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BIX-01294对肝癌细胞增殖能力的影响
目的 哺乳动物细胞中H3K9的甲基化是引起基因表达抑制的主要修饰标记之一,H3K9的二甲基化在维持肿瘤细胞自我复制方面所起的作用仍不清楚.本研究将探讨组蛋白甲基化转移酶G9a抑制剂BIX-01294对肝癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法 将肝癌细胞HepG2和Huh7分为BIX-01294处理组和空白对照组,用5μmol/L的BIX-01294分别处理24、48和72h.CCK-8法检测BIX-01294对肝癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测对细胞周期的影响;蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白CyclinB1、细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p27、组蛋白H3及组蛋白H3K9二甲基化(H3K9me2)水平的变化.结果 随着作用时间的延长,5μmol/L的BIX-01294对肝癌细胞有抑制增殖作用,且具有时间依赖性;在处理肝癌细胞24、48和72 h后,HepG2细胞的存活率分别为95.27％、92.19％和53.94％,F=76.058,P＜0.001;Huh7细胞的存活率分别为93.11％、86.12％和47.72％,F=99.832,P＜0.001.流式细胞术检测结果表明,BIX-01294处理组肝癌细胞发生G0/G1阻滞,且阻滞呈时间依赖性.分别处理24、48和72 h时,HepG2细胞G0/G1细胞比例分别为(70.55±1.38)％、(72.27±0.59)％和(79.63±3.40)％,F=19.937,P＜0.001;Huh7细胞G0/G1细胞比例分别为(72.34±0.60)％、(80.36±0.78)％和(79.77±1.01)％,F=256.060,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组相比,组蛋白H3表达无显著改变,G9a、组蛋白H3K9二甲基化(H3K9me2)水平及细胞周期相关蛋白CyclinB1表达显著降低,细胞周期依赖激酶抑制因子p27的表达显著上调.结论BIX-01294通过抑制G9a的活性,下调H3K9me2水平,从而抑制肝癌细胞HepG2及Huh7的增殖,促进G0/G1的周期阻滞,其机制可能与上调细胞周期依赖激酶抑制剂p27,以及下调细胞周期相关蛋白CyclinB1表达有关.
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靶向抑制组蛋白甲基转移酶G9 a通过线粒体凋亡途径抑制肺腺癌细胞增殖
目的：探讨小分子抑制剂BIX?01294靶向组蛋白甲基转移酶G9a抑制肺腺癌细胞增殖的作用及分子机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝法和集落克隆实验检测BIX?01294对人肺腺癌细胞A549生长、增殖的影响，应用流式细胞术检测BIX?01294干预对细胞凋亡的影响，应用Western blot检测BIX?01294干预后，G9a催化产物H3K9me和H3K9me2以及细胞凋亡相关蛋白的表达。研究caspases抑制剂Z?VAD?FMK预处理细胞后，BIX?01294抑制A549细胞增殖是否呈凋亡依赖性。结果与空白对照组比较，组蛋白甲基转移酶G9a抑制剂BIX?01294抑制A549细胞的生长，呈剂量时间依赖关系。 BIX?01294作用7 d，空白对照组和10μmol／L BIX?01294组的集落形成数分别为（172．7±23．0）个和（42．5±8．7）个，差异有统计学意义（P＜0．05）。10μmol／L BIX?01294作用24 h，A549细胞凋亡率为（47．6±8．4）％，与空白对照组[（7．2±3．6）％]比较，差异有统计学意义（P＜0．05）。10μmol／L BIX?01294干预24 h，A549细胞中G9a催化产物H3K9me和H3K9me2的表达下降，线粒体凋亡途径蛋白Bax、Bak和cleaved caspase?9的表达上调，抗凋亡蛋白Bcl?2的表达下降，死亡受体凋亡途径蛋白cleaved caspase?8的表达无变化，凋亡执行蛋白 cleaved caspase?3和 cleaved PARP 的表达上调。Z?VAD?FMK预处理后，A549细胞中凋亡率和凋亡相关蛋白的表达下降。结论 BIX?01294具有抑制肺腺癌细胞增殖的作用，激活线粒体途径诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一。
关键词： 肺肿瘤 腺癌 细胞凋亡 组蛋白甲基转移酶G9a BIX-01294 -
BIX-01294对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白甲基化的影响
目的：观察甲基化转移酶G9a抑制剂BIX-01294对急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白甲基化的影响。方法 MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化；Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax、抑癌蛋白P15、DNA去甲基化酶DNMT1、组蛋白H3乙酰化、组蛋白H3K9单、双、三甲基化水平,H3K27单甲基化、双甲基化水平的变化。结果 BIX-01294可下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白的表达, Caspase-3表达上调,诱导细胞凋亡,浓度为0、1、2、4μmol · L-1的BIX-01294作用Molt-4细胞24 h 后,凋亡率分别为(5．54±1．35)%、(10．24±2．26)%、(32．28±3．26)%、(47．52±4．37)%(P<0．05),差异有统计学意义。 BIX-01294抑制DNMT1表达,上调P15蛋白表达,抑制细胞的增殖；BIX-01294下调组蛋白 H3K9、H3K27单甲基化和二甲基化水平,而组蛋白 H3乙酰化及H3K9三甲基化水平无明显改变。结论 BIX-01294通过抑制G9a 的活性,下调 H3K9、H3K27单甲基化、二甲基化水平,抑制DNMT1,使上调P15蛋白,终抑制Molt-4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。
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G9a表达抑制对骨肉瘤细胞MG-63增殖的影响
目的:探讨组蛋白甲基转移酶G9a在骨肉瘤中的表达以及靶向抑制G9a活性对于骨肉瘤细胞增殖的影响.方法:采用RT-PCR检测骨肉瘤组织及正常毗邻组织中G9a的表达情况,同时检测骨肉瘤细胞系及正常成骨细胞中G9a的表达.通过MTT及克隆形成试验检测G9a抑制剂BIX-01294对MG-63细胞增殖的影响.结果:G9a在肿瘤组织中表达明显高于正常组织(P＜0.05),且在肿瘤细胞系MG-63及U-2 OS中的表达也高于正常成骨细胞系hFOB1.19 (P ＜0.05).BIX—01294能够显著抑制MG-63细胞的增殖(P＜0.05),而对正常成骨细胞系hFOB1.19的增殖却无明显影响(P＞0.05).结论:G9a在骨肉瘤中高表达,靶向抑制G9a的功能可以抑制肿瘤细胞的增殖,G9a为未来治疗骨肉瘤的潜在靶点.
