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微小RNA-132对体内外肝癌细胞侵袭和转移的影响
目的 观察微小RNA-132(miR-132)对体内外人肝癌细胞侵袭和转移的影响,初步探讨其作用机制.方法 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(实时-qPCR)检测miR-132在4种肝癌细胞株(MHCC97H、HCCLYH、MHCC97L和SMMC-7721)、人正常肝细胞株HL-7702以及20例发生转移的肝癌组织和25例未发生转移肝癌组织中的表达.采用划痕实验、Transwell小室实验和经裸鼠尾静脉注射肝癌细胞形成的肝癌肺转移模型检验转染miR-132后对体内外肝癌MHCC97H细胞侵袭和转移的影响.蛋白印迹检测体外MHCC97H细胞中钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白α(α-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、纤连蛋白(fibronectin)和锌指E金结合同源盒蛋白2(zinc finger E-boxbinding bomeobox protein 2,ZEB2)蛋白的表达.免疫组织化学法检测肝癌肺转移灶组织中ZEB2的表达.结果miR-132在4种肝癌细胞株中的表达均明显低于人正常肝细胞(P＜0.05),在伴转移肝癌组织中miR-132的表达明显低于未转移肝癌组织,差异有统计学意义(P＜0.05).在体外实验,转染组细胞中miR-132的表达明显升高,细胞迁移和侵袭明显抑制,与对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).转染组细胞中E-cadherin和α-cadherin蛋白表达上调,而vimentin、fibronectin和ZEB2蛋白的表达下调,与对照组相比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).在体内实验中,转染组裸鼠肺转移灶数目明显减少,ZEB2蛋白表达下调.结论 miR-132对体内外肝癌细胞侵袭和转移有明显抑制作用,有望成为肝癌治疗的新靶点.
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微小RNA-132转染对体内外肝癌生长和凋亡的作用
目的 观察转染微小RNA-132 (miR-132)对体内外人肝癌细胞株MHCC97H生长和凋亡的影响,初步探讨其作用机制.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测45例肝癌组织及癌旁正常组织中miR-132的表达,CCK-8法、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验和TUNEL实验检验转染miR-132后对体内外MHCC97H细胞生长和凋亡的作用,Western blot法检测体外MHCC97H细胞中p-AKT、Survivin和Caspase 3蛋白的表达,免疫组织化学法检测体内肿瘤组织中Ki-67、Survivin和Caspase 3的表达.结果 miR-132在肝癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.05).在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞中miR-132的表达明显升高,细胞增殖明显被抑制,G0/G1期细胞比例明显上升,S期细胞比例明显下降,凋亡细胞显著增加(P均＜0.05).转染组细胞中Survivin和p-AKT的表达下调,Caspase 3的表达上调,与空白对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.05).在体内实验中,转染组裸鼠皮下移植瘤生长明显被抑制,凋亡肿瘤细胞明显增加,Survivin和Ki-67蛋白表达下调,而Caspase 3表达增加(P均＜0.05).结论 转染miR-132对体内外肝癌缅胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,miR-132有望成为肝癌治疗的新靶点.
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微小RNA-132在脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应中的表达变化
目的 观察脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后微小RNA-132(miR-132)的动态变化,以初步探讨miR-132在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用.方法 将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组和以终浓度1 mg/LLPS刺激3、6、12及24 h组,分别收集各时间点上清液及细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-cα (TNF-α)、白细胞介素(IL-1β和IL-6)的含量,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-132的表达.结果 与空白对照组相比,LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后3h上清液中TNF-α含量(ng/L:364.83±46.29比34.07±8.62,P＜0.01)、IL-1β含量(ng/L:153.83±43.67比32.33±10.62,P＜0.05)、IL-6含量(ng/L:183.85±43.52比42.62±11.21,P＜0.05)即明显升高,随时间延长均逐渐升高至12h达峰值(TNF-α:605.09±57.13,IL-1β:377.09±28.55,IL-6:558.04±77.45,均P＜0.01),24 h时均有所下降(TNF-α:281.95±41.61,IL-1β:263.17±51.36,IL-6:438.74±79.94),但仍显著高于空白对照组(均P＜0.01).LPS刺激后3 h,miR-132表达水平较空白对照组上调了(1.12±0.11)倍(P=0.995),6、12、24h miR-132表达较空白对照组分别上调了(5.98±0.65)、(7.64±0.53)和(8.92±0.83)倍(均P＜0.01).结论 LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后,miR-132表达随时间延长逐步上调,其可能参与调控大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应.
