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GM-CSF重组腺病毒转染外周血树突状细胞的研究
目的:利用GM-CSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,诱导培养树突状细胞(dendritic cell,DC),并与细胞因子培养的DC进行生物学特性的比较.方法:将GM-CSF重组腺病毒转染正常人外周血单核细胞,或用重组细胞因子GM-CSF,诱导培养获得DC,通过相差显微镜观察DC表面形态变化,FACS分析GM-CSF基因转染对DC表面免疫分子表达的影响,Western blot鉴定GM-CSF的表达,ELISA检测IL-12分泌水平,MTT法检测DC激发同种异体T细胞增殖的能力.结果:GM-CSF重组腺病毒转染外周血单核细胞,能扩增获得DC,该DC高表达CD1a、HLA-DR、CD80和CD86等免疫分子,并表达细胞因子GM-CSF和IL-12,对同种异体淋巴细胞有更强的刺激活性.结论:用GM-CSF重组腺病毒可从外周血单核细胞中扩增到DC,为DC瘤苗临床应用提供实验基础.
关键词： 树突状细胞 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 GM-CSF基因 重组腺病毒 -
HA纳米载体转GM—CSF基因制备自体肿瘤疫苗治疗肝癌的实验研究
目的:观察自体肿瘤疫苗对人肝癌PBL-SCID嵌合模型的治疗效果.方法:SCID小鼠20只腹腔内注射健康志愿者外周血淋巴细胞(2x106/mL)0.5 mL,同时背部皮下接种人肝癌HepG2细胞(1×107/mL)0.2mL.当皮下移植瘤体积长至100mm3时,随机分4组:Ⅰ组,生理盐水组;Ⅱ组,60Co照射的HepG2细胞组;Ⅲ组,转染GM-CSF基因的HepG2细胞组;Ⅳ组,60Co照射的转染GM-CSF基因的HepG2细胞组即自体肿瘤疫茼组,每组5只.结果:自体肿瘤疫苗组6周存活率(100%)高于生理盐水组(60%)和单纯60Co照射的HopC2细胞组(40%);自体肿瘤疫苗腹腔注射抑制皮下移植瘤生长,其肿瘤生长抑制率为89%;免疫组化检测发现人淋巴细胞分布于小鼠移植瘤组织中.病理切片见移植瘤细胞变性和死亡.结论:HA纳米载体转GM-CSF基因制备的自体肿瘤疫苗具有抑制人肝癌PBL-SCID嵌合模型的皮下移植瘤生长作用,并诱导有效的抗肿瘤免疫反应.
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淋巴瘤细胞转染GM-CSF 基因后生物学特性的变化
目的:制备高表达GM-CSF的淋巴瘤细胞系,观察淋巴瘤细胞转染GM-CSF基因后生物学特性的改变.方法:将小鼠GM-CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA,有限稀释法制备单个细胞克隆,经RT-PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM-CSF的RMA克隆,并观察其生物学特性的改变.结果:获得了高表达GM-CSF的RMA细胞系,其同基因动物体内致瘤性降低.结论:淋巴瘤细胞系RMA转染GM-CSF基因后致瘤性降低.
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转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子基因瘤苗治疗T细胞淋巴瘤的实验研究
目的:探讨转粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrohge colong stimulating factor,GM-CSF)基因瘤苗治疗小鼠T淋巴细胞瘤的方法.方法:将小鼠GM-CSF真核表达质粒用电穿孔法导入小鼠淋巴瘤细胞系RMA,有限稀释法制备单个细胞克隆,经RT-PCR、骨髓祖细胞增殖实验和集落形成实验筛选相对高表达GM-CSF的RMA克隆,该克隆细胞经丝裂霉素灭活后免疫小鼠以诱导其产生抵抗RMA肿瘤细胞再攻击的能力.结果:获得了高表达GM-CSF的RMA克隆,将其用丝裂霉素灭活后免疫小鼠使小鼠使小鼠产生了抗肿瘤免疫保护力.结论:转GM-CSF基因瘤苗可作为有效的抗肿瘤瘤苗.
