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重组多肽CH50抑制肿瘤细胞侵袭生长和血管形成能力
目的 观察纤连蛋白重组多肽CH50对小鼠肝癌细胞侵袭和肿瘤血管形成能力的影响,探讨CH50多肽治疗肿瘤可能的分子机制.方法 接种H22肝癌细胞建立小鼠肿瘤模型,采用裸DNA-尾静脉注射方法在小鼠体内表达CH50多肽,进行基因治疗.HE染色观察治疗后肿瘤细胞侵袭能力和血管形成的改变;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和明胶电泳检测肿瘤组织边缘基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA和蛋白表达及活性;体外培养H22细胞,检测CH50多肽对相关基因表达和细胞黏附能力的影响.结果 小鼠体内非定位转染表达CH50多肽,对肿瘤生长具有明显的抑制作用,接种后第16天,治疗组瘤重为(0.78±0.18)g,低于质粒对照组和空白对照组(P＜0.05);从组织水平观察,CH50多肽治疗导致肿瘤细胞大量坏死,可抑制肿瘤细胞侵袭生长和肿瘤血管生成,抑制肿瘤血管建立侧支循环.pCH510治疗组的肿瘤边缘组织中,活性型MMP-9的含量为3.2±0.7,显著低于空白对照组和质粒对照组,且活性型MMP-9占总MMP-9的比例也显著降低,是空白对照组和质粒对照组的1/4左右,但对MMP-9 mRNA表达没有明显影响.CH50多肽可下调H22细胞的αv、β3、cdc2基因的表达水平,降低H22细胞整合素αvβ3的活性.结论 CH50多肽可以通过影响MMP-9和整合素αvβ3的功能起到抑制肿瘤生长、侵袭和肿瘤血管形成的作用.
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CH50多肽在膀胱癌细胞系BIU-87中的表达和鉴定
目的:研究CH50多肽真核表达载体pCH510体外转染膀胱癌细胞系BIU-87以及CH50多肽的表达和鉴定. 方法:以脂质体LipofectimineTM2000为介导,将pCH510质粒体外转染给BIU-87细胞,用免疫组化S-P法、Western Blot法鉴定CH50多肽的表达, RT-PCR法鉴定导入基因的表达. 结果:转染pCH510质粒的BIU-87细胞明显阳性表达CH50多肽,对照组则不表达. 结论:BIU-87细胞体外转染pCH510质粒后能表达CH50多肽,改变了癌细胞的黏附属性,为临床治疗膀胱癌提供了新的途径.
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纤黏连蛋白重组多肽CH50抑制黑色素瘤MMP-2和MMP-9表达、激活的研究
目的 研究纤黏连蛋白重组多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力的影响,探讨CH50多肽抑制肿瘤生长、侵袭的机制.方法 体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞、小鼠腿部皮下注射B16细胞建立肿瘤动物模型.采用明胶电泳法检测B16细胞和黑色素瘤组织中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达和激活;以CH50多肽体外处理B16细胞或体内表达CH50,观察CH50下调MMPs表达以及对肿瘤细胞侵袭能力的抑制作用.结果 B16细胞在体外培养条件下主要表达MMP-2,而在肿瘤微环境中则同时表达MMP-2和MMP-9.肿瘤组织中MMPs的表达明显高于体外培养B16细胞.CH50多肽对体外培养B16细胞的MMPs表达和激活无明显抑制作用,但处理后的B16细胞进入体内后表达MMPs的能力受到明显抑制.体内转染表达的CH50多肽亦可明显抑制肿瘤表达MMPs、并抑制肿瘤侵袭能力.结论 纤黏连蛋白重组多肽CH50可以抑制肿瘤微环境中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达和激活,从而抑制黑色素瘤生长及侵袭能力.
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重组纤粘连蛋白多肽CH50对小鼠H22肝癌移植瘤的治疗作用
目的 探讨尾静脉转染CH50多肽真核表达载体pCH510对肿瘤的治疗作用及其可能的分子机制.方法 尾静脉注射CH50多肽真核表达载体pCH510,RT-PCR检测该质粒在BALB/c小鼠肌肉和肝脏中的表达,以H22肝癌细胞接种于小鼠右后腿肌肉内,建立小鼠肝癌移植瘤模型,将小鼠分成3组,经尾静脉分别注射pCH510(C组)、pcDNA3.1(P组)和生理盐水(S组),肿瘤接种后第2天开始,每隔2天对小鼠进行治疗.HE染色观察治疗后肿瘤生长、侵袭和血管形成的改变.RT-PCR比较经CH50多肽处理的肿瘤细胞中αv、β3 和cdc2的mRNA表达.结果 小鼠肌肉和肝脏内均可检测到CH50多肽的表达,持续表达48～72 h.治疗后C组的小鼠移植肿瘤湿重为(0.80±0.18)g,小于P组的(1.75±0.23)g, 也小于S组的(2.02±0.38)g,均有显著性差异(P＜0.05),P、S组间无显著性差异.CH50多肽治疗可抑制肿瘤细胞侵袭生长和肿瘤血管生成.CH50多肽可下调H22细胞的αv、β3、cdc2基因的表达水平.结论 非定向转染表达CH50多肽有较好的肿瘤治疗作用,这可能与CH50多肽干扰了αvβ3的功能有关.
