导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,进而发生急性低氧性呼吸功能不全.其由多种炎症细胞(巨噬细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞等)介导,导致肺脏局部炎症反应和炎症反应失控所致的肺毛细血管膜损伤,是临床常见危重症,病死率高,发病机制非常复杂,且不完全明确,为常见的进展迅速的炎症性肺疾病[1-3].急性肺损伤的发病机制较多,多由细菌内毒素引起.内毒素的活性成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是ALI的重要致病因子,肺脏是其损伤的敏感靶器官之一.
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转录因子ATF3/ATF4调控抗氧化系统与慢性阻塞性肺疾病
氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病主要发病机制之一.转录因子转录激活因子3/转录激活因子4在氧化应激条件下能与核因子相关因子-2相互作用,调节抗氧化酶的表达,进一步探讨其在氧化应激中的表达、作用及机制将为慢性阻塞性肺疾病的防治提供新的理论依据.
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血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂EMA401作用于神经病理性疼痛模型大鼠的行为学评估及镇痛效应机制
背景:慢性疼痛的发病率高,病程长,治疗效果差,疼痛的发病机制未完全明确,镇痛药物的研究及镇痛机制的探索是目前研究的热点.目的:研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂 EMA401对大鼠坐骨神经缩窄致神经病理性疼痛模型机械缩足阈的影响及可能的作用机制.方法:SD大鼠随机分为5组,假手术组只暴露坐骨神经,不做任何结扎;其余各组均建立坐骨神经缩窄模型.根据EMA401灌胃剂量分为2 mg/kg,5 mg/kg,10 mg/kg组,假手术组和模型对照组大鼠每天灌胃NaCl溶液.在术前1 d及术后3,7,14 d,检测各组大鼠机械缩足阈行为学指标;行为学检测完毕后取各组大鼠取脊髓背根神经节,采用Western Blotting法检测胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、活化转录因子3的表达.结果与结论:①与模型对照组相比,EMA401可提高坐骨神经缩窄大鼠机械缩足反射阈值(P < 0.05);②与模型对照组相比,EMA401可降低背根神经节内胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、活化转录因子3表达(P < 0.05),与2 mg/kg EMA401组相比,5 mg/kg,10 mg/kg EMA401组术后3,7,14 d胶质纤维酸性蛋白、脑源性神经营养因子、活化转录因子3表达量均显著降低(P < 0.05);③结果表明,EMA401对坐骨神经缩窄模型大鼠有明显的镇痛效应,其机制可能与抑制脊髓背根神经节内星形胶质细胞活化,降低脑源性神经营养因子表达,进而抑制以活化转录因子3表达增多为特点的背根神经节神经元活化有关.
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前列腺癌组织中分化抑制蛋白1相互结合蛋白的分离
目的:分离前列腺癌组织中细胞分化抑制蛋白1(Id1)的相互结合蛋白,以探讨Id1在前列腺癌中的作用途径和机制.方法:首先构建PolyHis-Id1的表达载体pET-28a/Id1,并在大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,然后采用牵出试验钓取前列腺癌组织中的Id1相互结合蛋白.结果:蛋白电泳并染色后发现一清晰蛋白条带,用活化转录因子3抗体经Westem印迹尝试检测发现其确为活化转录因子3.结论:在人前列腺癌组织中,Id1可能与活化转录因子3相互结合发挥效应.
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基因芯片筛选急性肺损伤小鼠模型肺组织中活化转录因子3相关差异基因
目的 利用基因芯片技术筛选LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺组织中与活化转录因子3(acting transcription factor 3,ATF3)相关的差异基因表达,以发现与ATF3可能相互作用的基因.方法 采用基因芯片技术筛选野生型C57小鼠和ATF3敲基因小鼠经LPS处理后肺组织中的差异表达基因.进一步采用RT-PCR技术对重点基因的表达进行验证.结果 与野生型C57小鼠比较,ATF3敲基因小鼠共筛选出1 692个差异基因,有21个与炎症调控相关的基因表达差异明显,其中,Myo18a、Mest、Gpr124、Rcan2、Tnfsf15、Ltbp3、Cdh2、Ppm1f、Spns2、Rarres2、Cgn、Mmrn2、Crb3、Adamts2、Mrc2、Sh3tc2、Cdk5 rap1、Cenpf共18个基因在ATF3敲基因小鼠肺组织中表达明显上调;Padi4、Wfdc82个基因表达明显下调.对重点基因Tnfsf15(又称为TL1A)进一步验证,RT-PCR检测结果显示,表达趋势与基因芯片一致.结论 TL1A可能参与了ATF3对LPS诱导的急性肺损伤的炎症保护作用.
