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MTT比色法检测苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响
目的 研究苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞增生的影响,探索白内障术后晶状体后囊浑浊的治疗药物.方法 取第2代对数生长期的兔晶状体上皮细胞,培养24 h后,加入不同浓度的苦参碱(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mg/mL)作用24 h后,采用MTT法观察苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响.结果 苦参碱随着浓度的增加.其抑制兔晶状体上皮细胞增生的作用逐渐增强,增生抑制率的升高呈现明显的剂量依赖性.结论 苦参碱能有效抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞增生,在防止白内障术后晶状体后囊浑浊方面有一定的应用前景.
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中药对兔晶状体上皮细胞凋亡的cAMP的抑制作用
目的:观察中药复明眼液对凋亡的兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)的环磷酸腺苷(cAMP)的影响及其作用机制.方法:采用终浓度250 μmol/L H2O2诱导体外培养的兔LEC凋亡.用放射免疫分析法检测不同浓度的复明眼液对凋亡的兔LEC的cAMP含量的影响.结果:各实验组兔LEC的cAMP含量,模型组为(89.2±10.2)pmol/g,空白组为(60.6±10.7)pmol/g,两者比较差异有非常显著性(P<0.01),说明兔LEC凋亡时,cAMP浓度明显增高.中药治疗C组[(81.3±11.2)pmol/g]与模型组比较差异没有显著性(P＞0.05),说明终浓度为100 μg/ml的复明眼液对兔LEC的cAMP含量没有明显作用.中药治疗D组[(69.5±11.8)pmol/g]与模型组比较差异有显著性(P<0.05),说明终浓度为200 μg/ml的复明眼液可以降低兔LEC的cAMP含量.中药治疗E组[(52.2±7.6)pmol/g]和F组[(41.5±8.1)pmol/g]分别与模型组比较,差异均有非常显著性,显示终浓度为400 μg/ml和800 μg/ml的复明眼液,有显著减少兔LEC中cAMP含量的作用.上述各中药治疗组,随着复明眼液浓度的提高,对兔LEC的cAMP作用愈强,即呈一定的量效关系.结论:终浓度250 μmol/L的H2O2诱导体外培养的兔LEC凋亡时可伴有兔LEC内的cAMP浓度升高.中药复明眼液可以降解凋亡的兔LEC内的cAMP含量,因而对H2O2诱导体外培养的兔LEC凋亡具有一定的抑制作用.
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碱性成纤维细胞生长因子对兔晶状体上皮细胞增殖的影响
目的观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对兔晶状体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells,RLECs)的作用。方法采用bFGF作用于第2～3代培养细胞，用MTT法测定对细胞增殖的影响；电镜观察细胞形态的变化，流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果 bFGF可促进晶状体上皮细胞的增殖，尤其是浓度为10μg*L-1作用明显。透射电镜显示细胞增殖活跃，流式细胞仪观察进入S期的细胞明显增加。结论 bFGF是促进培养兔晶状体上皮细胞增殖的重要因素。
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 兔晶状体上皮细胞 细胞增殖 -
抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体的制备及特异性研究
