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11种癌-睾丸抗原基因在食管癌中表达的检测
目的研究11种癌-睾丸(CT)抗原基因在食管癌中的表达,明确食管癌辅助免疫治疗疫苗的组成成分,为食管癌肿瘤疫苗的研制提供理论依据.方法用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测35例食管癌肿瘤组织以及相对应的癌旁正常食管黏膜组织中11种CT抗原基因的表达.结果所检测的11种CT抗原基因在正常食管黏膜中均无表达.在食管癌组织中表达率高的为MAGE-3(62.9%);其次为MAGE-4(31.4%)、LAGE-1(28.6%)、MAGE-1(25.7%)、CT10(20.0%)、NY-ESO-1(20.0%)、CT7(5.7%)和SCP-1(2.9%),无一例食管癌组织表达SSX-1、SSX-2、SSX-4基因.在35例食管癌组织中,28例(80.0%)表达至少1种CT基因,21例(60.0%)表达2种以上的CT基因.其中,19.0%(4/21)同时表达4种及4种以上CT基因,占总数的11.4%(4/35).不表达任何CT基因的7例中,Ⅱ期5例,Ⅰ期和Ⅳ期各1例.NY-ESO-1、LAGE-1、MAGE-1、MAGE-3和MAGE-4基因随肿瘤进展,其表达率增加;而SCP-1和CT10的表达主要集中在较早期的Ⅰ期及Ⅱ期食管癌组织.随着肿瘤分期的提高,CT基因的共表达率呈上升趋势,在Ⅲ期时达到高,为28.6%.结论(1)包含MAGE-3、MAGE-4和LAGE-1等抗原成分的CT抗原疫苗可应用于食管癌患者的免疫治疗;(2)对不同病理分期的食管癌患者应采取含有不同CT抗原成分的疫苗;(3)SSX-1、SSX-2、SSX-4在食管癌组织中无表达,其具体机制有待进一步研究.
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基因佐剂结核杆菌HSP70增强HCA661基因疫苗免疫应答
目的:评价结核分枝杆菌HSP70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSV70)羧基端作为基因佐剂对HCA661(Hepatocellular carcinoma associated antigens 661)基因疫苗免疫效果的影响.方法:将HCA661及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo中构建基因疫苗;将eGFP及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo,体外转染ψA细胞,根据eGFP的表达评价重组质粒中靶基因的转录表达效率.基因疫苗免疫BALB/c 小鼠,SABC、Western blot检测免疫血清中特异性HCA661抗体;流式细胞术、ELISA法检测免疫血清中特异性HCA661抗体水平.结果:重组质粒构建成功;80%ψA细胞转染eGFP后呈现绿色荧光;单基因和融合基因疫苗组动物均产生了针对HCA661的特异性抗体,融合疫苗组诱导的抗体水平较单基因疫苗组显著增高,融合基因疫苗组未产生针对mtHSP70的抗体.结论:mtHSP70羧基端作为基因佐剂增强机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答.
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人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建
目的:构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗.方法:通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661.结果:PCR产物为1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段.结论:成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗.
