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rh-Apo2L联合长春瑞滨对诱导肺鳞癌细胞凋亡作用及机制的研究
目的 晚期肺鳞癌治疗方式相对有限.Ⅲ期临床试验提示,rh-Apo2L有望为其提供一种新颖、有效的治疗方法.本研究旨在观察rh-Apo2L、长春瑞滨及两药联合对人肺鳞癌细胞SK-MES-1的抑制增殖和促进凋亡作用,并探讨其机制.方法 将不同质量浓度的rh-Apo2L、长春瑞滨干预人肺鳞癌SK-MES-1细胞,采用CCK8法检测细胞增殖;Annexin Ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白DR4、DR5和Caspase-3的表达.结果 通过CCK8检测发现,rh-Apo2L对人肺鳞癌细胞SK-MES-1的体外增殖具有抑制作用,24和48 h的IC50分别为28.57和8.97 μg/mL;长春瑞滨对人肺鳞癌细胞SK-MES-1的体外增殖具有抑制作用,24和48 h的IC50分别为27.30和7.87 μg/mL.其中,1μg/mL rh-Apo2L组、1 μg/mL长春瑞滨组和两药联合组(rh-Apo2L和长春瑞滨质量浓度均为1 μg/mL)的24 h细胞增殖抑制率分别为(15.03±1.54)％、(21.88±2.75)％和(65.11±4.09)％;0.1 μg/mL rh-Apo2L组、0.5 μg/mL长春瑞滨组和两药联合组(rh-Apo2L质量浓度为0.1μg/mL,长春瑞滨为0.5 μg/mL)的48 h细胞增殖抑制率分别为(19.01±1.12)％、(19.97±1.23)％和(84.81±3.99)％;24和48 h联合组两药相互作用指数(q值)分别为1.94和2.40.细胞凋亡实验结果显示,1 μg/mL rh-Ap02L组、1μg/mL长春瑞滨组和两药联合组(rh-Ap02L和长春瑞滨质量浓度均为1 μg/mL)干预细胞24 h的凋亡率分别为(21.76±3.13)％、(37.31±2.21)％和(74.88±3.63)％;与单药组相比较,两药联合组对SK-MES-1细胞增殖的抑制作用明显增强(P＜0.001),两药联合干预24 h的凋亡指数显著升高,P＜0.001.蛋白印迹法检测结果发现,rh-Ap02L联合长春瑞滨在上调DR4(P=0.026)和DR5(P=0.001)表达方面具有交互作用,在增加Caspase-3活性片段表达亦具有交互作用,P=0.011.结论 rh-Apo2L与长春瑞滨均能协同抑制人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调SK-MES-1细胞表面的DR4、DR5蛋白表达和活化Caspase-3相关.
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Rh-Apo2L联合长春瑞滨杀伤人肺腺癌A549细胞的作用研究
[目的]探讨重组人凋亡素2配体(Rh-Ap02L)联合长春瑞滨(NVB)对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用及机制.[方法]人肺腺癌A549细胞分成4组:对照组、Rh-Ap02L组、NVB组、联合组.用MTF法检测不同浓度Rh-Ap02L和NVB对A549细胞的抑制率,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期分布,RT-PCR方法检测死亡受体DR5基因mRNA的表达.[结果]MTT结果显示不同浓度Rh-Ap02L和NVB对人肺癌A549细胞的体外抑制作用均呈剂量效应关系,Rh-Ap02L处理48h后的IC20为3.48μg/ml、IC50为197.92μg/ml,NVB处理48h后的IC20为0.29μg/ml、IC50为3.44μg/ml.联合组对A549细胞的抑制作用高于单药组(P=0.001).流式细胞分析显示含NVB药物两组在24h G2/M期比率高于对照组.3个实验组在24h、48h、72h后DR5基因mRNA相对表达量均较对照组多(P＜0.05),但各实验组间均无统计学差异(P＞0.05).[结论]Rh-Ap02L与NVB联合应用能协同增强对人肺腺癌细胞株A549的体外抗肿瘤活性,其协同作用机制可能与细胞周期阻滞在GdM期有关,但与DR5基因mRNA的表达无相关性.
