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用错配PCR技术直接检测母系遗传性非综合征型聋相关线粒体DNA C1494T突变
目的 在一个聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)管中运用错配PCR技术直接检测母系遗传性非综合征型聋相关的线粒体DNA C1494T突变.方法 设计一对引物对母系遗传性非综合征型聋相关的线粒体DNA C1494T突变的单碱基错配引物,即在引物的3’端附近引入一个与模板错配的碱基.用此引物进行多聚酶链式反应,再通过琼脂糖凝胶电泳观察结果.结果 通过电泳结果可以直观判断患者是否携带线粒体DNA C1494T突变,结果与测序结果一致.结论 错配PCR技术可以准确、方便、快速检测线粒体DNA C1494T突变,适于在基层开展和应用.
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基因芯片法检测自疑药源性耳聋患者基因突变35例
目的:对自疑药源性非综合征型耳聋患者进行中国人常见耳聋基因的突变分析,以明确其分子病因.方法:收集35名自疑非综合征药源性耳聋患者的外周血样本,常规方法提取基因组DNA,进行基因芯片分析.对突变患者的基因,进行PCR扩增,扩增产物经DNA测序分析,并与NCBI GenBank数据库进行比对,从而对耳聋相关基因的突变进行分析.结果:35名自疑非综合征耳聋患者中检出已知的mtDNA12SrRNA基因罕见致病突变C1494T1例,占2.86%,其余为野生型或是其他基因突变.结论:在临床自疑药物性聋病患者中真正与线粒体基因突变相关的仅占少数,48临床开展药源性耳聋检测时,好同时进行其他耳聋相关基因的检测,而基因芯片检测是其中一项很好的方法.
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新疆地区汉族和维吾尔族耳聋基因突变的比较研究
目的:分析中国新疆地区汉族和维吾尔族耳聋患者的常见耳聋基因突变,为该地区耳聋患者的临床基因诊断提供理论依据.方法:调查对象为新疆地区乌鲁木齐和库尔勒特教学校的125例耳聋患者,其中汉族64例,维吾尔族61例,听力检查全部为重度-极重度感音神经性聋.所有受检者均采集外周血并提取DNA,进行GJB2全序列、包含SLC26A4IVS7-2 A>G、线粒体DNA12S rRNA1494和1555位点的突变分析.结果:新疆地区汉族耳聋患者GJB2 35 delG和 SLC26A4IVS7-2的等位基因频率分别为7.4%和10.1%,维吾尔族耳聋人群未发现GJB2 35 delG和SLC26A4IVS7-2突变,两者比较差异有统计学意义.而GJB2 235 delC、299-300 delAT及线粒体DNA A1555G、C1494T维吾尔族和汉族比较差异无统计学意义.结论:新疆地区汉族和维吾尔族GJB2 35 delG和SLC26A4IVS7-2 A>G有不同的等位基因频率,新疆地区汉族和维吾尔族常见耳聋基因突变存在异同.
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母系遗传非综合征型聋相关线粒体DNA C1494T突变的全国性调查
目的 应用实时荧光定量PCR(real-time-qPCR)对全国范围内的耳聋患者进行mtDNA C1494T的筛查,为进一步研究该突变和聋病的临床基因诊断提供帮助.方法收集国内25个不同省市的特教学校和聋哑学校的3 133例双侧重度或极重度非综合征型聋患者,提取外周血DNA,设计TaqMan-MGB的引物和探针进行real-time-qPCR,对所有阳性样本和随机抽取的495例阴性样本进行直接测序验证.结果 3 133例中,发现C1494T突变14例(14/3 133,0.45%),经测序验证全部为C1494T突变,495例阴性样本中均无C1494T突变.结论 Real-time-qPCR 是进行mtDNA C1494T突变筛查的有效方法,中国耳聋人群中mtDNA C1494T的突变率较低.
