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小鼠成纤维细胞激活蛋白α二肽基肽酶核心序列原核表达与纯化及复性
表达质粒,通过对转化该质粒后的感受态细菌进行菌液PCR鉴定以及对该质粒进行BamH I和Xho I双酶切鉴定,鉴定结果与预期结果完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAPαc的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,表达产量占菌体总蛋白＞70%;纯化了该融合蛋白,纯化后的蛋白纯度通过灰度分析＞99%;对该融合蛋白进行了复性,复性后该融合蛋白由不溶的包涵体状态变为可溶的水溶状态.结论:成功表达、纯化和复性了FAPα二肽酶催化核心区域FAPαc,为深入开展FAPα的研究奠定基础.
关键词： 成纤维细胞激活蛋白α 原核表达 纯化 复性 -
成纤维细胞激活蛋白α与肿瘤免疫抑制的研究进展
成纤维细胞激活蛋白α(Fibroblast activation protein α,FAPα)是一种跨膜丝氨酸蛋白酶,高度表达在90％的上皮性肿瘤的间质——肿瘤相关成纤维细胞(Tumor association fibroblast,TAF)上.FAPα在促进上皮性肿瘤的恶性进展中起着十分重要的作用,近年来研究发现,FAPα在肿瘤微环境中发挥免疫抑制的作用.研究FAPα在肿瘤免疫抑制中的作用,已成为肿瘤研究的新的热点.为基于以FAPo为靶标的抗肿瘤免疫治疗提供参考,本文围绕引起肿瘤免疫抑制的因素、FAPα与肿瘤免疫抑制的研究进展以及FAPα在肿瘤的发展进程的作用作一综述.
关键词： 肿瘤微环境 成纤维细胞激活蛋白α 肿瘤免疫抑制 -
口腔鳞癌与正常黏膜中FAPA基因mRNA的表达
目的:研究成纤维细胞激活蛋白α(fibroblaat activation protein alpha,FAPA)mRNA在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及配对正常口腔黏膜组织中的表达.方法:采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中FAPA mRNA的表达;所得数据用SAS6.12软件包进行X<'2>检验和t检验.结果:R-_PCR检测结果表明,FAPA mRNA在30例OSCC和配对正常黏膜的阳性率分别为83%(25/30)和40%(12/30)(P<0.001);总表达水平分别为3.58±0.46和1.27±0.21,上调2.82倍(P<0.0001).结论:在OSCC的癌变过程中,嗍基因过表达,可能是OSCC的一个靶基因:FAPA在OSCC诊断中具有应用价值.
关键词： 口腔鳞状细胞癌 成纤维细胞激活蛋白α RT-PCR -
成纤维细胞激活蛋白α在神经胶质瘤中的表达及临床意义
目的:探讨成纤维细胞激活蛋白α(FAP-α)在神经胶质瘤组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法:应用免疫组织化学法检测33例神经胶质瘤和7例正常对照脑组织中FAP-α蛋白的表达,并结合临床病理资料进行分析.同时对所有病例进行随访,分析FAP-α表达与患者预后的关系.进一步检索脑肿瘤分子数据库(Rembrandt)探讨FAP mRNA表达与预后的关系.结果:低级别胶质瘤和高级别胶质瘤之间FAP-α蛋白的积分光密度值(IOD)差异有统计学意义(P<0.01),且与胶质瘤病理分级存在正相关(r=0.673,P<0.01).7例正常脑组织FAP-α蛋白不表达或表达弱阳性,与低级别胶质瘤(P<0.05)和高级别胶质瘤(P<0.01)比较差异有统计学意义.FAP-α蛋白的表达强度与患者性别、肿瘤大小、年龄以及手术切除程度无明显相关性(P>0.05).生存分析显示FAP-α低表达组和高表达组生存率差异有统计学意义(P<0.01),FAP-α的表达是影响胶质瘤患者预后的独立因素(P<0.05).检索脑肿瘤分子数据库,发现FAP mRNA低表达预后明显好于高表达(P<0.01).结论:FAP-α在神经胶质瘤中存在表达,且与神经胶质瘤的病理分级正相关,其高表达可能提示不良预后.
