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水通道蛋白3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达变化及意义
目的 探讨水通道蛋白(AQP)3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达、分布及其在特发性羊水过多发病巾的作用.方法 2006年6月至2008年3月,选择在温州医学院附属第二医院产科住院并分娩的21例特发性羊水过多的足月产妇为研究组,同期分娩的30例羊水量正常的足月产妇为对照组.采用实时荧光定量PCR技术,检测两组产妇胎盘、胎膜中AQP3、9 mRNA的表达及分布,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白.过氧化物酶(SP)连接法枪测两组产妇胎盘、胎膜中AQP3、9蛋白的表达及分布.结果 (1)两组产妇羊膜、绒毛膜、胎盘中均可检测到AQP3、9 mRNA的表达.AQP3、9主要表达于羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘滋养细胞.(2)研究组羊膜上皮细胞AQP3、9 mRNA的表达分别为对照组的5.00倍和3.25倍,而研究组绒毛膜滋养细胞AQP3、9 mRNA的表达分别为对照组的2.03倍和2.08倍,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但是研究组胎盘滋养细胞AQP3、9 mRNA的表达均明显低于对照组,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)AQP3、9蛋白在研究组羊膜上皮细胞的表达强度为7.5±2.0、11.1±1.8,对照组为5.3 ±1.6、5.6±2.3,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);AQP3、9蛋白在研究组绒毛膜滋养细胞的表达强度为7.5±2.0、10.0±1.6,对照组为5.4±2.2、5.6±2.1,分别比较,差异也有统计学意义(P<0.05),但是AQP3、9蛋白在胎盘滋养细胞的表达强度(3.5±1.4、4.0 ±2.5)较对照组(5.6±1.3、7.1±2.9)明显下调(P<0.05).结论 AQP3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达变化可能为羊水增加后的代偿性反应,其调节机制尚待进一步研究.
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羊膜上皮细胞水通道蛋白3表达的cAMP-PKA信号通路调控机制
目的 探讨羊膜上皮细胞水通道蛋白3(AQP3)表达过程中环磷酸腺苷-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信号传导通路的调控机制.方法 选择2012年l至11月温州医科大学附属第二医院无并发症、羊水量正常的足月孕妇30例,剖宫产时取羊膜进行上皮细胞培养,并进行如下分组实验:(1)毛喉素组:不同浓度的毛喉素(forskolin,0、2.5、5、50、100 μmol/L)作用羊膜上皮细胞2h,再以适宜浓度的forskolin作用不同时间(0、1、2、10、20h)；(2)SP-cAMP组:不同浓度的PKA激动剂SP-cAMP(0、2.5、5、50、100 μmol/L)作用羊膜上皮细胞2h,再以适宜浓度的SP-cAMP作用不同时间(0、1、2、10、20 h)；(3)H-89组:不同浓度的PKA抑制剂H-89(0、5、10、50、100 μmol/L)作用人羊膜上皮细胞2h,再以适宜浓度H-89作用不同时间(0、1、2、10、20 h).采用ELISA方法检测各组细胞内CAMP水平及PKA活性,免疫细胞化学染色法检测AQP3表达定位,蛋白印迹法检测总cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(p-CREB)和AQP3表达水平,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖率.结果 (1)各组羊膜上皮细胞的胞质及胞膜均有AQP3蛋白表达.(2)各组不同浓度forskolin、SP-cAMP和H-89作用羊膜上皮细胞后,细胞增殖率无明显变化,分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)不同浓度forskolin作用羊膜上皮细胞2h,总CREB表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).cAMP水平、PKA活性、p-CREB和AQP3表达水平分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),2.5、5、50μmol/L forskolin作用后,上述4种因子均高于0μmol/L(P＜0.05)；而5 μmol/L明显高于2.5、50 μmol/L(P＜0.05).forskolin作用的适宜浓度为5μmol/L.(4)不同浓度SP-cAMP作用羊膜上皮细胞2h,细胞中cAMP和总CREB表达水平分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).PKA活性、p-CREB和AQP3表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；SP-cAMP浓度为5、50 μmol/L时,上述3种因子高于0μmol/L(P＜0.05)；50 μmol/L时明显高于5 μmol/L(P ＜0.05).SP-cAMP作用的适宜浓度为50 μmol/L.(5)不同浓度H-89作用羊膜上皮细胞2h,细胞中cAMP水平和总CREB表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).PKA活性、p-CREB和AQP3表达水平比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05)；H-89浓度为10、50和100μmol/L时,上述3种因子均低于0 μmol/L(P＜0.05),10 μmol/L时明显低于50和100 μmol/L(P＜0.05).H-89作用的适宜浓度为10 μmol/L.(6)5 μmol/L forskolin联合10 μmol/L H-89作用2h后,羊膜上皮细胞中总CREB表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).p-CREB与AQP3表达水平比较,低于5 μmol/L forskolin作用2 h(P ＜0.05),但高于10 μmol/L H-89作用2 h(P ＜0.05).结论 cAMP-PKA信号传导通路对羊膜上皮细胞中AQP3蛋白的表达起调控作用.
