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核酸扩增试验在淋病诊断和治疗中的研究进展
淋病是一种由淋病奈瑟菌感染引起的性传播疾病,临床表现主要为泌尿生殖道感染,如不及时诊断和治疗往往会引起严重的并发症.实验室的检测在淋病的诊断和治疗中具有十分重要的作用.近年来,随着PCR技术的迅速发展,快速、敏感、特异性高的核酸扩增试验已经成为实验室检测的重要手段.本文就核酸扩增试验在淋病诊断和治疗后诊断的新研究进展加以综述,期盼能够为淋病的诊疗提供新的方法.
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筛查献血者丙型肝炎病毒感染研究进展
丙型肝炎病毒（HCV）是一种单股正链RNA病毒，全长约9.6 kb，开放读框区编码结构蛋白和非结构蛋白。全球HCV感染率约为3%，是一种严重威胁人类健康的传染病，在献血者中进行HCV筛查是防控丙型肝炎病毒传播的有效手段。目前，检测HCV感染的方法主要包括抗HCV抗体检测、HCV抗原检测、HCV抗原-抗体联合检测、胶体金法快速检测、HCV分子核酸检测等。抗体检测应用早，但窗口期较长；抗原检测能缩短窗口期，敏感性高，但易受到体内因素的干扰而影响检测结果。一些快速检测方法不需要任何设备，且简便易行，但其敏感性较差。分子检测使用的HCV RNA扩增技术（NAT）是目前敏感的检测技术，能大大缩短窗口期，但其检测成本较为昂贵。各检测方法各有其优缺点。目前，血液中心采用至少两种不同试剂检测抗HCV以进行血液的安全筛查。
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非肺孢子菌肺炎患者支气管肺泡灌洗液肺孢子菌检出情况
目的 利用常规PCR、巢式PCR(Nest PCR,nPCR)和定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)方法,调查非肺孢子菌肺炎(Non-Pneumocystis pneumonia,non-PCP)患者支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)的检出情况.方法 入选non-PCP患者50例留取BALF,分别以线粒体大亚基rRNA(Mi-tochondrial large subunit rRNA,mtLSUrRNA)为靶基因进行常规PCR(Mt-PCR)和巢氏PCR(Mt-nPCR),以主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)为靶基因进行常规PCR(Msg-PCR),检测Mt-PCR,Mt-nPCR和Msg-PCR三种方法的Pj特异性核酸片段检出率,并对PCR检出为阳性的样本分别用以mtLSU rRNA和Msg为靶基因的qPCR来检测相应Pj核酸片段拷贝数.结果 50例BALF中,Mt-nPCR、Mt-PCR及Msg-PCR的检出率分别为56％(28/50)、36％(18/50)和26％(13/50),其中三种检测方法同时阳性5例(10％),任意两种方法阳性13例(26％),任意一种方法阳性18例(36％),三种方法均为阴性14例(28％).36例PCR检测结果阳性的标本分别进行mtLSU rRNA定量PCR(Mt-qPCR)和Msg定量PCR(Msg-qPCR)检测,其中Mt-qPCR检测结果为:1000拷贝/μL～9 999拷贝/μL有36例(100％);Msg-qPCR检测结果为:100拷贝/μL～999拷贝/μL有3例(8.3％),1 000拷贝/μL～9 999拷贝/μL有16例(44.4％),10 000拷贝/μL～99 999拷贝/μL有9例(25％),105拷贝/μL以上8例(22.2％).36例配对检测qPCR样本中,Msg-qPCR拷贝数大于Mt-qPCR拷贝数样本28例(77.8％).结论 在non-PCP患者BALF中,Pj核酸扩增方法的检出率为72％,Mt-qPCR拷贝数主要位于103拷贝/μL数量级,Msg-qPCR拷贝数主要分布于103至105拷贝/μL.用核酸扩增方法在BALF中检测出Pj时,临床意义解读需要谨慎.
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HBsAg-/HBV-DNA+献血者的血清学与核酸定量检测的研究分析
目的 研究分析HBsAg-/HBV-DNA+献血者的生物学分布特征.方法 收集2遍酶免检测为阴性,核酸扩增试验(NAT)检测阳性,并经鉴别检测阳性的HBsAg-/HBV-DNA+标本作为实验组,随机选取5例献血者HBsAg+/HBV-DNA+作为对照组,选用3种不同的HBsAg酶免试剂盒对实验组和对照组进行检测,同时对乙肝标志物抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc检测;采用电化学发光方法检测HBsAg和抗-HBs含量;采用实时荧光PCR方法对实验组和对照组进行核酸定量检测;对HBsAg-/HBV-DNA+献血者进行追踪分析,并对所有检测数据进行流行病学统计分析.结果 总筛查45 551份献血者血液,确认乙型隐匿性乙肝病毒感染(OBI) 42例,流行率为1∶1 085;窗口期(WP)2例.3种不同EIA-HBsAg检测44例HBsAg-/HBV-DNA+标本均呈阴性;发现OBI的6种血清学模式,分别为:抗-HBs+、抗-HBs+/抗-HBc+、抗-HBs+/抗-HBc+/抗-HBe+、抗-HBc+/抗-HBe+、抗-HBc+和标志物全阴,抗-HBc出现的阳性率为92.9％,以抗-HBs+/抗-HBc+模式的21例为多,无HBeAg阳性检出.核酸定量检测实验组范围(1.82-20.27)× 103IU/mL,对照组范围(1.28-61.47)×104IU/mL,2组结果比较,其差异有统计学意义(P＜0.05).年龄组比较,以40岁以上的男性献血者OBI感染率高(P＜0.05),重复献血者与首次献血者OBI感染率比较差异有统计学意(P＜0.05).结论 抗-HBc+是OBI血清学主要表达形式,NAT可有效降低经血传播疾病的残余风险.
关键词： 隐匿性乙型肝炎病毒感染 献血者 HBsAg 抗-HBc 核酸扩增试验 -
1349名男男性接触者HIV-1急性期感染情况调查
目的 了解湖南省长沙市和常德市男男性接触者(men who have sex with men,MSM)早期感染人类免疫缺陷病毒(HIV)-1的情况,估算新发感染率,并评价不同检测方法的使用情况.方法 在长沙市和常德市各类MSM活动现场,匿名收集承认半年内与其他男性发生过性行为(肛交)、自愿参与本调查的成年男性EDTA抗凝血10 ml,送实验室进行HIV血清学及核酸检测.结果 1 349名调查对象中,使用三代双抗原夹心ELISA法检出阳性169例,阳性率12.53％;四代ELISA法检出阳性173例(包含三代初筛阳性的169例),经Western blot确证阳性156例,不确定12例,阴性5例,确证阳性率11.56％.1 193份初筛阴性及确证血清抗体阴性或不确定样本中,使用四代ELISA法检出阳性17例,阳性率1.42％;同时使用核酸扩增法(NAAT)检出阳性18例,阳性率1.51％.结论 MSM人群中HIV-1急性期感染现象值得关注,开展高危行为心理分析和干预非常有必要.在筛选急性感染病例时,四代ELISA特异性高且较为敏感,值得推广.
