Iron overload can lead to cytotoxicity, and it is a risk factor for diabetic peripheral neuropathy. However, the underlying mechanism remains unclear. We conjectured that iron overload-induced neurotoxicity might be associated with oxidative stress and the NF-E2-related factor 2 (Nrf2)/ARE signaling pathway. As an in vitro cellular model of diabetic peripheral neuropathy, PC12 cells ex-posed to high glucose concentration were used in this study. PC12 cells were cultured with ferric ammonium citrate at different concentrations to create iron overload. PC12 cells cultured in ferric ammonium citrate under high glucose concentration had significantly low cellviability, a high rate of apoptosis, and elevated reactive oxygen species and malondialdehyde levels. These changes were dependent on ferric ammonium citrate concentration. Nrf2 mRNA and protein expression in the fer-ric ammonium citrate groups were inhibited markedly in a dose-dependent manner. Al changes could be inhibited by addition of deferoxamine. These results indicate that iron overload aggravates oxidative stress injury in neural cells under high glucose concentration and that the Nrf2/ARE sig-naling pathway might play an important role in this process.

糖尿病小鼠加重脑缺血后认知障碍的相关机制研究

目的：探讨氧化应激损伤对糖尿病小鼠局灶性脑缺血后认知功能的影响。方法制备糖尿病模型，参照Longa等方法制成大鼠局灶性大脑中动脉阻断（MCAO）模型，采用Longa法进行神经功能缺失评分，苏木精-伊红染色测定梗死体积，Western blotting法检测Nrf2/HO-1及认知相关性蛋白p-CaMKII/CaMKII、p-Synapain/Synapain、p-GluR1/GluR1的蛋白表达。结果糖尿病小鼠局灶性脑缺血－再灌注后神经功能缺失评分、梗死体积较非糖尿病组明显严重（P<0.05），同时伴有脑组织Nrf2/HO-1、p-CaMKII/CaMKII、p-Synapain/Synapain、p-GluR1/GluR1蛋白表达下调（P<0.05）。结论糖尿病小鼠局灶性脑缺血—再灌注后Nrf2/HO-1表达降低，且与神经功能缺失及p-CaMKII/CaMKII、p-Synapain/Synapain、p-GluR1/GluR1表达下调一致，提示Nrf2/HO-1是糖尿病脑梗死后导致认知障碍的关键环节。

人参皂苷对波动性高糖所致内皮细胞损伤的作用及机制研究

目的 观察人参皂苷对波动性高糖所致内皮细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低中高浓度组(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL).Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达;RT-PCR检测下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的mRNA表达;Western blot检测瞬时转染Nrf2 siRNA质粒后Nrf2总蛋白和核蛋白及下游HO-1、γ-GCS和NQO1蛋白的表达.结果 人参皂苷治疗后,HUVECs中的Nrf2核蛋白及下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1表达均明显增强(P＜0.05).瞬时转染Nrf2 siRNA质粒后,人参皂苷的治疗作用消失.结论 人参皂苷通过促进Nrf2核转位,调控Nrf2/ARE信号通路发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用.

Nrf2/ARE信号通路的调控与肺纤维化

肺纤维化是由多种原因引起的肺间质的炎症性疾病,病变主要累及肺间质,也可累及肺泡上皮细胞及肺血管. 明确的病因有石棉、霉草尘、棉尘、药物及放射性损伤等等, 未知原因的称之为特发性肺纤维化(IPF),约占 65%左右,是一种特殊类型、慢性进展性、纤维化型间质性肺炎,主要发生于老年人,病变局限于肺部,组织病理学或(和)高分辨率CT(HRCT)显示普通间质性肺炎(UIP)特征,平均生存时间仅2-5年 [1]. 目前药物治疗效果不佳,因此积极寻找有效靶点,一直是国内外研究的热点. 有大量临床及动物实验证明肺纤维化发病机制中存在氧化与抗氧化失衡[2]. 另外从2011年由 ATS、ERS、JRS 和ALAT 共同制定的特发性肺纤维化诊治指南可以看出: 传统的激素及细胞毒药物强烈不建议使用,但是弱不推荐单用N-乙酰半胱氨酸制剂. Nrf2 (nuclea factor erythroid-2-related factor 2)是一种氧化应激基本表达的关键转录因子,存在于全身多个器官,如肺脏、肝脏、肾脏、睾丸等,它的缺失或激活障碍直接引起细胞对应激源的敏感性变化. 通过激活Nrf2/ARE信号通路,可以增加抗氧化蛋白及Ⅱ相解毒酶的合成,进而人体增强的抗氧化能力, 达到延缓肺纤维化进展的目的.

