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肺癌胸腔积液肿瘤细胞及CD133+细胞数对病情评估和疗效预测的价值
目的 肺癌胸腔积液的成分复杂,常规方法难以获得高纯度的胸腔积液肿瘤细胞.在前期建立免疫磁珠阴性富集法获得高纯度肿瘤细胞的基础上,本研究进一步探讨恶性胸腔积液中肿瘤细胞及CD133+细胞数对肺癌患者病情评估及疗效预测的作用.方法 收集2013-04-01 2014 08-31扬州大学临床医学院活检病理确诊且伴有恶性胸腔积液的初治肺癌患者21例.治疗前收集10 mL胸腔积液,采用阴性富集技术、染色体荧光原位杂交整合技术及CD133抗体免疫荧光染色对肿瘤细胞进行富集和荧光染色并计数.分析其与临床病理特征及治疗疗效之间的关系.结果 21例患者胸腔积液的中位肿瘤细胞数及CD133+细胞数分别为4 000个/10 mL和19个/10 mL.肿瘤细胞数及CD133+细胞数在不同性别(x2=0.597,P=0.550;x2 =0.225,P=0.822)、年龄(x2=0.533,P=0.594;x2=1.288,P=0.198)和病理类型(x2=3.253,P=0.197;x2=0.034,P=0.983)之间差异无统计学意义.与不伴有或仅伴有区域淋巴结转移患者比较,当肿瘤伴有肺内或远处淋巴结或其他脏器转移时,其胸腔积液中肿瘤细胞数(x2 =4.398,P=0.036)和CD133+细胞数(x2=4.605,P=0.032)明显增高.全组患者在化疗2个周期或口服吉非替尼2个月后,CR 0例,PR 7例,SD 9例,PD 5例,总有效率为33.33％.不同疗效患者的肿瘤细胞数及CD133+细胞数差异均有统计学意义(x2=7.575,P=0.023;x2 =7.247,P=0.027),疗效越好的患者肿瘤细胞数及CD133+细胞数越少.以肿瘤细胞数及CD133+细胞数的中位值为界值并联合进行分组,将所有患者分为3组:少量细胞数组(肿瘤细胞数和CD133+细胞数均≤中位值)、中等细胞数组(肿瘤细胞数＞中位值并且CD133+细胞数≤中位值,或者CD133+细胞数＞中位值并且肿瘤细胞数≤中位值)和大量细胞数组(肿瘤细胞数和CD133+细胞数均＞中位值).中等-大量细胞数组患者肿瘤伴有肺内或远处淋巴结或其他脏器转移的发生率明显高于少量细胞数组,x2=12.634,P=0.002;少量细胞数组患者治疗疗效显著优于中等-大量细胞数组患者,x2=10.886,P=0.01.结论 胸腔积液中肿瘤细胞和CD133+细胞数有可能是晚期肺癌患者病情评估和疗效预测有效预测因子.
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免疫磁珠法阴性富集循环肿瘤细胞方法的建立
循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)检测对于肿瘤的早期发现、临床诊断、病情监测等具有重要意义,但CTC在肿瘤患者外周血中极为稀少,约为1～10个/mL,而正常成人外周血中血细胞数量为109个/mL,白细胞的数量是(4～10)×106个/mL[1-2].CTC远低于血液中其他类型的细胞,数量的稀少使得血液CTC检测极具挑战性,加上CTC产生的复杂性、异质性,更增加了其检测的难度[3-4].因此,如何从数量庞大的背景血液细胞中准确地富集出几个CTC,是CTC检测技术需要解决的关键问题.本研究利用免疫磁珠和免疫荧光技术,建立一种高效、不依赖肿瘤细胞表面标志物、不依赖于肿瘤细胞大小的CTC阴性富集方法和免疫荧光鉴定方法.
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免疫磁珠阴性法用于肺癌淋巴结微转移的研究
目的 利用免疫磁珠阴性富集法建立一种肺癌淋巴结标本中肿瘤细胞的分选和富集方法,探讨该方法对提高淋巴结微转移诊断率的可行性.方法 选取原发灶为非小细胞肺癌且淋巴结病理阴性的患者,取新鲜淋巴结组织,制备淋巴结悬液,采用阴性法富集肿瘤细胞,联合应用免疫荧光和免疫荧光原位杂交技术鉴定肿瘤细胞,其中免疫荧光技术判断p53+/DAPI+/CD45-细胞为阳性细胞,免疫荧光原位杂交技术判断CEP8+/DAPI+/CD45-细胞为阳性细胞.结果 本研究入组30例肺癌患者,共收集病理阴性淋巴结60枚.7枚淋巴结免疫荧光法检测阳性,7枚淋巴结免疫荧光原位杂交技术检测阳性,其中有3枚淋巴结两种检测均阳性,18.3％ (11/60)的淋巴结免疫磁珠阴性法检测阳性,来自10例患者,即33.3％ (10/30)早期非小细胞肺癌患者存在淋巴结微转移.结论 免疫磁珠阴性法可用于淋巴结微转移的研究,与常规病理检测相比,可提高肺癌淋巴结微转移诊断率.
