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受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O基因甲基化与乳腺癌细胞株化疗敏感性的关系
目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O( PTPRO)基因不同甲基化状态的乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。方法应用甲基化特异性PCR,检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株中PTPRO基因启动子CpG岛甲基化状态,并用 RT-PCR法检测 PTPRO mRNA 表达。采用 MTT 法检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株对0.0006、0.0030、0.0150、0.0750、0.3750、1.8750、9.3500、46.7500、234.0000 mmol/L紫杉醇的敏感性,以及对细胞株进行去甲基化实验后紫杉醇抑制率的改变。两组间均数比较采用配对t检验；在检验方差齐性的前提下,多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验。结果乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株中PTPRO基因甲基化,而乳腺癌Hs578t细胞株中PTPRO基因无甲基化。用紫杉醇处理细胞株后再检测PTPRO启动子甲基化情况,结果显示MCF-7、MDA-MB-231细胞株PTPRO基因甲基化率明显降低[(0.861±0.109)比(0.037±0.019),t=23.326,P=0.000；(0.758±0.114)比(0.086±0.010),t=16.109,P=0.000]。并且,MCF-7、MDA-MB-231细胞株经5-杂氮脱氧胞嘧啶( DAC)处理后,PTPRO mRNA表达水平明显高于DAC处理前[(0.033±0.006)比(0.166±0.016),t=28.338, P=0.000；(0.052±0.006)比(0.587±0.087),t=17.257, P=0.000],其表达水平与启动子CpG 岛甲基化状态有关。紫杉醇对MDA-MB-231、MCF-7及Hs578t细胞株的半数抑制浓度(IC50)分别为8.52、5.87和4.52 mmol/L。不同浓度紫杉醇对Hs578t细胞株的抑制率均比 MCF-7和 MDA-MB-231细胞株高( F=129.93、182.40、46.26、49.26、33.60、80.31、160.05、69.96、79.98,P均=0.000)。去甲基化实验显示：DAC处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株后,不同浓度紫杉醇对细胞株的抑制率与处理前相比,差异均有统计学意义( MCF-7：t=14.195、8.328、7.042、6.385、5.450、8.557、4.788、13.351、11.887, P 均<0.050； MDA-MB-231：t=16.324、30.443、9.177、12.694、9.528、11.912、10.260、18.109、3.754, P均<0.050)。结论 PTPRO基因甲基化是乳腺癌发生、发展过程中的常见现象；紫杉醇可影响PTPRO基因启动子CpG岛的甲基化状态,并且对无PTPRO基因甲基化的乳腺癌细胞株杀伤率更高；PTPRO基因甲基化状态的改变影响乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。
关键词： 编码膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O 甲基化 乳腺肿瘤 化疗敏感性
