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双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力的免疫机制
目的用双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠,探讨其对机体免疫机制的影响. 方法建立Lewis大鼠的EAMG模型,在致敏同时(A组)及缓解期第1天(B组)给予双类似物300 μg/只.动态评估大鼠临床症状,检测外周血(PB)AChR-Ab(IgG)含量,检测急、慢性期PB单个核细胞(MNC)及致敏第50天淋巴结、脾MNC中的CD4+CD25+细胞数改变. 结果治疗组大鼠临床症状减轻;治疗组及对照组大鼠PB中特异性AChR-Ab(IgG)含量随病程延续而增加,但在致敏后第5及第7周,A、B组特异性IgG抗体含量比各自对照组显著减低(P<0.05);双类似物鼻黏膜耐受治疗后,EAMG大鼠PB MNC中的CD4+细胞数减少(P<0.05),CD4+CD25+细胞数相对增加(P<0.05);A、B组淋巴结和脾MNC中CD4+细胞数减少(P<0.05),CD4+CD25+细胞数只在B组相对增加(P<0.05). 结论双类似物鼻黏膜耐受治疗病情进展中的EAMG有效;伴随临床症状缓解,治疗组大鼠AChR-Ab(IgG)含量减少且免疫调节性CD4+CD25+细胞数相对增多;双类似物治疗EAMG的可行性为抗原特异性治疗重症肌无力(MG)和其他自身免疫性疾病(AID)提供了依据.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力 鼻黏膜耐受 双类似物 -
双类似物鼻黏膜耐受在EAMG发病中的预防作用机制
目的采用双类似物(Lys262-Ala207)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻黏膜耐受不同时间点预防性给药,观察临床及免疫指标变化,以探讨其对EAMG免疫发病中的预防作用机制.方法应用乙酰胆碱受体(AChR)加福(氏)佐剂致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,在致敏前10 d(预防耐受A组)及致敏当日(预防耐受B组)经鼻腔给药,评价给药后A、B组及对照组大鼠体重、临床症状,观察肌电图变化、检测致敏第42天血清抗AChR抗体IgG及其亚型含量和第50天处死后淋巴结单个核细胞(MNC)中IFN-γ、IL-4及IL-10分泌细胞含量变化.结果 (1) 急性期和慢性期A、B组体重增加而临床症状明显轻于对照组,慢性期A组临床症状轻于B组;(2) A、B组低频重复电刺激出现明显衰减的阳性率低于对照组;(3) 慢性期A、B组IgG含量明显低于对照组,且A组低于B组,各组间抗体亚型IgG1含量无明显差异,而A、B组的IgG2a和IgG2b含量明显少于各自对照组,B组IgG2b含量高于A组;(4) A、B组淋巴结中的IFN-γ、IL-4及IL-10阳性细胞含量均明显低于各自对照组.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受不仅可有效地抑制临床症状,并使致病性强的AChR特异性IgG2抗体分泌量减少,IgG抗体亚型含量的分布发生了向Th2型细胞主导亚型的改变;不同时间点预防耐受效果不同,免疫前优于免疫同时耐受;Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受给药方便、安全、有效,可为防治人类重症肌无力提供依据.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力 双类似物 鼻黏膜耐受 预防 -
设计耐受原并用鼻黏膜耐受治疗EAMG的方法学研究