关键词： 羊膜 上皮细胞 水通道蛋白质3 环AMP依赖性蛋白激酶类 信号传导 -
水通道蛋白1和水通道蛋白3在羊水过少孕妇胎盘和胎膜的表达及其意义
目的 研究水通道蛋白1(AQP1)和AQP3在羊水过少孕妇胎盘、胎膜中的表达及分布,探讨其在羊水平衡途径中的作用. 方法 选取30例孤立性羊水过少的足月孕妇为研究组,同期分娩的30例正常羊水量的足月孕妇为对照组.分别采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学SP法,检测两组胎盘、胎膜组织中AQP1和AQP3 mRNA和蛋白的表达及分布. 结果 AQP1mRNA在研究组羊膜组织中的表达为对照组的0.31,AQP1蛋白在研究组羊膜组织中的表达为0.14±0.02,较对照组的0.25±0.03明显下调(P<0.05).而在胎盘、绒毛膜中的分布及表达强度两组间差异无统计学意义(P>0.05).AQP3 mRNA在研究组羊膜和绒毛膜中的表达分别为对照组的0.31和0.37,而胎盘中的表达为对照组的7.36.AQP3蛋白在研究组羊膜和绒毛膜中的表达分别为0.18±0.05和0.18±0.04,均较对照组的0.26±0.03和0.29±0.06明显下调(P<0.05),而在胎盘组织中的表达研究组为0.47±0.09,较对照组0.28±0.01明显上调(P<0.05). 结论 AQP1和AQP3在羊水过少孕妇胎盘、胎膜组织中表达的改变为羊水减少后的代偿性反应.
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水通道蛋白3在人羊膜上皮细胞中的表达及调控
目的 研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)信号转导通路对人羊膜上皮细胞中水通道蛋白3(aquaporin,AQP3)表达的调控作用. 方法 选择2011年1月至11月,在温州医学院附属第二医院产科分娩的不明原因羊水过少和羊水量正常的足月单胎妊娠产妇各10例,均为剖宫产分娩.原代培养羊膜上皮细胞,并用ERK1/2抑制剂U0126进行处理.浓度为0、5、10、20和40 μmol/L的U0126分别作用12 h；再选取使磷酸化ERK1/2表达水平低的浓度为佳浓度,作用于细胞0、2、6、12和24 h.采用免疫细胞化学染色检测AQP3蛋白定位,Western印迹检测总ERK1/2、磷酸化ERK1/2和AQP3蛋白表达水平.统计学方法采用t检验和方差分析. 结果 (1)羊水过少组磷酸化ERK1/2和AQP3的表达均低于羊水量正常组(ERK1/2:2.46±0.25与3.46±0.33；AQP3:1.56±0.10与2.34±0.18,t=9.243和13.292,P＜0.01).(2)羊水过少组中U0126不同浓度组间比较,总ERK1/2表达差异无统计学意义(F=0.365,P＞0.05)；5、10、20、40 μmol/L组磷酸化ERK1/2和AQP3表达均低于0μmol/L组(磷酸化ERK1/2:0.96±0.16、1.12±0.13、0.98±0.17、1.02±0.26与2.46±0.25; AQP3:1.10±0.09、1.12±0.08、1.13±0.06、1.11±0.06与1.56±0.10,P＜0.05)；但5μmol/L组与10、20和40 μmol/L组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).羊水过少组U0126作用的佳浓度为5 μmol/L.该浓度作用2h组磷酸化ERK1/2和AQP3表达均低于0h组(磷酸化ERK1/2:1.27±0.29与2.55±0.12;AQP3:1.44±0.12与2.15±0.09,P＜0.05),但2h组与6、12和24 h组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).佳作用时间为2h.(3)羊水量正常组和羊水过少组产妇的羊膜上皮细胞中,胞浆及胞膜均有AQP3蛋白阳性染色,但主要位于胞浆.U0126作用后,AQP3蛋白在羊膜上皮细胞中定位无明显改变. 结论 U0126可抑制羊水过少者的羊膜上皮细胞ERK1/2磷酸化及AQP3蛋白表达,提示MAPK/ERK1/2信号转导通路可能对羊膜上皮细胞中AQP3蛋白表达起调控作用,从而影响羊水量的平衡.