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HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗联合多柔比星抗肝癌作用
目的:评价HA纳米载体转hGM-CSF基因的HepG2疫苗联合多柔比星治疗肝癌的效果.方法:建立Hu-PBL-SCID HepG2荷瘤小鼠模型,待皮下种植瘤长至100-150mm3时,随机分为5组,每组5只:对照组(PBS);化疗组(多柔比星DOX);疫苗组(60Co照射的转染GM-CSF基因的HepG2细胞);先疫苗后化疗组;先化疗后疫苗组.末次治疗后第5天处死各组小鼠,用MTT法测定脾脏CTL活性及肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)杀伤活性;取肿瘤组织行HE染色及CD8+T细胞免疫组化检查.结果:化疗组的CTL活性与对照组相比无显著变化(P＞0.05).疫苗组和先疫苗后化疗组及先化疗后疫苗组的CTL活性显著强于上述两组(P＜0.05),该3组两两之间也存在显著差异(P＜0.05),而先化疗后疫苗组的CTL活性增强为明显,明显高于其他两组(P＜0.05).该组的TIL活性同样强于其他各组.同其它组相比,先化疗后疫苗组的瘤体内可见大量肿瘤细胞坏死,CD8+T细胞浸润显著增加.结论:HA纳米载体转染hGM-CSF基因的HepG2疫苗的主动免疫联合多柔比星化疗具有协同抗肝癌作用,为肿瘤免疫联合化疗治疗肿瘤提供了实验依据.
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腺病毒载体转导GM-CSF基因制备肿瘤疫苗对小鼠肿瘤模型预防及治疗的实验性研究
目的:评价重组腺病毒载体转导粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ-干扰素(IFN-γ)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因所制备的肿瘤疫苗对同源性小鼠肿瘤模型的预防和治疗功效.方法:巨细胞病毒(CMV)起动子、特定的细胞因子cDNA片段和SV40多聚腺苷信号组成细胞因子基因表达载体,通过基因重组产生重组腺病毒(Adv/GM-CSF、Adv/IFN-γ、Adv/MCP-1).重组腺病毒直接感染人肾胚胎细胞系293细胞,选择佳感染滴度,以不同的效靶比转染不同的肿瘤细胞系CT26、RENCA和BALB/3T3纤维母细胞,经照射灭活后制备不同的肿瘤疫苗,用于各种肿瘤模型.结果:表明经基因转导后的肿瘤细胞以及照射灭活经基因转导后的肿瘤细胞可以分泌转导的细胞因子.接种经照射灭活的转导GM-CSF结肠癌细胞系CT26后,90%的同源性小鼠对原代CT26细胞的攻击起到了保护作用,而接种转导IFN-γ和MCP-1基因制备的肿瘤疫苗对小鼠经原代CT26细胞的攻击未有保护作用.同源性小鼠接种分泌GM-CSF的肿瘤疫苗后,对CT26原代细胞的多次攻击在整个观察期间未见肿瘤生长.接种分泌GM-CSF的肿瘤疫苗后机体长期、特异性的抗肿瘤免疫的建立需要GM-CSF及肿瘤抗原在接种部位的同时存在,CD8+T细胞亚群的缺失,明显阻断了分泌GM-CSF肿瘤疫苗的功效.皮下注射分泌的GM-CSF肿瘤疫苗能够有效地阻止预先植入小鼠体内小负荷肿瘤细胞的生长,同时也可以有效的阻止接种前7天或后3天静脉内注射原代CT26瘤细胞在肺内转移灶的生长.结论:在本研究实验性肿瘤模型中,皮下注射重组腺病毒载体转导GM-CSF基因制备的肿瘤疫苗不仅能够有效地预防皮下接种原代CT26肿瘤细胞的生长而且也可消除原有的肿瘤病灶及转移瘤灶,使机体建立了长期、特异性的抗肿瘤免疫反应.