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CAGE基因mRNA水平表达与直肠癌关系的初步研究
目的:探讨直肠癌组织中癌相关基因(cancer-associated gene,CAGE)mRNA水平表达与直肠癌发生及临床分期、淋巴结转移的关系.方法:对我院2014年2月-2014年10月间肠镜室检查的标本,按病理检查结果分为3组:直肠癌组(80例;为直肠癌患者标本),大肠腺瘤组(38例;为大肠腺瘤患者标本),对照组(40例;为距肿瘤边缘10 cm以上标本).采用RT-PCR法检测并比较各组CAGE在mRNA水平表达情况.甲基化特性PCR法(methylation-specific PCR,MSP)检测CAGE基因启动子的甲基化情况.将直肠癌患者分为CAGE基因甲基化患者组和CAGE基因去甲基化患者组,比较两组临床分期和淋巴结转移率.结果:与对照组相比,直肠癌组和大肠腺瘤组的CAGE mRNA水平表达明显升高(P＜0.01);直肠癌组高于大肠腺瘤组(P＜0.01).3组间的基因启动子区的去甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).在直肠癌组中,CAGE去甲基化阳性患者的淋巴结转移率为73.8％(48/65),CAGE去甲基化阴性患者的淋巴结转移率为33.3 ％(5/15),两者相比差异有统计学意义(P＜0.01).临床分期为Ⅰ-Ⅱ期的CAGE基因启动子区的去甲基化直肠癌患者占24.6％(16/65),临床分期为Ⅲ-Ⅳ期的占75.4 ％(49/65);而甲基化的直肠癌患者中,临床分期为Ⅰ-Ⅱ期的占66.7％(10/15),Ⅲ-Ⅳ期的占33.3 ％(5/15),两组间差异有统计学意义(P＜0.01).结论:直肠癌组织和大肠腺瘤组织中,CAGE mRNA水平呈高表达.直肠癌的CAGE基因mRNA水平表达高于正常粘膜组织和大肠癌腺瘤组织.CAGE基因启动子区的去甲基化与淋巴结转移及临床分期密切相关.
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癌/睾丸抗原TEX14与侵袭转移性乳腺癌患者的预后
目的 探讨癌/睾丸抗原TEX14与乳腺癌转移及患者预后的关系.方法 利用Oncomine网站对目前已知的所有癌/睾丸抗原(CTAs)、促进乳腺癌转移基因AKT2、CD44、EIF4E、ERBB2及抑制乳腺癌转移基因BRMS1、CD82、KISS1、TIMP1在侵袭性和非侵袭性乳腺导管癌中mRNA表达情况进行筛查和分析.利用免疫组化方法检测乳腺癌组织标本的癌细胞TEX14蛋白表达情况.利用TCGA数据库1102例乳腺癌样本mRNA高通量测序数据,分别对TEX14与多个乳腺癌转移相关基因mRNA表达量进行相关性分析.采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验法分析TEX14的表达与乳腺癌患者预后的关系.结果 与非侵袭性乳腺导管癌相比,在侵袭性乳腺导管癌中,86个CTAs mRNA表达量升高,其中TEX14升高倍数大为3.344倍(P<0.05);促进乳腺癌转移基因AKT2、CD44、EIF4E、ERBB2 mRNA表达量升高,且与TEX14的表达呈正相关(P<0.05);抑制乳腺癌转移基因BRMS1、CD82、KISS1、TIMP1 mRNA表达量降低,且与TEX14的表达呈负相关(P<0.05).进一步利用免疫组化实验证明,与无转移组相比,有转移组乳腺癌细胞TEX14阳性细胞率升高1.5倍(P<0.05).TEX14高表达组乳腺癌患者总生存期较低表达组明显缩短(P<0.05).结论 癌/睾丸抗原TEX14在侵袭转移性乳腺癌中高表达,与患者的不良预后相关,为进一步研究TEX14可促进乳腺癌转移提供了实验依据.
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癌/睾丸抗原基因研究进展
癌/睾丸抗原(Cancer/Testis Antigen,CTA)基因在正常睾丸组织的生殖细胞和多种不同组织类型的癌细胞中特异表达,在其它正常组织不表达或表达水平较低,并且在癌症患者中有抗原性免疫反应,认为是一类理想的肿瘤疫苗靶分子.现已发现90个癌/睾丸抗原基因,分属于45个基因家族.本文综述了CTA基因的特性及其应用基础研究进展.
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睾丸特异性蛋白酶50的研究进展
睾丸特异性蛋白酶50(testes-specific protease 50,TSP50)基因是从人睾丸cDNA文库中分离得到的一个癌/睾丸抗原基因.它正常特异性表达于睾丸组织的精母细胞中,而异常高表达于数种肿瘤组织.TSP50能够促进肿瘤细胞的增殖、集落形成与转移,并抑制肿瘤细胞的凋亡,是肿瘤分子影像诊断与生物治疗的理想靶标.本文就TSP50的研究进展做一简要综述.
关键词： 睾丸特异性蛋白酶50 癌/睾丸抗原 肿瘤标志物
