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能使体外培养细胞长期存活的技术
美国科学家的新研究表明Rho激酶抑制剂(Y-27632)与纤维母细胞饲养细胞合用能够诱导许多组织的正常上皮细胞以及肿瘤上皮细胞在体外无限增值,而不需要转导外源性病毒或细胞基因.例如原始前列腺和乳腺细胞重编程为基底细胞样干细胞样表型并在基底膜中形成有序的前列腺球和乳腺球.相较于筛选稀少的干细胞样细胞,在所述的生长条件下能够在活检组织获取后的5 d～6 d内产生2×106个细胞,能够从冷冻组织少于4个活细胞培养起来.持续的细胞增殖依赖于纤维母细胞饲养细胞和Y-27632两者,进行有条件重组的细胞(CRCs)保持了正常的核型和非致瘤性.该技术也能够有效建立人和啮齿类动物肿瘤细胞的培养系.例如,从人前列腺癌建立的CRCs表现出第13号染色体的不稳定性,在基底膜中的异常增殖以及在有严重合并免疫缺陷的老鼠中形成肿瘤.这种从少量活检样本和冷冻组织迅速产生许多肿瘤细胞的能力为基于细胞的诊断和治疗(包括测试化学敏感性)提供了很大机会并大大提高了生物银行的价值.另外,CRC方法能够对取自体内的上皮细胞进行遗传操作以及随后的自体体内评估.
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神经胶质瘤干细胞样细胞的分离鉴定及其生物学特性初探
目的 探讨神经胶质瘤干细胞样细胞的分离鉴定及其生物学特性.方法 采取流式细胞仪分选神经胶质瘤C6细胞中的侧群细胞作为观察组,非侧群细胞作为对照组,经3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2(MTT)法对细胞生长曲线进行绘制,对细胞克隆形成能力、球囊形成能力、细胞成瘤能力以及细胞CD133的表达进行检测分析.结果 神经胶质瘤C6细胞中侧群细胞所占比例为(4.32±1.41)%;侧群细胞生长速度较非侧群细胞快(P<0.05);在无血清条件下培养,侧群细胞具有形成球囊的特性,非侧群细胞无此特性;侧群细胞克隆形成率高于非侧群细胞(P<0.05);侧群细胞CD133表达水平高于非侧群细胞(P<0.05).结论 在神经胶质瘤中存在有典型的侧群细胞,且侧群细胞中干细胞标志蛋白CD133呈现为高表达,可以在侧群细胞中分选富集神经胶质瘤干细胞样细胞,值得关注.
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胰腺干细胞样细胞在胰腺内分泌肿瘤组织发生中的作用
对12例胰腺内分泌肿瘤进行光镜、电镜观察和免疫组化研究,所有肿瘤均观察到胰腺干细胞样细胞,位于肿瘤组织边缘区增生的小导管样结构中或散在分布.
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LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定
目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在.方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化.MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAMhigh、EPCAMlow和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布.3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAMhigh细胞中 CD44/EPCAM的表达.结果:LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别.CD44+/EPCAMhigh细胞增殖能力高于EPCAMlow细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期.以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而1×104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10).小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAMhigh细胞仍能少量表达CD44和EPCAM.结论:LoVo细胞中存在CD44+/EPCAMhigh结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAMhigh可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究.
关键词： 结肠癌 LoVo细胞株 肿瘤干细胞 干细胞样细胞 CD44/EPCAM -
黑素瘤干细胞样细胞及其靶向治疗研究进展
近年来,黑素瘤的免疫治疗取得了较大的突破,提高了其临床疗效,成为当前研究热点.大量研究发现,黑素瘤中存在干性细胞,它们具有特殊的分子表型、信号通路和肿瘤微环境,与肿瘤的增殖、侵袭、转移、复发和放化疗抵抗等密切相关,参与黑素瘤的发生发展.令人感兴趣的是,黑素瘤干细胞样细胞(melanoma tumor stem-like cells,MTSCs)代表了难治性和耐药性肿瘤细胞的主体,针对MTSCs的免疫治疗显示出较好的临床疗效和远期预后,成为黑素瘤免疫治疗的新方向.本文主要综述黑素瘤干细胞样细胞特异性表面标记分子及其分选方法、异常信号通路特征、免疫耐受性肿瘤微环境及其相关靶向免疫治疗的新进展,以期为研发黑素瘤免疫治疗新方法提供理论指导.