关键词： 水通道蛋白质3 细胞外信号调节MAP激酶类 羊膜 上皮细胞 羊水过少 -
水通道蛋白3在小鼠早期胚胎发育过程中的表达
目的 了解水通道蛋白3(aquaporin3,AQP3)在小鼠早期胚胎发育中的表达分布情况.方法 建立昆明小鼠控制性超排卵模型,收集小鼠四细胞期、八细胞期、桑葚期胚胎及早期囊胚,采用免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜对AQP3在小鼠早期胚胎中的表达模式及亚细胞定位进行检测分析.结果 在小鼠早期胚胎的4个时期中均能检测到特异性AQP3荧光信号,激光共聚焦显微镜观察到AQP3的分布部位在各时期不完全相同,在四细胞期胚胎及八细胞期胚胎主要定位于卵裂球核膜,桑葚期胚胎主要定位于细胞膜,而早期囊胚主要定位于滋养层细胞膜及细胞质.结论 AQP3对小鼠早期胚胎的发育可能具有潜在的调控作用.
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狭鳕鱼皮胶原蛋白肽经由水通道蛋白质3信号分子对过氧化氢诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用
目的：探讨狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤保护作用及分子作用机制。方法狭鳕鱼皮胶原蛋白肽50，100，200 mg·L-1组预处理12 h后，加入300μmol·L-1的H2O2培养12 h。采用酶生化法测定细胞上清液中过氧化氢酶（CAT），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），总超氧化物歧化酶（T-SOD）和总抗氧化能力（T-AOC）的水平。Western蛋白印迹法检测细胞内水通道蛋白质3（AQP3）表达水平。结果与正常组相比，狭鳕鱼皮胶原蛋白肽浓度小于300 mg·L-1时无细胞毒性。H2O2300μmol·L-1组的细胞存活率降低到54.0%（P<0.01）。预先给狭鳕鱼皮胶原蛋白肽50，100，200 mg·L-1组处理12 h使得细胞存活率相应增加到69.4%，79.4%和89.1%（P<0.05，P<0.01）。与模型组相比，狭鳕鱼皮胶原蛋白肽50，100，200 mg·L-1组的CAT，GSH-Px，T-SOD和T-AOC含量提高，其中200 mg·L-1组的CAT，GSH-Px， T-SOD和T-AOC含量相应升高了56.90%，48.68%，48.24%和71.43%（P<0.01）。与模型组相比，狭鳕鱼皮胶原蛋白肽200 mg·L-1组AQP3表达量减少得多，降低到67.1%（P<0.01）。结论狭鳕鱼皮胶原蛋白肽可保护H2O2诱导的氧化损伤，其机制可能与增强抗氧化能力和减少AQP3表达水平有关。
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AQP3在皮肤病发病机制中的作用研究进展
水通道蛋白3(AQP3)是一种细胞膜上跨膜运输水、甘油和尿素等小分子物质的转运蛋白,是人类皮肤中表达多的一种水通道蛋白亚型.AQP3不仅参与皮肤水合、皮肤屏障功能以及创伤愈合,维持皮肤的正常形态和功能,还与角质形成细胞的增殖和迁移甚至早期分化有关;AQP3的表达下调参与非曝光部位皮肤的自然老化.AQP3与特应性皮炎、白癜风、皮肤肿瘤、银屑病等多种皮肤病的发病机制相关.AQP3的多种作用使其成为相关皮肤疾病治疗和护肤品研发的新靶点.
