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miR-203靶向RUNX2对牙周膜干细胞成骨分化能力的调控作用
目的:体外研究miR-203对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响及调控机制.方法:分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后miR-203和RUNX2的表达;分别转染miR-203沉默及过表达模拟物;qPCR检测miR-203和RUNX2mRNA水平的表达;Western blot检测RUNX2蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;生物信息学分析miR-203的靶基因,双荧光素酶报告实验验证;共转染miR-203 inhibitor和RUNX2 siRNA,分析共转染后对RUNX2表达及细胞成骨分化能力的影响.结果:成骨诱导液诱导后牙周膜干细胞中miR-203的表达水平显著下调,而RUNX2的表达水平明显升高;miR-203过表达可明显抑制hPDLSCs的成骨分化能力和RUNX2的表达,抑制miR-203的表达,则结果相反;通过生物信息学分析miR-203的潜在靶基因含有RUNX2,双荧光素酶报告实验验证RUNX2为miR-203的靶基因;进一步实验结果表明沉默RUNX2可逆转miR-203 inhibitor对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用.结论:miR-203可靶向调控RUNX2对人牙周膜干细胞成骨分化能力产生影响,提示miR-203在hPDLSCs组织工程损伤修复过程中发挥着重要作用.
关键词： miR-203 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 成骨分化 Runx2 -
人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞与人牙周膜干细胞成骨分化能力的对比研究
目的:比较人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesechymal stem ceils,hUCWJMSCs)与人牙周膜干细胞(periodontal mesenchymal stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力.方法:体外培养hUC-WJMSCs和hPDLSCs.MTT法检测细胞增殖情况;成骨诱导后测定细胞的ALP活性,茜素红染色检测细胞矿化能力,Real-timePCR分析OPN和Runx2基因的表达.结果:hUCWJMSCs增殖能力高于hPDLSCs;经矿化诱导后hPDLSCs ALP表达、矿化结节形成高于hUCWJMSCs(P＜0.05);Runx2在hPDLSCs中表达高于hUCWJMSCs(P ＜0.05);而hUCWJMSCs中OPN表达高于hPDLSCs(P＜0.05).结论:hUCWJMSCs、hPDLSCs均具有成骨分化能力,hPDLSCs成骨分化能力较强.
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人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞和人牙周膜干细胞复合PHBHHx、PHBV支架成骨分化能力的体外研究
目的:探讨人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞(hUCWJMSCs)和人牙周膜干细胞(hPDLSCs)复合聚(3-羟基丁酸酯-3-羟基己酸酯)(PHBHHx)、聚羟基丁酸-羟基戊酸酯(PHBV)支架成骨分化的能力.方法:将2种干细胞分别接种在2种支架中,MTT法及粘附率分析2种干细胞和PHBHHx、PHBV的生物相容性;成骨诱导后ALP活性检测、茜素红染色和扫描电镜观察研究两种干细胞在两种支架上的成骨分化情况.结果:2种干细胞与PHBV具有更好的黏附效果及增殖效率(P<0.05),且hUCWJMSCs组优于hPDLSCs组;hUCWJMSCs和hPDLSCs与PHBV组ALP活性检测、茜素红染色阳性表达明显高于与PHBHHx组;hUCWJMSCs与2种支架组的表达高于hPDLSCs组.扫描电镜显示2种干细胞与PHBV组可见大量矿化基质形成.结论:hUCWJMSCs与PHBV生物相容性和成骨能力优于hPDLSCs组.
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脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎症因子表达的影响
目的:探讨脂多糖(LPS)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖及炎症因子表达水平的影响.方法:体外分离培养hPDLSCs,并将其随机分为A、B、C组,A、B组分别用含LPS终浓度为10 μg/mL和10 ng/mL的α-MEM进行培养,C组用不含LPS的α-MEM进行培养作为对照;分别于培养12、24、48、72 h后,用MTT法检测各组细胞的增殖情况,同时取培养72 h后的各组细胞,用RT-PCR检测其IL-6、IL-1 β、TNF-αmRNA的表达水平.结果:MTT检测结果显示,各组在各时间点的A490值由高到底依次为:B组＞C组＞A组,3组间两两相比均有统计学差异(P＜ 0.05);RT-PCR检测结果显示,与C组相比,A、B组的IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平均显著升高,且以A组升高更明显,3组间两两相比均有统计学差异(P＜0.05).结论:低浓度LPS对hPDLSCs的增殖具有一定的促进作用,而高浓度的LPS对hPDLSCs的增殖则具有一定的抑制作用,并能促进炎症因子的表达.
