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胎儿游离DNA用于无创产前检测21、18、13三体综合征的临床研究
目的 探讨孕妇外周血中胎儿游离DNA在无创产前诊断21、18、13三体综合征的临床意义.方法 收集2012年1月至2013年12月在广州医科大学附属第二医院妊娠11～32周进行无创产前检测的单活胎孕妇433例,提取胎儿游离DNA,制备测序文库,应用大规模平行测序技术,获得胎儿患染色体三体综合征的风险,并将无创结果与核型分析及分娩结局进行分析.结果 433例无创产前检测孕妇中,胎儿游离DNA高风险9例,其中21三体6例,18三体1例,13三体1例,Turner综合征1例,均与羊水/脐血培养细胞染色体核型分析结果相符;成功随访374例,5例因非染色体原因终止妊娠,369例成功分娩,新生儿外貌及智力发育未发现明显异常,其中6例新生儿外周血细胞染色体核型分析与无创结果相符.结论 在孕妇中采用无创产前检测21、18、1 3三体综合征是可行的,可有效降低后续的侵入性产前诊断的数量,值得临床推广应用.
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孕妇外周血游离胎儿 DNA 用于无创产前检测的研究进展
产前检查的主要目的对出生之前胎儿的染色体及基因的异常进行确诊，对家庭的优生优育以及预防控制新生儿发病都有十分重要的临床意义。传统的侵入性产前检查，包括：羊膜穿刺、绒毛取样（chorionic vil－lous sampling，CVS）和脐带血穿刺，都可能对胎儿及孕妇产生一定的危害，并存在0．5％～1％流产的风险。利用微创或非创伤性的方法检测胎儿遗传性状的方法一直是科研及临所求追的目标，孕妇外周血游离胎儿DNA（cell－free fetal DNA，cffDNA）的发现则为无创产前检测（non－invasive prenatal testing，NIPT）技术提供了一个全新的策略，并且在临床上得到广泛的应用。特别是近年来快速发展的大规模平行测序（massively parallel sequencing，MPS）技术，更加提高了检测的灵敏度和特异性，使得外周血 cffDNA 应用于胎儿性别、血型、单基因病、染色体相关疾病的检测方面，都得到了长足的发展。本文将对孕妇外周血 cffDNA 作简要介绍及近年来在临床的应用作一综述。
关键词： 无创产前检测 外周血游离胎儿 DNA 大规模平行测序 -
5997例母血胎儿游离DNA无创大规模平行测序筛查胎儿染色体数目异常
目的 对比观察母血胎儿游离DNA大规模平行测序(massively parallel sequencing,MPS)无创筛查对常见染色体数目异常的检测能力.方法 2011年6月至2012年11月在第三军医大学西南医院产前诊断中心共募集5 997例孕妇参与本项研究,年龄18 ～46岁,孕周12～36周.抽取孕妇静脉血5 mL,分离胎儿游离DNA,常规Barcoding建库,Illumina GAⅡx测序,测序片段用基于二元假设的f检验和L-score分析.测序提示异常患者进行传统核型分析确认.结果 5 997例患者,母血胎儿游离DNA MPS提示染色体异常患者113例.提示异常的患者有89例做了核型对比分析,21-三体符合率100％ (28/28),18-三体符合率87.5％ (7/8),性染色体异常符合率33.3％ (14/42).传统唐氏综合征筛查对21-三体的漏检率为11.8％(2/17),而MPS方法无一漏检.年龄(P =0.261)和孕周(P=0.309)对MPS的异常检出率没有显著影响.结论 无创MPS检测对21-三体筛查的准确性和可信度高,优于传统唐氏综合征筛查方法,适用于21-三体胎儿的产前初筛,以降低羊水/脐血穿刺有创检测比例.
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基于大规模平行测序的无创检测技术在胎儿染色体缺失或重复检测中的应用
目的 探讨大规模平行测序的无创基因产前检测技术在染色体缺失或重复检测中的应用.方法 选择产前筛查疑为高危的孕妇629人,应用大规模平行测序的无创基因产前检测技术对孕妇外周血血浆中胎儿游离DNA进行分析,对检出可疑缺失或重复者应用侵入性技术取样和传统核型分析或分子生物学技术进行验证,并随访至胎儿引产或出生,对于签订知情同意书者进行引产胎儿尸体解剖.结果 在629位高危孕妇中,检出13例染色体异常.其中9例为非整倍体,4例结构异常.4例结构异常中,例1为dup(18q)(14.35 Mb),del(18q)(21.34 Mb),例2为dup(3q)(35Mb),两例分别经脐静脉血和羊水细胞核型分析得到验证,终止妊娠后对胎儿进行了尸体解剖;例3和例4为dup (7)(q,7.0Mb),两例dup(7q)通过羊水细胞进行array-CGH和核型分析确认为假阳性,胎儿足月出生,表型正常.结论 基于大规模平行测序的无创基因产前检测技术对大于10Mb的染色体缺失或重复的检出率较高且较可靠,具有良好的应用前景,在无创性产前检测中具有较好的应用前景.
关键词： 大规模平行测序 无创产前基因检测技术 染色体缺失 染色体重复 -
大规模平行测序法产前检测胎儿染色体非整倍性畸变
目的 寻找降低唐氏筛查假阳性和假阴性率的方法,减少有创产前诊断人数.方法 对2011名孕妇血浆DNA进行大规模平行测序,对测序结果进行生物信息学和统计学分析,得出风险值,风险值高的孕妇进行羊水核型分析.结果 在2011名孕妇中发现10例21三体,1例18三体和1例13三体.结论 大规模平行测序方法能够准确检出胎儿染色体非整倍性畸变,21三体、18三体和13三体的检出率达100％.
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大规模平行测序在混合斑检测分析中的应用前景
混合斑是性犯罪案件中常见的生物检材,对其分析及结果解释是法医学检验中的难点之一.目前用于混合斑检测的遗传标记主要依赖于毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)分离技术,而检测结果分析方法主要为包含率法及似然率法.由于CE技术分辨率有限,并不能充分发挥各遗传标记的效能,因此拆分混合斑的能力有限.近年来,兴起的大规模平行测序(massively parallel sequencing,MPS)技术不仅能获得遗传标记的碱基序列信息,而且具有并行检测多种遗传标记的能力,衍生出新的分析方法,为法医混合斑检测分析带来了新的契机.本文拟对混合斑分析常规技术及大规模平行测序技术在混合斑中的应用前景进行综述,旨在为后期研究及实践提供参考和借鉴.