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siRNA干扰水通道蛋白3和磷脂酶D2表达对A431细胞株生长和凋亡的影响
目的 探讨水通道蛋白3(AQP3)和磷脂酶D2(PLD2)在人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431细胞增殖和凋亡中的作用.方法 针对AQP3和PLD2各设计3条siRNA,用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞.用荧光定量PCR方法筛选出其中干扰效果佳的AQP3-siRNA和PLD2-siRNA,Western印迹法检测转染后AQP3和PLD2蛋白的表达水平.将A431细胞分为5组:正常培养组(不加任何处理),转染试剂组(加入转染试剂),阴性对照组(转染阴性对照siRNA),AQP3-siRNA组(转染AQP3-siRNA),PLD2-siRNA组(转染PLD2-siRNA).CCK8法检测AQP3和PLD2表达下调对A431细胞增殖的影响,膜联蛋白-V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 用脂质体转染法将siRNA导入A431细胞后,AQP3和PLD2的mRNA和蛋白表达均较阴性对照组明显下降.与阴性对照组比较,转染AQP3-siRNA后A431细胞增殖在24、48、72 h均受到明显抑制(t值分别为24.10、11.00、9.54,均P＜0.01);转染PLD2-siRNA后,A431细胞增殖同样在24、48、72 h均受到明显抑制(t值分别为30.47、7.02、8.73,均P＜0.01).与阴性对照组比较,转染AQP3-siRNA后,A431细胞凋亡在48 h和72 h均明显增加(t值分别为11.36、20.91,均P＜0.01);转染PLD2-siRNA后,A431细胞凋亡在72 h明显增加(t值为4.86,P＜0.05).结论 siRNA下调AQP3或PLD2表达可抑制A431细胞增殖,诱导A431细胞凋亡.
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水通道蛋白3在四种皮肤肿瘤中的表达
目的 探讨水通道蛋白3(AQP3)在四种皮肤肿瘤组织中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学方法检测30例脂溢性角化病、15例Bowen病、32例鳞状细胞癌、17例恶性黑紊瘤及15例正常人皮肤组织中AQP3的表达.结果 脂溢性角化病、Bowen病、鳞状细胞癌、恶性黑素瘤及正常人表皮组织中均存在AQP3蛋白的表达;脂溢性角化病皮损中AQP3表达水平与正常人对照组差异无统计学意义(P>0.05);Bowen病、鳞状细胞癌及恶性黑素瘤皮损中AQP3蛋白表达显著高于正常人对照组(P<0.01),其中鳞状细胞癌与恶性黑素瘤的表达强,均显著高于Bowen病(P<0.01),但鳞状细胞癌与恶性黑素瘤比较差异无统计学意义(P>0.05).此外,在鳞状细胞癌中AQP3的表达与肿瘤的分化有显著相关性(P<0.01);在已转移恶性黑素瘤中AQP3的表达显著高于未转移恶性黑素瘤(P<0.05).结论 AQP3在皮肤恶性肿瘤中表达上调.
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薏苡仁提取物对BALB/c小鼠特应性皮炎模型的疗效观察及机制探讨
目的 观察薏苡仁提取物(ESC)对BALB/c特应性皮炎(AD)模型小鼠的疗效,探讨其可能的作用机制.方法 SPF级雌性纯系BALB/c小鼠40只,随机分为空白组(8只)和模型组(32只).模型组应用2,4-二硝基氯苯(DNCB)和丙酮、橄榄油溶液构建AD模型.造模完成后,空白组8只、模型组8只小鼠立即处死,模型组另24只小鼠随机分为模型对照组、ESC组、基质组3组.模型对照组不予任何处理,ESC组、基质组背部及耳部分别外涂薏苡仁提取物和基质每日1次,连续28 d.每天肉眼观察皮损变化;测厚仪检测造模前、造模完成时及末次给药后12h小鼠左耳皮损厚度;末次给药后12h,处死3组小鼠,摘眼球取血,分离血清,并于背部皮损处取组织标本.组织切片后行HE染色和甲苯胺蓝染色观察皮损炎症细胞浸润情况;免疫组化法检测水通道蛋白3(AQP3)、Toll样受体(TLR)2、4表达变化;ELISA法检测血清IgE、白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)水平.结果 治疗28 d后,ESC组小鼠皮损好转,其临床症状评分(1.50±0.58)低于模型对照组(2.50±0.58) (P＜ 0.05),左耳部皮损厚度[(0.31±0.01)mm]低于模型对照组[(0.33±0.01) mm] (P＜ 0.05),每高倍视野下浸润的肥大细胞数亦低于模型对照组(28.94±1.28)(P＜ 0.05).免疫组化示,ESC组水通道蛋白3(AQP3)及TLR2和TLR4表达水平低于模型对照组,AQP3棘层表达减少.ESC组小鼠血中总IgE、IL-4水平低于模型对照组,IFN-γ水平高于模型对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 外用薏苡仁提取物对特应性皮炎模型小鼠皮损有治疗作用,可能是通过调节血清IgE、IL-4及IFN-γ水平和影响AQP3及TLR2和TLR4表达发挥作用.
