纹带棒杆菌医院内感染状况分析

随机扩增多态性DNA在淋球菌基因分型中的应用

目的建立随机扩增多态性DNA(RAPD)对淋球菌进行基因分型的方法.方法用4种不同的预处理方法提取淋球菌基因组DNA,对其优劣进行比较;并运用RAPD对淋球菌菌株进行区分及对经性伴传播的淋病病例进行RAPD指纹图谱比较.结果运用经典的十六烷基三乙基溴化铵法可以抽提较完整的基因组DNA,获得良好的RAPD指纹图谱;各菌株的RAPD指纹图谱间有明显不同DNA多态性;性伴传播的病例中获得了非常相似的RAPD指纹.结论选择佳的DNA抽提技术,运用RAPD可以对淋球菌进行有效基因分型,并可用于分子流行病学对传染源的追踪.

霍山石斛不同生长阶段遗传稳定性的RAPD分析

目的:研究霍山石斛同一蒴果组培不同生长阶段遗传稳定性.方法:利用从20个随机引物筛选的3个稳定性较好的10碱基引物对已继代7-8次的H23种群进行RAPD检测.结果:发现不同阶段内遗传相似系数较大,在85.409 3%～98.360 6%,其中在原球茎、萌芽期和一叶期存在的变异比两叶期、开花期要显著,但程度都极其微弱.结论:来自同一蒴果的变异非常小,建立霍山石斛稳定的无性快繁系是切实可行的.

我国西洋参引种30年后遗传稳定性研究

以人参及加拿大西洋参为对照,对我国14个产地的西洋参的遗传多样性进行分析,以了解我国西洋参引种30年后遗传稳定性是否发生了明显变异.应用了RAPD分子标记技术,POPGEN32数据分析,NTSYS2.10聚类图绘制.结果显示,各产地西洋参遗传多样性丰富,其中13条随机引物共扩增出多态性条带81条,多态性83.51％;有效等位基因数(Ne)1.456 7;Nei's基因多样性指数(H)0.274 8;Shannon's多样性信息指数(Ho)0.419 4.聚类分析可知,人参与西洋参分类明显,特别发现无人参生产的地区的西洋参与有人参生产的地区的西洋参可明显各聚一类,认为在遗传上未达到质的变异.因此提出吉林省西洋参要注意建立良种田,以保持种质纯净的建议.

中国日本血吸虫DNA遗传变异及聚类分析

目的:探讨中国日本血吸虫的遗传变异及相互进化关系.方法:采用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对中国大陆及台湾不同地域的日本血吸虫进行RAPD扩增,计算地域株间的遗传距离,并以非加权配对聚类分析(UPGMA)法绘制中国日本血吸虫的聚类图.结果:中国大陆与台湾各聚一类;大陆的四川山区与湘、鄂、赣湖区分别聚为一类;湖区的湖北武汉、湖北钟祥与湖南岳阳聚为一类,湖北阳新与江西新建聚为一类,湖北松滋自成一类.结论:中国日本血吸虫亲缘关系密切,存在共同的起源,同时在基因型上存在不同程度的遗传分化,分化的程度同地理生态环境差异相关.

白色念珠菌磷脂酶活性与RAPD电泳条带多元回归模型的建立

目的 探讨白色念珠菌磷脂酶活性与随机扩增多态性DNA(RAPD)电泳条带之间的关系,构建多元回归模型.方法 通过蛋黄琼脂平板法对144株白色念珠菌磷脂酶活力进行检测,通过RAPD方法进行扩增并电泳,统计学行多元回归分析.结果 144株白色念珠菌磷脂酶阳性率为81.94%,Pz值为0.73±0.015.白色念珠菌磷脂酶活性与450、1 200和1 300 bp 3条带显著相关(P＜0.01).结论 RAPD部分电泳条带可间接反映白色磷脂酶活性的强弱,其所含基因信息可能与白色念珠菌的分泌与调节有关.

随机扩增多态性DNA技术用于青藏高原型鼠疫菌的比较

目的 对青海、西藏和甘肃省(自治区)境内不同宿主体内分离的21株青藏高原型鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的基因进行分析,旨在比较不同宿主鼠疫菌之间的关系.方法 采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术.结果 扩增产物在凝胶电泳上显示的条带,其中16007、28001、01080号菌株相同,且与其余18株菌株存在差别.结论 该实验中不同宿主体内检出的21株青藏高原型鼠疫菌在遗传学上属于同源.

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分子流行病学研究

目的:建立随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测重症监护室铜绿假单胞菌(PA)医院感染.方法:收集一年内从重症监护病房(ICU)分离出的21株铜绿假单胞菌,提取DNA后进行RAPD分型.同时进行抗生素敏感性实验.结果:21株PA共得14型,分型率100%;其中有3株属于同一种类型;抗生素敏感性实验表明21株均为对亚胺培南/西司他丁,头孢哌酮/舒巴坦等少数几种敏感的多重耐药株.结论:ICU内存在铜绿假单胞菌感染爆发流行,RAPD分型技术分型率高,简便快速,具有分子流行病学研究的应用价值.

阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.

移植患者呼吸道金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学

目的 了解引起移植患者呼吸道金黄色葡萄球菌感染的基因型,探讨金黄色葡萄球菌在移植术后肺部感染的流行状况、感染的预防措施及护理.方法运用随机扩增PCR技术,对20例移植患者呼吸道感染金黄色葡萄球菌进行指纹图谱分析,并采用头孢西丁纸片法检测金黄色葡萄球菌的mecA基因.结果 20株金黄色葡萄球菌经随机扩增多态性DNA(RAPD)分为8个基因型,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型检出率分别为40.0%、15.0%、15.0%,mecA基因阳性率达80.0%.结论 移植患者术后呼吸道感染金黄色葡萄球菌以Ⅰ型为主,mecA阳性检出率高,对抗菌药物具有很高的耐药性;应加强消毒、隔离管理,采取有效措施防止mecA阳性金黄色葡萄球菌在移植患者中的传播.

航天诱变番茄无限生长突变体RAPD及SCAR分子标记研究

目的 通过对航天诱变所获得的番茄无限生长习性突变体进行分子水平的鉴定,为番茄生长习性分子标记选育提供依据.方法 用50个10-mer 随机护增多态性DNA(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)RAPD引物检测M1和10-3-2基因组序列多态性,对多态性片断回收克隆后转化成序列特征性扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)标记. 结果 50个RAPD引物中有44个引物扩增出产物,其中2个引物(S165和S168)扩增出稳定的重复性好的多态性条带,均表现为M1缺失条带.其特异扩增产物分子量分别为300 bp和1 500 bp,暂命名为TRS165300和TRS1681500,其中TRS1681500标记已经转换成了稳定的SCAR标记,并可作为该突变体的特异遗传标记.结论 航天诱变可以从DNA水平对搭载材料进行诱变,通过航天诱变获得的番茄无限生长习性突变体,为研究番茄生长习性调控提供了宝贵的材料.

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA法基因分型及应用

目的:对铜绿假单胞菌(PA)进行随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型.方法:以优化的反应体系和扩增条件对临床分离的274株PA进行用RAPD法的分型并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制全部基因分型图谱,同时对8例个体感染PA的连续性或跳跃性进行观察与分析.结果:274株PA共得RAPD型133种; 8例个体感染PA的RAPD指纹图有7例完全一致而1例出现跳跃性.结论:RAPD法可将PA分型133种; 个体可能存在感染两株基因型不同的PA.

细菌随机扩增多态性DNA分析中模板提取方法的优化

目的:筛选出佳模板提取方法用于随机扩增多态性DNA(RAPD).方法:对4种方法(挑丝法、沉淀法、加热裂解法和裂解剂裂解法)提取的模板DNA进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线扫描及随机扩增多态性DNA,比较其片段大小、纯度及RAPD指纹图差异.结果:挑丝法和沉淀法均可提取出大于23 kb且纯度较高的模板DNA,二者指纹图完全一致且均有2～4 kb的较大片段.加热裂解法和裂解剂裂解法提取的模板有弥散、碎裂的DNA并纯度较差,指纹图上仅有600～2 000 bp的较小片段.结论:用挑丝法或沉淀法提取的模板DNA适于进行RAPD.

铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析中反应条件优化方案的探讨

目的:筛选出反应体系的佳优化方案及佳扩增条件,用于铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分析(RAPD).方法:应用单因素设计和反应曲面设计进行RAPD反应体系的优化,同时比较不同的退火温度、延伸温度及热循环仪类型对RAPD指纹图的影响.结果:单因素设计明显受到多因素间交互作用的影响,从而使优化的反应体系具有多样性;反应曲面设计得出相对稳定的优化反应体系（关键成分浓度）为：Mg2+2.0?mmol/L、引物0.5?μmol/L和模板0.5?ng/μl.退火温度以38～43℃、延伸温度以62～72℃为佳.结论:反应曲面设计是优化RAPD反应体系的佳方案.扩增条件中退火和延伸温度分别以38～43℃和62～72℃为佳.

应用随机扩增多态性DNA技术分型产气肠杆菌

目的:建立产气肠杆菌(A)随机扩增多态性DNA(APD)技术基因分型谱.方法:以优化的反应体系和单一随机引物对临床分离的108株EA进行RAPD法基因分型并绘制基因分型图谱.结果:08株临床分离EA共得72种RAPD型.结论:APD技术可将临床分离的EA分为72型.

利用RAPD法为中药材标准物质建立DNA图谱

目的:建立中药材标准物质DNA图谱,为该药材鉴定提供参考和实验依据.方法:选取25种随机引物,利用随机扩增多态性DNA技术(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)对提取出的中药材DNA进行PCR扩增,得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳,并对特异性条带进行统计分析.结果:对68种中药材标准物质进行了考察,对其中8种常用于心血管保护的中药材进行了RAPD法DNA图谱的建立,寻找出它们的特异扩增产物.结论:RAPD法可以用来对中药材进行生物学鉴定,所建立的DNA图谱可用来为之后该种药材的鉴定提供依据.

