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PTPN12甲基化调控胃癌细胞增殖的研究
目的：探讨胃癌细胞PTPN基因启动子区甲基化及其表达与细胞生长周期的影响。方法采用甲基化特异性PCR法（ MSP）检测不同分化胃癌细胞（ AGS、MKN45、SGC7901、MGC803及MKN28）及正常胃黏膜细胞株（GES）中PTPN12基因甲基化状态；Western blot检测各细胞系PTPN12表达水平；流式细胞术检测甲基化抑制药物5-氮杂胞嘧啶核苷（5-azacytidine，5-AzaC）及特异性siRNA处理后胃癌细胞生长周期变化。结果各胃癌细胞株均有PTPN12基因启动子的甲基化，甲基化水平与PTPN12表达相关，且与胃癌细胞分化程度相关。5-AzaC处理后，各胃癌细胞株PTPN12蛋白表达均有所恢复。 PTPN12甲基化程度高且表达量低的MKN45进行5-AzaC处理后，细胞生长被阻滞在G0／G1期[（56.82±6.37）％]，与对照相比差异有统计学意义（P＜0.05）。此外，PTPN12 siRNA转染低甲基化且高表达PTPN12的MGC803胃癌细胞，S期细胞相对增多[（51.32±7.32）％，P＜0.05]，细胞增殖能力增强。结论胃癌细胞PTPN12基因启动子区异常甲基化，可能是导致其表达异常的主要原因，也可能是导致胃癌发生、发展的重要机制之一。
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TGF-β1在乳腺癌EMT中作用机制探讨
目的 乳腺癌的发病率不断上升,上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)在乳腺癌病变中广泛存在.本研究探讨TGF-β1在乳腺癌EMT中的作用及PTPN12在此过程中的作用和相关机制.方法 蛋白质印迹法检测TGF-β1处理乳腺癌细胞后EMT相关基因以及PI3K、p-AKT和mTOR的表达;免疫组织化学检测乳腺癌组织和癌旁组织中PTPN 12表达;免疫共沉淀检测PTPN12和p-AKT是否有直接相互作用;蛋白质印迹法检测转染LV5-PTPN12后,E-Cadherin、Vimentin、Fibronectin、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白的表达情况;裸鼠皮下成瘤检测PT-PN12对乳腺癌成瘤大小以及体积的影响.结果 NC组和TGF-β1组Vimentin蛋白表达量分别为(17.2±2.3)％和(79.7±8.3)％,t=12.5,P=0.008;Fibronectin蛋白表达量分别(17.4±2.3)％和(77.4±7.5)％,t=12.1,P=0.016.PTPN12在乳腺癌组织中表达明显降低,PTPN12与乳腺癌病理分期分级以及腋窝淋巴结受累数目有关,NC组和TGF-β1组PI3K蛋白表达量分别为(18.6±1.9)％和(76.3±5.9)％,t=12.1,P=0.029;p-AKT蛋白表达量分别为(27.6±3.2)％和(54.1±6.2)％,t=11.7,P=0.013;mTOR蛋白表达量分别为(35.2±3.2)％和(72.2±5.3)％,t=18.3,P=0.031;PTPN12和p-AKT有直接相互作用;PTPN12可以抑制TGF-β1诱导的EMT,LV5-PTPN12组和LV5-NC组Vimentin蛋白表达量分别为(17.2±2.3)％和(79.7±8.3)％,t=11.9,P＜0.018;Fibronectin蛋白表达量分别为(17.4±2.3)％和(77.4±7.5)％,t=10.2,P=0.019;E-Cadherin蛋白表达量分别为(82.1±8.4)％和(0.22±0.02)％,t=13.7,P＜0.001.PTPN12可以通过PI3K/AKT信号通路起作用,LV5-PTPN12组和LV5-NC组PI3K蛋白表达量分别为(13.2±1.2)％和(56.2±5.1)％,t=7.1,P=0.021;p-AKT蛋白表达量分别为(23.5±2.5)％和(77.1±6.3)％,t=9.2,P=0.008;mTOR蛋白表达量分别为(28.2±3.1)％和(71.7±6.1)％,t=12.8,P=0.032.体内实验表明,与对照组相比,LV5-PTPN12组荷瘤小鼠肿瘤体积和体质量都明显变小,LV5-PTPN12组和LV5-NC组肿瘤体积分别为(2.8±0.2)和(0.4±0.02) cm3,t'=13.8,P＜0.001;体质量分别为(3.1±0.3)和(0.4±0.02)g,t'=18.6,P＜0.001.结论 PTPN12在TGF-β1作用下通过PI3K/AKT信号通路诱导乳腺癌的EMT中起抑制作用.