目的设计特异性耐受原,通过其鼻黏膜耐受治疗对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)发病过程的影响,以探讨该疗法在模型应用中的可行性. 方法用Lewis大鼠建立EAMG模型,选取双类似物作为耐受原在致敏同时给予鼻黏膜耐受治疗,动态观察大鼠体重及临床评分改变. 结果虽然治疗组大鼠发病率不降低,但是在EAMG急性期和慢性期,其临床症状均较对照组减轻(P<0.05). 结论用双类似物鼻黏膜耐受可以达到治疗EAMG的目的,其结果为抗原特异性治疗重症肌无力(MG)和其他自身免疫性疾病(AID)提供了依据.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力 鼻黏膜耐受 双类似物 -
鼻黏膜耐受对重症肌无力体液免疫机制的影响
目的探讨重症肌无力(MG)的特异性体液免疫异常及双类似物(Lys262-Ala207)鼻黏膜免疫耐受的疗效.方法采用ABC-ELISA系统分别检测MG患者实验组(n=39)和对照组(n=30)的AChRAb及其亚型;监测耐受前后肌电图变化;应用许氏评分法对病情的严重程度和转归进行评定.结果鼻黏膜耐受后各组间IgG总量无差异,而实验组耐受后IgG2明显低于耐受前及对照组(P<0.01,P<0.05),IgG3高于耐受前及对照组(P<0.01,P<0.05),耐受前后各组IgG4无显著差异;耐受后4周及8周两组间肌肉动作电位的波幅衰减幅度差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);MG实验组耐受后临床相对计分达50%以上者为31例,占总患者的79.48%,MG对照组临床相对计分达50%以上者为10例,占总患者的32.56%,两组间有效率差异有统计学意义(P<0.01).结论 MG患者体内存在特异性体液免疫异常,AChRAb及其亚型可反映MG患者的免疫学改变,提示MG存在免疫功能的紊乱,符合自身免疫病的特点;双类似物鼻黏膜耐受治疗有效.
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鼻黏膜耐受在实验性自身免疫性重症肌无力治疗中的作用
目的对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型采用双类似物进行鼻黏膜免疫耐受治疗,观察其临床及免疫功能的变化,评价临床疗效及探讨作用机制.方法建立Lewis大鼠EAMG实验动物模型,检测致敏同时(A组)和缓解期第1天(B组)给予双类似物鼻黏膜免疫耐受治疗后,大鼠的体重、临床症状、致敏第42天血清抗AChR抗体IgG含量.结果①EAMG大鼠经其治疗后体重增加,临床症状得以缓解.②治疗后的血清抗AChR抗体IgG含量均少于各自对照组,A组少于B组,均有显著差异(P＜0.05).结论双类似物鼻黏膜耐受治疗EAMG明显地缓解了肌无力症状,伴随特异性体液免疫功能的抑制,此结果为采用双类似物鼻黏膜耐受治疗人类MG提供了依据.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG) 双类似物 鼻黏膜耐受 -
重症肌无力特异性细胞免疫应答与鼻黏膜耐受疗效的分析
目的探讨重症肌无力(MG)的特异性细胞免疫异常应答及双类似物鼻黏膜免疫耐受疗效.方法检测MG患者和健康对照者的外周血中单个核细胞中CD4+及CD4+CD25+T细胞;检测IFN-γ、IL-4及IL-10分泌细胞含量,并对病情的严重程度和转归进行评定.结果MG组鼻黏膜耐受治疗前IFN-γ、IL-4及IL-10阳性细胞含量均明显高于各自健康对照组(P均＜0.01),治疗后明显低于治疗前,但与各自的对照组无明显差异(P均＞0.05);CD4+T淋巴细胞与对照组比较无明显差异,耐受治疗后较治疗前降低,但无显著差异(P均＞0.05);其亚群CD4+CD25+T细胞耐受治疗前明显低于对照组,治疗后明显高于治疗前及对照组(P均＜0.01);而CD4+CD25-T细胞治疗前明显高于对照组,耐受治疗后明显低于治疗前(P＜0.01).结论MG患者体内存在特异性细胞免疫活化和细胞因子网络的失衡,外周血中单个核细胞的免疫参数可反映MG患者的免疫学改变,提示MG存在免疫功能的紊乱,符合自身免疫病的特点;双类似物鼻黏膜耐受治疗有效.
