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他汀类调血脂药的临床应用
近年来,全球调血脂药物的开发有了长足迈进,而HMG-COA还原酶抑制剂(他汀类)药物的问世,是20世纪后期心血管类药物发展史上的又一个里程碑.回顾"他汀类"药物的发展历程,自1976年日本学者Endo首先成功地从桔青霉菌中分离出美伐他汀,随后又从红曲霉菌代谢物中分离出活性更强的同类物质,研究证明这类物质在动物与高胆固醇血症人群中,均具有降低血清总胆固醇水平的作用.
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空间飞行对红曲霉菌产量的影响
目的选育高产洛伐他汀的红曲霉菌菌株.方法利用"神舟3号"返回式飞船搭载了红曲霉菌.对搭载后的菌株进行复壮、分离和筛选,并进行固体发酵,检测发酵产物中洛伐他汀产量.结果从众多分离到的变异菌株中筛选到十几株高产洛伐他汀的菌株,一系列实验表明其高产性状是稳定的.结论航天搭载是选育优良菌株的有效手段.
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搭载后红曲霉菌突变株的染色体DNA随机扩增多态性分析研究
目的研究太空诱变机理.方法利用染色体DNA随机扩增多态性分析(RAPD)技术,对经"神舟"3号返回式飞船搭载的高产红曲霉菌进行DNA多态性分析.结果 突变株基因组DNA发生了改变.结论突变株洛伐他汀产量的提高与其遗传基因的变异有关,太空诱变是通过改变搭载菌株的遗传基因而实现的.
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随机扩增多态性DNA技术在中药红曲基原菌系统分类中的应用
目的:建立中药红曲基原菌的随机扩增多态性DNA(RAPD)分析方法.方法:以CTAB法提取紫色红曲霉等 7种红曲霉和1株土曲霉的基因组DNA;溴化乙啶荧光强度和分光光度双重测定法确定DNA浓度 ;琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物,PHYLIP 3.5c 进行聚类分析.结果:从60个随机引物中筛选出S282等10个引物的扩增产物谱带多,特征好;红曲霉属种间指纹图谱差异较大,呈现出明显的DNA扩增产物多态性.结论: RAPD分析技术可作为真菌系统分类的客观而有效的手段之一.
关键词： 红曲 红曲霉菌 随机扩增多态性DNA 分类 -
中药红曲基原真菌的高效毛细管电泳色谱法鉴别
目的:建立一种中药红曲基原真菌新的鉴定方法.方法:采用毛细管区带电泳分离模式,背景电解质为20 mmol/L硼酸盐缓冲液(pH 9.11),电压20 kV,温度25 ℃;紫外检测波长214 nm,压差进样,进样时间5 s.结果:不同种红曲霉胞内和胞外水溶性蛋白质的成分和含量均存在显著差异.根据红曲霉胞内或胞外水溶性蛋白质4～10 min区间内的指纹图谱及这些峰的相对含量,可以有效地鉴别红曲霉属真菌,结果与形态学以及扫描电镜的检验结果一致.结论:高效毛细管电泳可用于红曲霉等真菌的分类和鉴定.
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红曲发酵过程中杂菌污染原因分析
目的 查找红曲霉菌发酵过程中出现大面积污染造成发酵产量、含量严重下降的原因.方法 随机对照分组实验,对实验数据结果作对比分析判断.结果 由菌种造成的污染率约为4.31%;由接种操作造成的污染率约为1.76%.结论 菌种不纯、接种操作不规范是造成污染的主要原因.
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姜黄素经红曲霉菌发酵后对高脂血症小鼠脂代谢的影响
目的:利用红曲霉菌对姜黄素进行发酵,研究发酵后姜黄素对高脂血症小鼠脂代谢的影响.方法:选择本实验室保存的不产洛伐他汀的红曲霉菌,制成适量的孢子悬液,加入到装有1%姜黄素的发酵培养基中,恒温培养进行姜黄素的发酵.设只含1%姜黄素而不接种菌株的底物对照,考察转化液中是否存在非微生物引起的药物分解产物;设不含姜黄素的菌株对照,排除菌株的发酵产物和培养基残留成分的干扰.昆明种小鼠喂饲高脂饲料15d形成高脂血症模型,以高、中、低剂量(质量浓度分别为500、200、100 mg/kg)的发酵姜黄素灌胃;设底物对照和菌体对照治疗组(500 mg/kg);模型组、正常组等容积生理盐水灌胃.治疗10 d后禁食12 h,摘眼球取血,酶法测定TC、TG、HDL-C;取肝脏匀浆后,提取上清液,测定TC、TG、HDL-C.结果:发酵后姜黄素高、中、低剂量治疗均能显著减低高脂血症小鼠血清TC、TG,血清TC降低幅度分别为38.7%、34.5%、32.7%,TG降低幅度分别为38.3%、28.6%、30.1%,而底物对照组和菌体对照组的治疗效果不明显.发酵后姜黄素亦能降低高脂血症小鼠肝脏TC、TG,且同等质量浓度的底物姜黄素疗效不明显.结论:姜黄素发酵后能显著提高高脂血症小鼠的血脂调节能力.
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SMART技术构建红曲霉全长cDNA文库
目的 构建红曲霉cDNA文库,为红曲霉功能基因的研究以及筛选、克隆红曲霉次生代谢产物合成途径相关基因奠定基础.方法 采用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术构建红曲霉全长cDNA文库,经涂平板和酶切反应测定文库的克隆数、重组率,PCR测定插入片断的大小.结果 原始文库的库容为2.03×105,重组率达94%.插入片段大小多在0.7～2.0 kb,平均大小在1 kb左右.结论 所构建文库的代表性和重组片段的序列完整性达到了用于目的 基因的分离筛选和克隆表达的建库要求.
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HPLC测定糯米红曲中的洛伐他汀
目的 采用HPLC法测定糯米红曲中洛伐他汀类成分的含量.方法 以酸式洛伐他汀及内酯型洛伐他汀为指标性成分测定糯米红曲中洛伐他汀的含量.结果 糯米红曲中酸式洛伐他汀和内酯型洛伐他汀的含量分别为0.29％ ～0.51％、0.59％ ～0.81％.结论 所用方法操作简单、准确可靠、重复性良好,可用于糯米红曲的质量控制.