关键词： 乳腺癌 PTPN12 PI3K/Akt信号通路 TGF-β1 -
PTPN12在乳腺癌中的表达及其影响指标研究
目的 探讨PTPN12在乳腺癌中的表达情况及其影响指标.方法 选取2011年1月～2012年12月于汕头大学医学院第一附属医院诊治的60例乳腺癌患者为观察组,并选取同时期60例乳腺良性疾病患者为对照组,统计及比较两组患者的PTPN 12阳性表达率;比较观察组不同FPTPN12表达情况患者的生存期;比较观察组中不同分子分型、EGFR及VEGFR-3表达情况乳腺患者的PTPN12阳性表达率.结果 观察组患者的PTPN 12表达总阳性率低于对照组,且观察组中PTPN12阳性者的生存期长于PTPN12阴性者,同时观察组中不同分子分型、EGFR及VEGFR-3表达情况者的PTPN12表达总阳性率比较,差异均无统计学意义(均P＜0.05).结论 PTPNl2在乳腺癌中的表达呈现明显异常的状态,且其表达与患者的预后存在一定的关系,应重视对乳腺癌患者PTPN12的检测与干预.
关键词： PTPN12 乳腺癌分子分型 表皮生长因子受体 血管内皮生长因子受体3 -
miR-194在增龄性胸腺萎缩中的表达及靶基因研究
目的:检测增龄性胸腺萎缩过程中miR-194与PTPN12的表达水平变化,并分析二者相互作用,阐明其中的分子调节机制.方法:选用C57BL/6小鼠,分为4组:1月龄组、6月龄组、10月龄组和19月龄组,每组6只,雌雄各半.麻醉后取出胸腺组织,用CD45抗体与LS柱吸附洗脱,筛选出胸腺上皮细胞.实时荧光定量PCR与Western blot方法检测随年龄增长,胸腺上皮细胞中miR-194与PTPN12基因的表达变化趋势.体外实验共转染miR-194与PTPN12荧光素酶报告载体到HEK293细胞内,分别于24、48 h后检测自发荧光值.结果:随月龄增长,miR-194表达出现下调趋势(P<0.05),而PTPN12基因表达出现上调趋势(P<0.05),且二者呈负相关性(P<0.05).体外荧光素酶报告基因结果显示,miR-194与PTPN12基因3' UTR区域发生直接作用,并在48 h结合效率高.结论:PTPN12是miR-194靶基因之一,参与了增龄性胸腺萎缩过程,是调节胸腺上皮细胞功能的重要因子.
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PTPN12在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系
目的 观察乳腺癌组织中PTPN12的表达情况,初步探讨其可能作用的蛋白,并分析其与临床病理参数及预后的关系.方法 收集2005-2009年南方医院收治的84例乳腺癌患者的病理及临床资料,其中“三阴”乳腺癌患者50例,“非三阴”乳腺癌患者34例.采用免疫组化染色方法检测组织中PTPN12、EGFR的表达,并分析PTPN12表达与临床病理参数以及患者预后的关系.结果 “三阴”乳腺癌患者中PTPN12的缺失表达率、EGFR的阳性表达率显著高于“非三阴”乳腺癌患者(42.0％ vs 20.6％,P=0.041；76.0％vs 47.1％,P=0.007).PTPN12的表达与EGFR (r,=-0.208,P=0.058)、Her-2(r,=-0.250,P=0.022)存在负相关关系.PTPN12表达阴性的患者,其生存期更短.多因素分析表明PTPN12是乳腺癌独立的预后因子.结论 PTPN12在“三阴”乳腺癌中具有更高的缺失突变,它的表达与EGFR和Her-2负相关.PTPN12是乳腺癌独立的预后因子.
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以PTPN12为靶点的肝癌生物靶向治疗初探
目的 探讨抑癌基因PTPN12 在肝癌细胞系Hep-G2 中生物治疗肝癌的效果,揭示PTPN12 在临床应用上的潜在意义.方法 在Hep-G2 细胞中顺转、稳定转染PTPN12 基因后,通过MTT、Western Blot、荧光定量PCR 分析抗肿瘤作用.结果 转染PTPN12 后的Hep-G2 细胞增殖慢,凋亡率高,PTPN12 蛋白表达量高.结论 PTPN12 基因在肝癌表达上调,能有效抑制肿瘤细胞的生长,从而促进肿瘤细胞的凋亡.因此,以PTPN12为靶点开展生物治疗可能是一种新的治疗手段.