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Dual APL对EAMG免疫治疗时临床症状、黏附分子及趋化因子的影响
目的 探讨双修饰性多肽配体(dual altered peptide ligand,dual APL)对实验性重症肌无力(experimental autoimmune myastheia gravis,EAMG)鼻黏膜免疫耐受时临床症状的影响,以及黏附分子及趋化因子在EAMG鼻黏膜免疫致病耐受机制中的作用.方法 用AChR-α肽段P259-271联合白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)建立EAMG鼠模型,将模型鼠随机分为干预组(经鼻黏膜给予dual APL,n=13)和模型组(经鼻黏膜给予生理盐水,n=13),进行临床评分、重复神经电刺激、光镜下观察dual APL免疫干预后胸腺增生情况及电镜下神经肌肉接头突触后膜损害程度,用ELISA法检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及趋化因子-10(interferon inducible protein-10,IP-10)的表达.结果 ①dual APL免疫干预后可诱导鼻黏膜免疫耐受使临床症状减轻.②模型组鼠胸腺增生可见胸腺小体；模型组突出后膜皱褶数较干预组减少.③干预组黏附分子ICAM-1表达[(189.8±146.7) U/mL]较模型组[(547.3 ±251.4) U/mL)]减低(P＜0.05)；④干预组体内IP-10水平[(0.79±0.32) pg/mL]较模型组[(6.08±1.57) pg/mL]降低(P＜0.01)；干预组T细胞趋化数30 min[(5.3 ±0.3)×103/mL]、60min[(5.1±0.5)×103/mL]、90 min[(7.4±1.3)×103/mL]较模型组[(17.3±5.3)×103/mL、(20.0±6.7)×103/mL、(28.0 ±4.0)×103/mL]明显减少(P均＜0.01),两组T细胞趋化数均在90 min达高峰.结论 dual APL能改善临床症状并可能具有抑制特异性T细胞与血管内皮细胞的黏附及趋化功能.
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E-选择素鼻黏膜耐受对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其机制的实验研究
目的 探讨E-选择素鼻黏膜耐受对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响及其发生的可能机制.方法 采用3种处理方法,在大鼠鼻内滴人磷酸盐缓冲溶液(PBS)、E-选择素或不滴入任何药物.诱导方案结束后,建立大鼠脑缺血2 h再灌注22 h模型,用流式细胞仪检测血中CD3~+CD4~+T、CD3~+CD8~+T细胞的表达,计算机检测脑梗死体积,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脑缺血再灌注组织中白细胞介素-10(IL-10)及转化生长因子-B1(TGF-β1)mRNA表达.结果 加强诱导组中E-选择素组较其他2组比较,以及E-选择素的加强诱导组与单程诱导组比较均表现为CD3~+CD4~+T淋巴细胞表达无差别(P>0.05),CD3~+CD8~+T表达明显减少(P<0.05),脑梗死体积明显缩小(P<0.05),IL-10 mRNA的表达增加(P<0.05),TGF-131 mRNA表达呈增加趋势(0.05
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双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用
目的采用双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药,观察临床发病变化,并评价疗效,探讨其控制EAMG临床发病作用机制.方法应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,并在致敏前10天(A组)及致敏当日(B组)鼻腔给药.观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化.结果①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组,P均<0.05;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组,P均<0.05.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力 双类似物 鼻黏膜耐受 大鼠 -
双类似物对重症肌无力幼鼠Foxp3+CD4+CD25+Tregs的作用机制
目的 评价鼻黏膜免疫耐受预防性双类似物Lys262-Ala207给药对重症肌无力被动转移(PTMG)幼鼠的临床疗效,探讨Foxp3对PTMG幼鼠发病的免疫干预作用和调节机制.方法 应用乙酰胆碱受体单克隆抗体(mAb35)建立C57 BL/6小鼠PTMG模型,将24只幼年雌性C57BL/6小鼠分为3组:耐受组(T组)、模型对照组(MC组)、正常对照组(C组),并从致敏前10 d每天经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207或PBS.检测耐受后各组小鼠的临床症状.采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4+ CD25 +T淋巴细胞及Foxp3+ CD4+CD25+ Tregs水平,实时荧光定量聚合酶链反应分析小鼠脾细胞中Foxp3 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠血清IL-2、IFN-γ水平.