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微小RNA-132和高迁移率族蛋白1在脓毒症患儿外周血单个核细胞中的表达及临床意义
目的 探讨微小RNA-132(miR-132)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)在脓毒症患儿外周血单个核细胞中的表达及临床意义.方法 选取脓毒症患儿87例,根据患儿预后情况分为死亡组(25例)和非死亡组(62例),以体检健康儿童50名作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测脓毒症患儿确诊后12 h内和对照组体检当日外周血单个核细胞中miR-132和HMGB1 mRNA表达,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-132和HMGB1 mRNA相对表达水平对患儿预后的影响.结果 脓毒症患儿外周血单个核细胞中miR-132和HMGB1 mRNA相对表达量均高于对照组(P<0.05);死亡组患儿外周血单个核细胞中miR-132和HMGB1 mRNA相对表达量均高于非死亡组(P<0.05);Pearson相关分析显示,脓毒症患儿外周血单个核细胞中miR-132相对表达量与HMGB1 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.521,P<0.001);ROC曲线分析显示,miR-132、HMGB1 mRNA相对表达量在预测患儿预后时,曲线下面积(AUC)分别为0.921[95％可信区间(CI)0.853～0.989]、0.858(95％CI 0.769～0.947),敏感性分别为84.0％、68.0％,特异性分别为87.1％、90.3％;二者联合检测时,AUC为0.941(95％CI 0.878～1.000),敏感性为88.0％,特异性为91.9％.结论 miR-132和HMGB1在脓毒症患儿外周血单个核细胞中表达升高,且与患儿预后有关,可作为早期评估患儿预后的指标.
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原发性胆汁性肝硬化患者血清中miR-132和miR-212的表达及意义
目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血清中微小RNA-132(miR-132)和miR-212水平的变化及其临床意义.方法 收集PBC患者、其他肝病患者和健康对照组各37例血清标本;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-132和miR-212的水平,并分析其与疾病严重程度的相关性.结果 与健康对照组及其他肝病组比较,PBC患者血清miR-132和miR-212的水平显著降低(P均＜0.05).PBC组血清miR-132与ALP、AST呈负相关(r=-0.67,r=-0.61,P均＜0.05);而血清miR-212与ALP、AST无相关性(r=-0.34,r=-0.25,P均＞0.05).结论 miR-132和miR-212可能参与了PBC的发病机制,有望作为PBC的诊断和治疗靶点.
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重性抑郁障碍患者外周血单个核细胞中微小RNA-132治疗前后的表达水平研究
目的:探讨重性抑郁障碍(MDD)患者外周血单个核细胞(PBMC)中微小RNA(miR)-132表达水平在抗抑郁治疗前后的改变. 方法:给予32例MDD患者(MDD组)8周的抗抑郁药治疗;以治疗后汉密尔顿抑郁量表24项(HAMD-24)评分的减分率≥50%为有效;治疗前后采用实时定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)对MDD组患者PBMC中miR-132表达进行定量分析;并与30名健康对照者(对照组)比较. 结果:基线期MDD组PBMC中miR-132相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P=0.226);治疗后MDD组PBMC中miR-132相对表达量较基线明显上调(t= -2.356,P=0.025);且有效患者miR-132表达水平较基线明显升高(t= -2.804,P=0.01),无效患者治疗前后PBMC中miR-132表达水平比较差异无统计学意义(z= -0.943,P=0.438). 结论:MDD患者PBMC中miR-132表达水平的变化可能与抗抑郁药的疗效有关.
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老年痴呆症患者血清中miR-132的表达及临床意义
目的 探究微小RNA-132(miR-132)在老年痴呆症患者血清中的表达水平及临床意义.方法 选择我院80例老年痴呆症患者进行研究,其中阿尔茨海默病(AD)组37例,轻度认知功能障碍(MCI)组43例,另选取同期在我院正常体检者48例作为对照组,实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)测定血清中miR-132水平,比较三组间临床指标以及血清中同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、脂联素(ANP)水平、miR-132水平.结果 三组受检者在教育程度、血清LDL-C水平、Hcy、ANP、MMSE评分比较,差异均有统计学意义(P<0.05).AD组患者的血清LDL-C水平、Hcy水平高于对照组与MCI组, MCI组血清LDL-C水平、Hcy水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).AD组患者的血清ANP水平、精神状态评分(MMSE)低于对照组和MCI组,MCI组血清ANP水平、MMSE评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).AD组血清miR-132水平低于对照组、MCI组,MCI组miR-132水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).直线相关性分析显示血清miR-132水平与血清Hcy水平呈负相关(r=-0.586,P=0.034),血清miR-132水平与ANP水平、MMSE评分呈正相关(r=0.562,P=0.041;r=0.624,P=0.023).结论 miR-132可能参与老年痴呆症的发病过程,可作为老年痴呆症诊断和治疗的血清指标.
关键词： 老年痴呆 微小RNA-132 同型半胱氨酸 实时荧光定量聚合酶链反应 临床意义