目的为防治白内障术后因晶状体上皮细胞增殖而产生的后发性白内障，制备抗家兔晶状体上皮细胞的单克隆抗体，从而更进一步以其为载体与细胞毒素偶联，特异性抑制晶状体上皮细胞生长而不损伤眼内其他组织，为防治后发性白内障奠定实验基础。方法应用家兔晶状体上皮细胞与佐剂混合，免疫BALB/c小鼠，通过聚乙二醇（PEG-4000）使被免疫的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞融合，细胞融合之后，经过HAT选择性培养液培养，用间接免疫荧光抗体法和免疫组化SP法检测杂交瘤细胞上清夜中的抗体，筛选出呈阳性反应的杂交瘤细胞，再经3次甲基纤维素克隆化培养以保证单克隆抗体的特性，后将此单克隆抗体对人眼组织进行交叉反应。结果被免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0通过PEG-4000融合后，经HAT选择性培养，16d后杂交瘤细胞克隆产生，对其进行3次甲基纤维素培养基克隆化培养，获得检测抗体阳性率达100%的克隆系为一株。用免疫组化SP 法检测此抗体仅对兔晶状体上皮细胞抗原呈阳性反应，而对兔眼角膜、虹膜、人眼角膜、虹膜、晶状体上皮细胞呈阴性反应。结论成功制备了抗家兔晶状体上皮细胞的单克隆抗体，此单克隆抗体具有较强的特异性，对人眼组织无交叉反应，为进一步导向治疗后发性白内障奠定实验基础。
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阿霉素药物缓释系统抑制人工晶状体植入术后后囊膜混浊的实验研究
目的探讨阿霉素药物缓释系统(ADM-DDS)对兔眼人工晶状体植入术后后囊膜混浊(PCO)的抑制作用及其毒副作用,为临床应用提供实验依据.方法自制聚乳酸(PLA)为载体的眼内植入型ADM-DDS,内含ADM 22 μg.采用兔眼晶状体囊外摘出联合人工晶状体植入术的动物模型,术中将ADM-DDS植入15只兔眼晶状体囊袋内.术后临床常规检查,第4周行病理组织学及电镜检查.结果实验组与对照组比较,晶状体后囊膜混浊减轻(t=2,P<0.01),Soemmering环面积减小(t=20.51,P<0.01),兔眼晶状体上皮细胞(RLECs)细胞核固缩坏死,胞浆凝集、空泡变性.两组之间的眼压、角膜内皮细胞形态及密度以及光镜下角膜、虹膜、睫状体、视网膜组织均无差异.结论兔眼内植入ADM-DDS通过ADM缓释作用抑制了人工晶状体植入术后RLECs的增殖.ADM-DDS对兔眼角膜、虹膜、睫状体及视网膜无明显毒性.以PLA为载体的DDS将有可能成为临床上药物预防PCO的一种有效而安全的给药途径.
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紫杉醇诱导兔晶状体上皮细胞凋亡及细胞周期改变的研究
目的探讨紫杉醇(Taxol)诱导兔晶状体上皮细胞(RLECs)凋亡和对细胞周期改变的作用以及对Fas和FasL基因表达的影响.方法流式细胞仪分析检测Taxol诱导RLECs细胞周期的阻断;光镜和电子显微镜下观察细胞形态的变化;应用TUNEL法检测药物诱导的细胞凋亡;免疫组化方法检测该药对Fas和FasL基因的表达.结果Taxol可将RLECs阻断于G2/M期并诱导其凋亡;可见凋亡小体;TUNEL染色显示散在的阳性细胞,且凋亡的细胞量随药物质量浓度的增加而增多;Taxol对RLECs的Fas及FasL基因的表达无明显影响.结论Tax0l不仅能阻断RLECs的分裂,还能诱导其发生细胞凋亡,但不是通过Fas/FasL途径介导的.
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全反式维甲酸抑制兔晶体后囊膜混浊实验观察
目的 研究全反式维甲酸对兔晶状体后囊膜混浊的抑制作用及有效抑制浓度.方法 新西兰大白兔12只24只眼,分为右眼实验组(A组)和左眼对照组(B组),各12只眼.A组兔眼行白内障囊外摘除术(ECCE术),前房灌注平衡盐液(BSS)中加入5.63μg/ml或6.06μg/ml的全反式维甲酸,B组兔眼行ECCE术,BSS中不加入维甲酸.术后1月至术后4～4.5月观察结膜、角膜、前房炎症及后囊膜情况.术后4～4.5月取出兔眼标本,石腊包埋及切片后病检.结果 术后第1～4天术眼有不同程度的结膜浅充血、睫状充血、角膜水肿、房水混浊,术后第5天角膜水肿、房水混浊明显好转,1周后结膜浅充血及睫状体充血消退,两组差异无显著性意义(P＞0.05);B组兔晶状体后囊膜梭形细胞及纤维细胞增生、后囊膜增厚明显高于A组(P＜0.005).结论 全反式维甲酸浓度为5.63μg/ml及6.06μg/ml对兔晶状体后囊膜混浊有抑制作用.
