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MGP基因的重组及在大肠杆菌中的表达
目的 重组骨质疏松候选基因基质Gla蛋白(MGP)基因使其蛋白在大肠杆菌中高效表达.方法 利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)从正常人肺组织总RNA中扩增出MGP基因cDNA序列,与克隆pGEM-Teasy载体相连,测序为完整的编码序列后与表达载体pTrcHisB构建重组体,转化入大肠杆菌Top 10后用IPTG诱导,Western bloting证实蛋白表达.结果 克隆至pGEM-Teasy载体及pTrcHisB载体中的MGP基因cDNA序列与基因库完全一致.转入大肠杆菌后经IPTG诱导有蛋白的表达,Western bloting证实诱导后2、3、4 h蛋白的表达量显著增加.结论 成功重组的人MGP基因,重组体在大肠杆菌内能成功高效地表达.IPTG诱导后蛋白的表达为时间依赖性.
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血清TNF-α及MGP水平与维持性血液透析患者心脏瓣膜钙化的关系
目的 探讨血清肿瘤坏死因子(TNF-α)及基质Gla蛋白(MGP)水平与维持性血液透析(MHD)患者心脏瓣膜钙化(CVC)的关系.方法 纳入MHD患者66例及年龄、性别相匹配的健康人群31例,采用ELISA法检测血清TNF-α及MGP水平.超声心动图检测受试者是否伴有CVC.结果 与对照组比较,MHD患者血清TNF-α升高,MGP降低,且CVC发生率明显增高(JP均＜0.001);在MHD患者中,CVC组血清TNF-α明显较高(P＜0.05)而MGP较低(P＜0.01);另外,血清MGP水平与年龄、血清碱性磷酸酶、TNF-α均呈负相关性(P均＜0.05);多因素Logistic回归分析显示,透析龄和高血清TNF-α是CVC的独立危险因素(P ＜0.05,P＜0.01),高血清MGP是CVC的保护因素(P＜0.05).结论 血清TNF-α及MGP水平与MHD患者心脏瓣膜钙化密切相关,TNF-α同透析龄一样,为CVC发生的独立危险因素,MGP为其保护因素.
