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阿霉素诱导的局灶节段性肾小球硬化小鼠TGF-β／MAPK 信号通路的表达
目的：观察阿霉素（ADR）诱导的局灶节段性肾小球硬化（FSGS）模型小鼠肾脏转化生长因子-β1（TGF-β1）／丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的表达。方法将8周龄雄性 BALB／c小鼠（18～23 g）分为实验组和对照组，用 ADR 尾静脉注射进实验组小鼠，生理盐水注射入对照组，分别收集各组小鼠血、尿及肾脏组织。利用 ELISA 方法检测尿蛋白及血清肌酐、尿素氮，观察肾脏病理改变，实时荧光定量 PCR 技术检测转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad7和 IV 型胶原（Col IV）mRNA水平，Western 印迹方法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK1／2）和磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）的蛋白水平。采用 Graphpad Prism 5软件对结果进行单因素方差分析，P ＜0．05为差异有统计学意义。结果实验组显示在第3天出现24 h 尿蛋白增多，第22天升高更明显，与对照组相比差异有统计学意义（t ＝8．718，P ＜0．001）；实验组中血清肌酐及尿素氮与对照组相比，第22天升高（t ＝5．12，t ＝11．7；P ＜0．001），第32天达高峰（t ＝25．7，t ＝16．21；P ＜0．001）；肾脏病理：实验组第22天可见部分肾小球系膜基质增多和系膜细胞增生，第32天出现系膜基质和系膜细胞轻至中度增生，节段加重，伴足细胞损伤，且可发现血管袢和肾小球囊粘连，符合 FSGS 的病理特点；荧光实时定量 PCR 结果显示：实验组第22天时肾脏 TGF-β1 mRNA 水平明显高于对照组（q ＝5．091， P ＜0．05），Col IV mRNA 相对表达量随着诱导天数而增加，在第32天时达到高，与对照组相比差异有统计学意义（q ＝5．222，P ＜0．05）；Smad7的表达量在第32天时显著减少，与对照组比较差异有统计学意义（q ＝10．64，P ＜0．01），与第22天比较差异亦有统计学意义（q ＝9．643，P ＜0．01）；Western印迹结果显示，第22天实验组 p-ERK1／2蛋白水平较对照组降低（q ＝5．570，P ＜0．05），第32天较对照组降低更明显（q ＝8．881，P ＜0．01）；第22天实验组 p-p38MAPK 表达较对照组增加（q ＝30．65， P ＜0．001），第32天 p-p38MAPK 较对照组比较差异仍有统计学意义（q ＝31．76，P ＜0．001）。结论 FSGS模型小鼠 TGF-β／MAPK 信号通路的表达量较对照组相比明显增加，提示 TGF-β／MAPK通路有可能被激活从而参与 FSGS 的发病过程。
