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哺乳类雷帕霉素靶蛋白信号通路对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞Smad 3蛋白和Ⅰ型胶原表达调控的实验研究
目的 探讨哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对柯萨奇病毒B 3(CVB 3)诱导的心肌成纤维细胞Smad 3蛋白(Smad 3)和Ⅰ型胶原表达的调控作用.方法 CVB 3感染原代培养的SD鼠心肌成纤维细胞,用mTOR的抑制剂-雷帕霉素阻断mTOR信号通路,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测细胞Smad 3和Ⅰ型胶原表达.结果 (1)雷帕霉素干预心肌成纤维细胞48 h,RT-PCR检测mTOR/β-肌动蛋白(actin)光密度值分别为1 nmol/L组0.381±0.022、10 nmol/L组0.282±0.014、100 nmol/L组0.263±0.012,均低于对照组1.45±0.04,10 nmol/L组和100 nmol/L组低于1nmol/L组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).10 nmol/L雷帕霉素干预心肌成纤维细胞0 h(对照组)、24 h、48 h、72 h,其mTOR/β-actin光密度值分别为0.341±0.022、0.203±0.021、0.163±0.022、0.144±0.013,光密度值随雷帕霉素干预时间的延长而降低(P＜0.05).(2)RT-PCR和Western blot测得对照组、CVB 3组、CVB 3+雷帕霉素组心肌成纤维细胞Smad 3/β-actin光密度值分别为0.63±0.06、1.18±0.03、0.77±0.08,Smad 3/β-actin灰度值分别为0.89±0.07、2.27±0.13、0.131±0.013.RT-PCR测得上述各组Ⅰ型胶原/β-actin光密度值分别为1.13±0.06、1.303±0.012、0.82±0.03.以上结果显示CVB 3组光密度值/灰度值高于对照组,CVB 3+雷帕霉素组低于CVB 3组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 雷帕霉素抑制CVB 3诱导的心肌成纤维细胞Smad 3和Ⅰ型胶原表达,提示mTOR信号通路可能通过调控Smad及Ⅰ型胶原表达,在CVB.3诱导的心肌纤维化过程中起重要作用.