结果 1.T组小鼠临床症状明显轻于MC组,但未达到正常.2.T组小鼠重复频率电刺激(RNS)出现衰减的阳性率低于MC组,血清AchR-Ab水平明显低于MC组,但2组与C组相比仍明显增高,差异均有统计学意义(P均＜0.05).3.T组小鼠脾细胞中CD4+ CD25+T淋巴细胞/CD4+T淋巴细胞、Foxp3+CD4+ CD25+ Tregs/CD4+ CD25+T淋巴细胞均较MC组高,差异均有统计学意义(P均＜0.01,0.05)；且均低于C组,但差异无统计学意义(P均＞0.05).T组小鼠脾细胞中Foxp3 mRNA表达量较MC组增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；且低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).T组小鼠血清IL-2、IFN-γ水平较MC组均显著减低,较C组均显著增高,差异均有统计学意义(P ＜0.01,0.05).结论 Lys262-Ala207经鼻黏膜耐受对预防幼鼠PTMG发病具有一定作用.Lys262-Ala207诱导PTMG发生免疫耐受的机制之一可能是通过上调Foxp3mRNA的表达.Foxp3有可能是MG治疗的一个靶基因.
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双类似物鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力幼鼠作用机制的研究
目的 对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)幼鼠选择双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时问点进行鼻黏膜免疫耐受预防性给药后,观察其临床及免疫指标的变化,评价临床疗效及探讨鼻黏膜耐受对EAMG的预防作用机制.方法 用乙酰胆碱受体单克隆抗体建立C57BL/6小鼠EAMG模型,并在致敏前10 d(A组)及致敏当日(B组)经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207诱导黏膜耐受,检测给药后A,B组及相应对照组CA组、CB组小鼠的临床症状及各项指标的改变情况.结果 ①A,B两组临床症状明显轻于相应对照组,且A组临床症状轻于B组.②A,B组低频重复电刺激(RNS)出现衰减的阳性率低于各自对照组;③A,B两组小鼠血清乙酰胆碱受体抗体AchRAb(IgG)水平明显低于各自对照组,且A组轻于B组.④调节性CD4+CD25+T细胞含量A组(4.516±0.598)明显高于B组(3.671±0.300),且A,B组明显高于各自对照组.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受可有效地抑制重症肌无力的临床症状,为采用该途径治疗重症肌无力的可行性提供了理论依据.
关键词： 实验性自身免疫性重症肌无力 单克隆抗体 鼻黏膜耐受 双类似物 小鼠 -
Th1/Th9/Th17细胞失衡对实验性自身免疫性重症肌无力幼鼠的影响及机制初探
目的:对实验性自身免疫性重症肌无力(myasthenia gravis,MG)幼鼠采用双类似物(Lys262-Ala207)经鼻黏膜诱导免疫耐受后,了解实验幼鼠Th1 /Th17/Th9细胞及产生相关细胞因子的细胞变化情况及其与EAMG幼鼠发病的相关性,探讨其调控作用机制.方法:将30只幼年雌性C57BL/6小鼠采用完全随机分组方法分为3组:模型组、耐受组和对照组.模型组经腹腔注射含1.0 mg/kg mAb35的Ringer's液0.2 ml,建立EAMG模型;耐受组在致敏前10d先经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207诱导黏膜耐受,再按照模型组方式进行处理;对照组注射不含mAb35的Ringer's缓冲液0.2 ml.采用流式细胞仪检测小鼠脾脏细胞中分别代表Th 1/Th17/Th9细胞功能的CD4+干扰素(interferon,IFN)-γ+细胞、CD4+白介素(interleukin,IL)-17+细胞和CD4+ IL-9+细胞的含量.采用双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-17、IL-9的水平.结果:(1)MG的临床表现对照组明显轻于模型组和耐受组,而耐受组经双类似物免疫耐受后,其临床症状也较模型组明显减轻.(2)模型组、耐受组和对照组的CD4+IFN-γ+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00);(3)模型组、耐受组和对照组的CD4+IL-17+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00);(4)模型组、耐受组和对照组的CD4+ IL-9+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00).(5)模型组、耐受组和对照组的脾细胞上清中细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-9的水平3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00).结论:采用Lys262-Ala207对实验幼鼠进行鼻黏膜耐受后不仅能有效的缓解其MG的临床症状,同时还能下调导致实验幼鼠发病的CD4+ IFN-γ+细胞、CD4+IL-17+细胞和CD4+ IL-9+细胞含量水平以及细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-9的水平,缓解Th1/Th17/Th9细胞功能失衡现象,从而达到预防和减轻实验幼鼠发病的作用.