茶多糖对高糖诱导下HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用及TGF-β1、α-SMA表达的影响

目的:研究茶多糖(TPS)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)的氧化应激损伤的保护作用及其机制,探讨茶多糖对高糖诱导下HK-2细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:DCFH-DA(组织活性氧荧光定量)法检测茶多糖对高糖刺激下HK-2细胞内活性氧(ROS)水平的影响.RT-PCR检测TGF-β1、α-SMA mRNA的表达.Western-blot检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、TGF-β1、α-SMA蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,高糖组ROS水平显著升高,经茶多糖干预后,ROS水平显著降低,其作用呈浓度依赖性;与正常对照组比较,高糖组Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高,经茶多糖干预后,与高糖组比较,Nrf2、HO-1蛋白表达均显著升高;与正常对照组比较,高糖组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达均显著升高,经茶多糖干预后,TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达均显著降低.结论:茶多糖能减少高糖诱导的氧化应激损伤,其机制与激活Nrf2/ARE途径有关.茶多糖能降低TGF-β1和α-SMA的表达,减少高糖诱导下HK-2细胞EMT的发生.

MAPKs和Nrf2/ARE通路调控卵巢颗粒细胞氧化应激的机制研究

目的 运用过氧化氢(H2O2)制作人卵巢颗粒细胞(COV434)氧化应激模型,通过检测氧化应激MAPKs和抗氧化应激Nrf2/ARE通路的变化,探讨COV434氧化应激的机制.方法 研究不同H2O2浓度(0.5、1、1.5 mmol/L)和不同作用时间(1、2、4、6及12 h)梯度下,MAPKs家族中ERK、P38及JNK蛋白及其磷酸化的表达水平,Nrf2/ARE通路中Nrf2、keap1和P62蛋白表达水平.结果 在H2O21.5 mmol/L浓度作用下,COV434细胞内p-ERK、p-P38、p-JNK在1h表达强;在不同浓度H2O2作用4h后,p-ERK不随浓度的变化而变化,然而p-P38、p-JNK随浓度的增加表达增强;Nrf2蛋白表达随着H2O2作用时间的延长和浓度的增加逐渐增强;Keap1在H2O21.5 mmol/L浓度作用下,随着时间延长蛋白表达轻度下降,而P62的蛋白表达轻度上升;在不同浓度H2O2作用4h下Keap1变化不明显,而P62表达稍微增强.结论 MAPKs 3个亚族均参与了H2O2诱导COV434氧化应激过程,氧化应激可以诱导细胞内Nrf2的蛋白表达,提示Nrf2/ARE通路在COV434自我抗氧化中发挥作用.

白藜芦醇经NRF2/ARE通路减轻MPTP毒性研究

目的 观察白藜芦醇(resveratrol,trans-3,4′,5trihydroxystilbene,RE)对帕金森病(PD)斑马鱼多巴胺神经元的保护作用及其机制.方法 本研究分为5组:1)空白对照组(con组);2)200μM/L MPTP处理组(MPTP组);3)60μM/L RE处理组(RE组);4)先加60μM/L RE,12 h后加200μM/L MPTP组(MR1组);5)先加200μM/L MPTP,12 h后加60μM/L RE组(M1R组),每组含斑马鱼25条.每组斑马鱼发育至第4天时观察药物对多巴胺神经元、PD相关基因和NRF2/ARE信号通路的影响.解剖显微镜观察斑马鱼的运动功能、外部形态;激光共聚焦显微镜观察多巴胺神经元;荧光定量PCR检测PD相关基因parkin、pink1、dj-1以及抗氧化相关基因sod、cat的表达;Western blot检测Nrf2蛋白表达.结果 与con组相比,MPTP组斑马鱼出现尾巴后弯,多巴胺神经元减少,RE回救多巴胺神经元数量;MPTP组PD相关基因和氧化应激相关基因表达下调,Nrf2蛋白表达水平下降;MIR与MR1组PD相关基因、氧化应激相关基因及Nrf2蛋白的表达得到援救.结论 MPTP对斑马鱼多巴胺神经元具有毒性作用,RE可减弱MPTP的毒性,可通过抗氧化应激来实现.