关键词： 脂多糖 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 增殖 炎症因子 -
多能性转录因子Oct4对人牙周膜干细胞自我更新能力的调控作用
目的:探讨多能性转录因子Oct4对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)自我更新能力的调控作用.方法:采用有限稀释法进行细胞克隆纯化培养获得hPDLSCs.RT-PCR检测hPDLSCs矿化诱导分化前后Oct4表达水平;用shRNA慢病毒转染法抑制hPDLSCs内Oct4的表达后,观察hPDLSCs增殖和克隆形成能力的变化;茜素红和油红0染色观察Oct4表达降低对hPDLSCs体外成骨、成脂分化能力的影响,同时用RT-PCR检测成骨、成脂分化相关基因表达水平的变化.结果:hPDLSCs矿化诱导后,Oct4的表达水平较分化前显著下调;抑制Oct4表达后,hPDLSCs的增殖能力、克隆形成率明显降低(P＜0.05);钙化结节和脂滴的形成量也明显减少,成脂基因(PPARγ)和各成骨/成牙本质相关基因(DSPP、ALP、OCN、BSP)的表达水平均显著下调(P＜0.05).结论:抑制多能性转录因子0ct4表达后,hPDLSCs的增殖、克隆形成以及多向分化能力均可降低,提示Oct4在维持hPDLSCs干性特征中发挥着重要作用.
关键词： OCT4 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 细胞分化 细胞增殖 -
丁酸钠对牙周膜干细胞增殖能力的影响
目的:探究丁酸钠(NaB)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖能力的影响.方法:体外分离培养hPDLSCs,分别采用含NaB终浓度为0、40、200、1 000、5 000 μmol/L的NaB α-MEM处理72 h后,倒置相差显微镜下观察各组细胞的形态改变;MTT法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞仪检测不同浓度NaB对细胞周期的影响.结果:40、200 μmol/L的NaB对hPDLSCs的形态均无明显影响,而当NaB浓度为1 000、5 000 μmol/L时,其细胞数目均较对照组明显减少,细胞形态也发生了明显变化,表现为扁平、伸长或多角状,且浓度越大变化越明显;当NaB浓度低于200 μmol/L时对hPDLSCs的增殖能力均无明显影响(P＞0.05),而当NaB浓度为1 000、5 000 μmol/L时,hPDLSCs增殖能力明显被抑制(P＜0.05),其中5 000 μmol/L组的抑制作用强(P＜ 0.05);40 ～5 000 μmol/L NaB作用于hPDLSCs后,浓度依赖性地增加G2/M期细胞的比例.结论:一定浓度范围的NaB能影响hPDLSCs的形态和能力,使细胞周期停滞于G2/M期.
关键词： 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) 组蛋白去乙酰化酶 丁酸钠 增殖能力 -
静压力对人牙周膜干细胞骨向分化能力的影响
目的：观察静压力对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）骨向分化能力的影响。方法：体外培养 hP-DLSCs，并将其随机分为4个组；置于压力加载装置内分别给予0（对照组）、20、100、200 kPa 的静压力刺激，连续加压6 h 后分别采用 Quantitative RT－PCR 和 Western－blots 法检测 hPDLSCs 的破骨细胞核因子 KB 受体活化因子配基（RANKL）及骨保护因子（OPG）的表达。结果：与对照组相比，当压力值为20 kPa 时，RANKL mRNA和蛋白的表达量变化不明显（P ＞0．05），但 OPG 的表达量明显升高（P ＜0．05），RANKL／OPG 的比值明显降低（P ＜0．05）；当压力值为100 kPa 时，RANKL mRNA 和蛋白的表达量明显升高（P ＜0．05），但 OPG 的表达量降低（P ＜0．05），RANKL／OPG 的比值明显升高（P ＜0．05）；当压力值为200 kPa 时，RANKL、OPG mRNA 和蛋白的表达量均明显降低（P ＜0．05），其中以 RANKL 下降的程度更加明显，RANKL／OPG 的比值明显降低（P ＜0．05）。结论：持续的静压力作用可使 hPDLSCs 表达 OPG 和 RANKL 的水平发生明显变化，并具有力值依赖性。
关键词： 静压力 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) RANKL/OPG
