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肝核受体激动剂对人表皮鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖作用的影响
目的 探讨肝核受体LXRs激动剂T0901317人表皮鳞状细胞癌SCL-1细胞增殖的影响及可能机制.方法 CCK-8法检测不同浓度T0901317(1.0、10.0、20.0μmol/L)作用SCL-1细胞24、48、72 h后细胞增殖率的变化.流式细胞仪检测不同浓度肝核受体激动剂对SCL-1细胞周期分布的影响.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹试验(Western blot)检测肝核受体激动剂对细胞周期相关因子PCNA、p21、p27、CCND1表达水平的影响.结果 T0901317可明显抑制SCL-1细胞增殖,并呈现一定的时间和浓度依赖性;肝核受体激动剂作用于细胞株后,SCL-1细胞的G1期百分率上升,而S期、G2期百分率下降;且在一定浓度范围内导致细胞周期因子p21的mRNA及蛋白表达增加,而其他细胞周期相关因子表达未见明显变化.结论 肝核受体LXRs激动剂可能通过促进细胞周期调节负性因子p21的表达,导致细胞周期静息甚至停滞于G1期,从而抑制细胞增殖.
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Notch1信号途径在皮肤鳞癌SCL-1细胞中的激活及其对细胞周期的影响
目的:研究Notch1及其下游靶基因Hes1在皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞株SCL-1细胞中的表达及上调Notch1表达对细胞周期的影响.方法:将Notch1真核表达载体通过脂质体2000转染SCL-1细胞,通过反转录(RT)-PCR和Western blotting检测Notch1和Hes1基因在皮肤鳞癌SCL-1细胞中的表达,并利用CCK-8试剂分析上调Notch1表达对皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖的影响,通过流式细胞仪观察Notch1过表达对细胞周期的影响.结果:SCL-1细胞中存在Notch1和Hes1基因表达,提示该信号途径在皮肤鳞癌细胞中处于激活状态,转染Notch1真核表达载体后,与未处理组和空载体组相比,转染组中Nowh1和Hes1的mRNA和蛋白表达都明显增加(P<0.05).此外,细胞增殖实验结果表明,过表达Notch1能明显抑制皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖.流式细胞仪检测结果显示,Notch1过表达使细胞周期静止在G0/G1期.结论:Notch1过表达能引起皮肤鳞癌SCL-1细胞的细胞周期静止在G0/G1期,Notch1信号途径可能在皮肤鳞癌的进展中起作用.
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咪喹莫特对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞株增生及凋亡的影响
目的 探讨咪喹莫特对体外培养人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞株的增生抑制及凋亡诱导作用.方法 采用MTT法分析咪喹莫特对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞的增生,倒置显微镜观察细胞形态学,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,吖啶橙荧光染色检测细胞凋亡晚期形态改变,细胞死亡检测试剂盒检测细胞凋亡的程度,细胞免疫组化和RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2的表达.结果 咪喹莫特可明显抑制人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞的增殖,并可导致其形态学改变.经0.150mg/mL咪喹莫特作用后24 h,SCL-1细胞早期凋亡率大,达47.23%;作用48 h,可见典型凋亡小体.SCL-1细胞凋亡程度随咪喹莫特浓度增高、作用时间延长呈递增关系,经咪喹莫特作用后可上调Fas和下调bcl-2基因表达.结论 咪喹莫特可明显抑制SCL-1肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡.
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姜黄素对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞的去甲基化作用研究
目的 观察姜黄素作用于皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞后E-cadherin和p14ARF基因甲基化状态及基因表达的改变情况,为姜黄素的临床应用提供理论依据.方法 用不同浓度(10μmol/L、20 μ mol/L、40 μmol/L)的姜黄素处理皮肤鳞癌细胞株SCL-1,MTT法检测细胞增殖情况,甲基化特异性PCR(MSP)法检测E-cadherin和p14ARF基因甲基化状态的改变,RT-PCR法检测E-cadherin和p14ARF基因的表达情况.结果 姜黄素可抑制SCL-1细胞的增殖,且呈现时间-剂量依懒性;当姜黄素浓度增至40 μmol/L时,SCL-1细胞的E-cadherin和p14ARF基因甲基化减弱、表达增强.结论 姜黄素可明显抑制SCL-1细胞增殖,适当浓度的姜黄素对SCL-1细胞的E-cadherin和p14ARF基因有一定的去甲基化作用,并可以调控E-cadherin和p14ARF基因的表达.
关键词： 姜黄素 DNA甲基化 SCL-1细胞 E-cadherin基因 p14ARF基因 -
过表达JNK2增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖及抗凋亡能力
目的 探讨c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)或JNK2过表达对SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 将JNK1、JNK2分别与pHBAD-EF1-MCS-3FLAG-CMV-GFP载体结合,构建JNK1和JNK2的重组腺病毒表达载体,感染SCL-1细胞,优化感染条件,实时荧光定量PCR和Western blot法鉴定过表达效果.CCK-8法测定SCL-1细胞的增殖活性,细胞克隆形成实验观察细胞集落形成能力,划痕实验检测细胞划痕愈合率;流式细胞术检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测JNK1、JNK2、c-Jun mRNA水平;Western blot法检测磷酸化c-Jun的蛋白水平.结果 JNK1、JNK2过表达腺病毒载体佳感染条件为感染复数(MOI)=100,感染48 h后,SCL-1细胞的JNK1和JNK2的表达水平显著升高.与对照组相比,过表达JNK1对SCL-1细胞的增殖和抗凋亡能力无显著影响,过表达JNK2的SCL-1细胞增殖和抗凋亡能力明显增强,且磷酸化c-Jun蛋白水平上调.结论 过表达JNK2可以增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖能力和抗凋亡能力.
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ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞体外活性的影响
目的 本研究探讨ALA-PDT不同处理参数对鳞状细胞癌细胞体外活性的影响,为临床上探索皮肤鳞状细胞癌新的治疗方案提供理论依据.方法 首先在96孔板上培养SCL-1细胞,配置不同浓度的ALA培养液、不同的孵育时间,设定不同的功率密度以及光照时间,对皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞株进行ALA-PDT处理[(633±5)nm的红光],用CCK-8法测定活细胞数量.结果 在孵育时间固定在2h,ALA浓度范围为(1.56×10-2 ～5×10-1) mg/mL时,ALA-PDT处理后SCL-1活细胞数量随着浓度的增加而降低,当ALA浓度达2.5×10-1mg/mL时SCL-1活细胞数量降低不明显.在ALA浓度为6.25×10-2mg/mL,孵育30 ～ 180min时,SCL-1活细胞数量随着ALA孵育时间的增加而降低,当孵育时间达150min时SCL-1活细胞数量降低不明显.光照时间固定为16min,光照功率密度为20 ～80mW/cm2时,随着功率密度增大SCL-1活细胞数量降低,当功率密度达60mW/cm2趋于稳定.功率密度固定为20mW/cm2,光照2 ～ 32min,SCL-1活细胞数量随着光照时间的延长而降低.结论 合适参数的ALA-PDT处理对SCL-1细胞具有杀伤作用,其杀伤作用与ALA浓度、孵育时间、光照剂量有关.