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慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中ATF3与ATF4对γ-GCS表达的影响
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者肺组织中活化转录因子3 (ATF3)、活化转录因子4 (ATF4)的表达变化,以及ATF3和ATF4对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨其在慢阻肺发病中的作用.方法 收集伴或不伴慢阻肺并行肺叶切除的肺癌患者临床肺组织标本40例(慢阻肺组和对照组各20例),取材标本均为远离原发肺癌病灶5 cm以上、肉眼观察无肺癌浸润的外周肺组织.所有患者术前均详细询问病史,进行体格检查、胸部X线片或肺部CT以及肺功能检测.应用原位杂交及免疫组化检测患者肺组织中ATF3、ATF4、γ-GCS重链亚基(γ-GCS-HS) mRNA及蛋白的表达,应用免疫共沉淀法(CO-IP)检测ATF3、ATF4与γ-GCS-HS蛋白之间的相互作用,并对ATF3、ATF4 mRNA及蛋白与γ-GCS-HS mRNA及蛋白进行相关分析.结果 慢阻肺患者肺组织中ATF3、ATF4、γ-GCS-HS mRNA及蛋白呈强阳性表达,较对照组显著升高(P＜0.01).在γ-GCS-HS抗体捕获的免疫沉淀中,ATF3、ATF4抗体均可杂交出明显的蛋白条带,且慢阻肺组较对照组明显增强(P＜0.01).相关分析显示肺组织中ATF3、ATF4蛋白表达与γ-GCS-HS mRNA及蛋白表达均呈明显正相关(P＜0.01);ATF3、ATF4、γ-GCS-HS蛋白表达与FEV1％pred、FEV1/FVC均呈明显正相关(P＜0.01).结论 在慢阻肺患者发病过程中,氧化应激诱导转录因子ATF3和ATF4过表达,ATF3和ATF4可能通过影响γ-GCS mRNA和蛋白的表达而发挥抗氧化保护作用.
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转录因子ATF3和ATF4在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的表达及作用
目的:研究活化转录因子3(ATF3)和活化转录因子4(ATF4)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中的定位和表达,探讨其在COPD发病中的可能作用及意义.方法:采用气管内注入脂多糖和熏香烟的方法复制大鼠COPD模型.观察COPD大鼠和正常对照组大鼠肺组织病理学改变,检测肺功能;应用原位杂交、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、Western blot检测大鼠肺组织中ATF3、ATF4 mRNA及蛋白的表达情况.结果:COPD组的肺功能指标(FEV(0.3)、FEV(0.3)/FVC、PEF)明显降低,光镜下肺组织病理改变符合COPD的特征性改变.免疫组化及Western blot显示COPD组ATF3、ATF4蛋白水平较对照组升高(P<0.05);原位杂交及RT-PCR结果显示ATF3、ATF4 mRNA表达水平在COPD组显著高于对照组(P<0.05).结论:COPD大鼠肺组织ATF3、ATF4表达明显上调,ATF3、ATF4可能参与调控COPD的氧化/抗氧化失衡.
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活化转录因子3、4和ki-67在皮肤鳞癌中的表达意义
目的：探讨活化转录因子3、4和ki-67在皮肤鳞癌和基底细胞癌中的表达及其临床意义。方法：从笔者所在医院病理科储存的蜡块中随机选择96例皮肤鳞癌和118例基底细胞癌标本，采用免疫组织化学方法检测组织中活化转录因子3、4和ki-67的表达，分析其表达意义。结果：活化转录因子3、4在皮肤鳞癌中的表达较基底细胞癌高，差异有统计学意义（P值分别为0.003和0.001）。Ki-67在两种皮肤癌中的表达无显著差异（P值为0.718）。ATF3、4的表达强度和皮肤鳞癌分化程度成正相关，即分化程度低越低，表达强度越高（r=0.395 P=0.000和r=0.303 P=0.001）。结论：活化转录因子3、4可以作为鉴别皮肤鳞癌和基底细胞癌可靠的蛋白标记物和皮肤鳞癌恶性程度及预后的判断指标。