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鼻黏膜耐受对实验性重症肌无力大鼠胸腺细胞凋亡的影响
目的 探讨鼻黏膜耐受处理对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠胸腺细胞凋亡及Caspase-3表达的影响.方法 将实验大鼠随机分为正常对照组、EAMG组和耐受组,将EAMG组及耐受组大鼠采用Rα97-116肽段多点皮下注射法制备成EAMG大鼠模型后,再将耐受组大鼠经鼻腔滴注Rα97-116(V108A)行免疫耐受处理,10 d后评估疗效(临床症状、体质量、抗体滴度等),并采用TUNEL法计数对照组、EAMG组及耐受组大鼠胸腺细胞的凋亡程度,用免疫组化法检测3组大鼠胸腺淋巴细胞内Caspase-3的表达,并分析其阳性细胞染色强度.结果 EAMG组大鼠胸腺细胞的凋亡数较对照组显著减少,鼻黏膜耐受处理能明显促进EAMG大鼠胸腺细胞的凋亡,并改善EAMG大鼠的肌无力症状,增加其体重及降低AchR抗体滴度.EAMG组胸腺中Caspase-3阳性细胞表达较对照组明显下调,耐受组其表达则明显增加,3组之间有显著的统计学意义(F=58.26,P<0.01).结论 Rα97-116(V108A)鼻黏膜耐受能明显减轻EAMG大鼠肌无力症状,缓解胸腺细胞凋亡异常.
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经鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠EAE的实验研究
目的:探讨鼻黏膜给予MBP68-86和87-99协同免疫预防Lewis大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用.方法:合成3条不同的碱性髓鞘蛋白(MBP)多肽(MBP68-86、87-99和非致脑炎性肽段110-128),在用豚鼠MBP(gp-MBP)加弗氏完全佐剂免疫Lewis大鼠前的11、10、9、8和7 d,经鼻黏膜分别给予MBP多肽,观察其对EAE的保护作用.结果:致脑炎性肽段MBP68-86和87-99都有保护作用,其中MBP68-86的保护作用更强; 而MBP110-128没有保护作用.鼻黏膜给予MBP68-86+87-99的混合物,在相对低的剂量可完全阻断gp-MBP引发的EAE.淋巴细胞增殖实验和IFN-γ ELISPOT检测显示,与鼻黏膜给予大鼠MBP110-128组相比,鼻黏膜给予大鼠MBP68-86+87-99可降低T细胞对于MBP的反应性,淋巴结单核细胞中表达IFN-γ和TNF-αmRNA的细胞数减少,而两组表达TGF-β及IL-4 mRNA的淋巴细胞数都低.结论:鼻黏膜给予致脑炎性MBP多肽能够导致抗原特异性T细胞耐受,对gp-MBP引发的EAE提供不完全的保护,MBP68-86和MBP87-99具有协同作用.鼻黏膜给予多肽引发的免疫耐受与非调节机制有关.