关键词： 成纤维细胞激活蛋白α 神经胶质瘤 免疫组织化学 预后 -
siRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白α对胶质瘤细胞U87增殖的影响
目的:探讨小分子干扰RNA (siRNA)靶向沉默成纤维细胞激活蛋白α(FAP-α)表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响.方法:实验分为空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)和siRNA组,通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87,使用Western blot法检测FAP-α基因的蛋白水平,同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化,使用Real-time PCR法检测FAP-α和增殖核抗原(PCNA)的mRNA水平,CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力.结果:①转染48 h后,siRNA组细胞FAP-αmRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组,差异有统计学意义(P＜0.01),siRNA组较NC组caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05);Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.01),siRNA组较NC组PCNA mRNA表达明显下降(P＜0.01).②转染后48、72和96 h siRNA组U87细胞吸光度值低于NC组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:应用siRNA沉默FAP-α基因的表达,可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖,诱导胶质瘤细胞的凋亡.
关键词： 神经胶质瘤 小分子干扰RNA 成纤维细胞激活蛋白α 细胞增殖 -
FAP-α在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的：检测成纤维细胞激活蛋白α（FAP-α）在胃癌组织中的表达情况，分析其表达的临床意义。方法：收集自2008年6月1日至2010年12月30日在广东医学院附属医院行手术切除，并且全部经过病理诊断证实为胃腺癌的患者98例，伴癌旁组织者20例。同时追踪随访患者生存情况截止至2015年12月30日。收集经胃镜取材诊断为胃炎的患者10例。应用免疫组织化学方法检测FAP-α在胃癌组织、癌旁组织及胃炎组织中的表达。分析FAP-α的表达与胃癌临床病理特征的关系及患者预后的相关性。结果：FAP-α在癌旁组织及胃炎组织中不表达，在胃癌组织中主要分布于胃癌实质腺细胞，在胃癌间质中呈少量分布。FAP-α在胃癌组织中的表达与性别、年龄、肿瘤分级、肿瘤大小、浸润深度及淋巴结转移等不具有相关性（P＞0．05），与患者术后生存期呈负相关，即 FAP-α表达越多，患者术后生存期越短（P＝0．035）。结论：FAP-α主要表达于胃癌实质腺细胞。FAP-α的表达与患者性别、年龄、肿瘤分级、肿瘤大小、浸润深度及淋巴结转移等因素之间不具有相关性，与患者术后生存期呈负相关，可用于作为评估患者预后的指标。
关键词： 成纤维细胞激活蛋白α 胃癌 免疫组织化学 相关性 -
成纤维细胞激活蛋白α与肿瘤微环境的免疫抑制
成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)是肿瘤微环境中特异性表达于肿瘤相关成纤维细胞(TAF)表面的抗原分子,属丝氨酸蛋白酶家族Ⅱ型膜整合糖蛋白,具有二肽酶和胶原酶活性,对肿瘤微环境的免疫抑制和肿瘤浸润转移有重要作用.因此,FAPα已被视为理想的肿瘤治疗靶标.本文综述了FAPα阳性细胞对肿瘤微环境免疫抑制状态的形成及靶向FAPα治疗的研究.
关键词： 成纤维细胞激活蛋白α 肿瘤微环境 免疫抑制 靶向治疗 -
急性心肌缺血猝死心肌中FAPα和TGF-β1的表达
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白α(fibroblasts activating protein α,FAPα)和转化生长因子β1 (trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)在急性心肌缺血猝死者心肌细胞胞浆中的表达. 方法 选取47例尸检案例心脏标本,按照死因分为对照组、急性心肌梗死组及复发性心肌梗死组,应用免疫组织化学技术检测心肌细胞胞浆中FAPα和TGF-β1的表达,染色结果经图像分析系统采集照片后,测定其阳性面积率及平均光密度值,比较各组间阳性信号的差别.结果 急性心肌梗死组和复发性心肌梗死组的心肌缺血区心肌细胞胞浆中FAPα和TGF-β1呈强阳性表达,对照组心肌细胞胞浆中FAPα无表达,TGF-β1呈弱阳性表达.急性心肌梗死组和复发性心肌梗死组分别与对照组心肌细胞内FAPα和TGF-β1相比,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 FAPα和TGF-β1联合应用可作为急性心肌缺血猝死的诊断指标.
关键词： 法医病理学 免疫组织化学 心肌缺血 转化生长因子β1 成纤维细胞激活蛋白α