不同农家类型巴戟天DNA与HPLC指纹图谱的质量评价研究

目的探讨不同农家类型对巴戟天质量的影响.方法利用分子生物学技术中随机扩增多态性DNA(RAPD)技术和HPLC技术对不同农家类型的巴戟天进行内在质量的分析.结果不同农家品种的巴戟天RAPD指纹图谱和蒽醌类成分HPLC指纹图谱具有明显的差异.结论不同的农家类型是影响巴戟天内在质量的主要因素,RAPD和HPLC两种方法可较全面地评价不同农家类型的种质资源对中药质量的影响,为中药材的规范化种植提供参考.

栀子遗传多样性及遗传分化的RAPD分析

目的 应用随机扩增多态性DNA(random amplifed polymorphic DNA,RAPD)标记技术对栀子8个种群遗传多样性和遗传分化进行研究.方法 18种随机引物对92个个体进行检测,应用POPGENE软件和AMOVA软件对结果进行处理.结果 共得到120个可重复的位点,其中多态位点75个,多态百分率为62.5%.各种群内多态位点百分率在39.17%～68.83%之间,平均为56.98%.河南南阳(POP1)种群高,其次是江西新干县野生种群(POP7),低是江西抚州水栀子种群(POP3).Shannon指数和Nei指数均反映出栀子各种群具有较高的遗传多样性.Shannon指数为0.431 3,各种群Shannon指数在0.2256～0.380 6之间,Nei指数为0.289 2,各种群Nei指数在0.148 2～0.263 0之间.AMOVA揭示种群内遗传多样性占总遗传多样性的76.05%,而种群间遗传多样性只占23.95%.运用POPGENE也得出种群内遗传变异(69.34%)大于种群间(30.66%)的结论.种群间的遗传分化系数为0.306 6.栀子种群间的基因流为1.130 6,遗传相似度平均为0.129 09,遗传距离平均为0.880 72.根据遗传距离聚类分析,河南南阳种群(POP1)与江西樟树新干种群(POP4,POP5,POP6,POP7)聚为一类,湖南种群(POP8)与江西抚州栀子种群(POP2)聚为一类,江西抚州水栀子种群(POP3)与其他各种群间的遗传关系较远.结论 目前,虽然野生资源逐年减少以及多年栽培中的品种选育,栀子遗传多样性仍较丰富,且种群内大于种群间,种群间存在较少的遗传分化.

随机扩增多态性DNA鉴定酵母菌的初步探讨

目的:应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对临床上常见的酵母菌进行分析,以选择合适的引物和实验条件对酵母菌进行鉴定.方法:选用四条长度为10个碱基的随机引物分别对酵母菌、丝状真菌及细菌进行扩增,并对扩增结果进行相似性分析.结果:所选三条引物可在种的水平上将所试菌株有效地区分开来,但同一引物对不同菌种的扩增结果存在明显的差异.在扩增同种内不同菌株时,各菌株间也存在着一定的差异.采用不同引物进行扩增时种内变异的程度有所不同.除个别菌株外,扩增所得指纹图型的种类差异远远小于不同的菌种间的差异,因而可将不同种的酵母菌有效地区分开来.结论:RAPD技术可用于酵母菌的种间鉴定.其中引物及实验条件的选择尤为重要,同时,将多条引物扩增结果共同用于结果分析将有助于提高鉴定的可靠性.

霍乱弧菌及其它致病弧菌分子遗传特征和DNA多态性研究

目的探讨霍乱弧菌和其它致病弧菌分子遗传特征及相互关系.方法用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction; PCR)、DNA 序列分析、随机扩增多态性 DNA (Randomly amplified polymorphic DNA; RAPD)和平均链锁聚类分析,对3株O139群霍乱弧菌、3株O1群 El Tor型、4株古典型和3株副溶血等致病弧菌进行检测.结果 O139群霍乱弧菌和O1群含有相同的霍乱肠毒素(CTX)A2-B亚单位基因, 核苷酸序列同源性为97.1%-98.9%.RAPD 将不同弧菌分成4类;即①O139群和El Tor型、②古典型、③副溶血和创伤弧菌及④河弧菌.O139群与O1群El Tor型DNA指纹图谱几乎完全一致,平均链锁距离为0,与古典型相似,平均链锁距离为2.07. 与副溶血等致病弧菌差别较大,平均链锁距离为6.76-8.54.结论 O139群霍乱弧菌与O1群El Tor型遗传特征相同,前者很可能由El Tor型进化而来.副溶血与创伤弧菌也具有相同遗传特征.霍乱弧菌和其它致病弧菌遗传特征表现出多态性.