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美沙拉嗪治疗肠易激综合征对患者水通道蛋白3、4、8的影响
[目的]探讨美沙拉嗪肠溶片对肠易激综合征(IBS)患者水通道蛋白(AQP)3、4、8的影响和临床意义.[方法]在本院住院的IBS患者151例,随机分成两组,研究组78例,对照组73例.对照组采用常规治疗,抗胆碱能药物配合纤维素应用.研究组在对照组的治疗基础上应用美沙拉嗪肠溶片口服1.0g,3次/日；疗程4周,采用ELISA法测定两组患者治疗前后AQP-3、AQP-4和AQP-8的变化.[结果]与治疗前比较,治疗后两组AQP-3、AQP-4和AQP-8均明显增加,且差异有显著性(P＜0.05),治疗后研究组与对照组比较AQP-3、AQP 4和AQP-8增加更明显,且差异有显著性(P＜0.05).[结论]美沙拉嗪肠溶片治疗IBS效果良好,可能是通过调节AQP-3、AQP-4和AQP-8水平改善症状,值得临床推广应用.
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水通道蛋白1、3与腹膜透析
2001年,超过1百万终末期肾脏病患者进行透析治疗,而且每年增加7％.腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)作为肾替代治疗重要方式,全世界大约15％透析患者选择PD,且人数在持续增长[1].超滤是PD清除水分的主要机制,腹膜失去超滤功能为超滤衰竭(ultrafiltration failure,UFF).水孔蛋白(aquaporins,AQP1)作为了解PD患者转运机制和UFF主要因素,是PD水转运重要的障碍.腹膜动力学研究认为:腹膜转运依据"三孔"动力学模型,毛细血管壁是腹膜转运的主要屏障,包括3种孔隙:"大孔"(孔径20～ 30nm)参与蛋白、免疫球蛋白等大分子的转运;"小孔"允许尿素、肌酐和葡萄糖等小分子溶质弥散经过;"超小孔"即AQP1,主要参与调解膜通道水的转运[2].
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功能性便秘患者结肠黏膜水通道蛋白3和水通道蛋白9的表达及意义
目的 研究功能性便秘患者结肠黏膜水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白9(AQP9)的表达与分布情况,并探讨其与便秘的关系.方法 采用免疫组化技术和Western印迹半定量检测法检测45例功能性便秘患者(试验组)和21例无便秘患者(对照组)结肠黏膜AQP3和AQP9,把AQP3和AQP9与相应内参蛋白β-actin的灰度值之比视为AQP3和AQP9的相对含量.结果 免疫组化检测显示:AQP3主要表达在结肠黏膜顶部的吸收细胞,且主要分布于细胞膜的基底侧和腔面,杯状细胞少见阳性染色,AQP9主要表达在黏膜腔面的杯状细胞,且主要分布于细胞膜的基底侧.Western印迹检测结果:试验组和对照组升结肠AQP3灰度比平均值分别为0.905和0.798(P《0.05),AQP9灰度比平均值分别为0.544和0.543(P》0.05);试验组和对照组降结肠AQP3灰度比平均值分别为0.697和0.701(P》0.05),AQP9灰度比平均值分别为0.575和0.732(P《0.05).结论 功能性便秘患者升结肠黏膜AQP3表达高于非便秘者,而其降结肠AQP9表达则低于非便秘者;AQP3和AQP9含量的增减可能在便秘的发生发展过程中发挥了重要作用.
