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静压力对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响
目的研究体外静压力对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)增殖活性的影响.方法体外培养人牙周膜成纤维细胞,建立重力加载模型.对第4代HPDLF分别施加0,0.5,1,2,3,4和5 g/cm2持续性静压力.加力24 h后采用CCK-8法检测HPDLF增殖活性.结果CCK-8检测结果显示1~4 g/cm2静压力下细胞增殖能力相比对照组增大,其中在2 g/cm2时增殖能力强(P<0.05).当静压力达到5 g/cm2时,HPDLF增殖指数降低(P<0.05).结论适宜大小的静压力能促进HPDLF的增殖,过大的静压力会抑制细胞的增殖.
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不同恒静态压力对钛-瓷结合强度的影响
目的 研究不同的恒静态压力对浸泡在酸性含氟离子(F-)溶液中样本的钛-瓷结合强度的影响.方法 将70个钛瓷样本(n=10)分别浸泡在A、B两种人工唾液中,并依据施加的恒静压力值(0 N,1 N,2 N)分为A0,A1,A2,B0,B1,B2组,以未浸泡的样本为对照组(C组).浸泡1天后,测定样本的钛-瓷结合强度,并观察瓷剥脱后的钛表面形貌.结果 浸泡在B液中样本的钛-瓷结合强度显著低于对照组(P<0.05),下降率分别为23.34%、31.84%、41.06%.A组和C组样本的钛-瓷分离界面相似,晶相组织平行排列,呈多层状结构.而B组样本的界面则较为凌乱,表面可见因腐蚀而残留的微孔.结论 静压力会增加酸性含F-的人工唾液对钛-瓷修复体的腐蚀程度.
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静压力对脂肪干细胞与静电纺丝纳米纤维细胞相容性的影响
背景：静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维是课题组自行合成的生物可降解材料，前期研究表明该材料生物相容性优越，但缺乏对该材料力学方面的研究。
目的：研究静压力对脂肪干细胞与静电纺丝聚乳酸/聚己内酯纳米纤维支架细胞相容性的影响。
方法：将脂肪干细胞接种到由聚乳酸和聚己内酯合成的静电纺丝纳米纤维支架上，置于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM低糖培养基中培养。利用静压力装置分别对培养板持续加载0，15，30，45 kPa的静压力，加载时间为4 h。采用MTT法、活死细胞染色检测脂肪干细胞在静电纺丝纳米纤维支架上的增殖、黏附和活性，评价脂肪干细胞与静电纺丝纳米纤维的细胞相容性。
结果与结论：①在体外培养条件下，经不同静压力持续加载4 h后，MTT法增殖检测得出的各组吸光度值经单因素方差分析差异存在显著性意义。在0-30 kPa压力范围内，吸光度值随静压力的增加而增加，到45 kPa时，吸光度值反而下降。各组间多重比较显示差异均有显著性意义；②用MTT法进一步检测细胞黏附百分率，各组间差异亦有显著性意义；③活死细胞染色结果印证了上述结果，统计分析表明，无论是单因素方差分析还是各组间配对t检验，4组间活细胞百分率的差异均有非常显著性意义；④适当大小的静压力可促进脂肪干细胞与静电纺丝纳米纤维的生物相容性，细胞增殖、黏附及活性有所提高，但过高的静压力会抑制细胞的生物学行为，从而影响脂肪干细胞与静电纺丝纳米纤维的相容性。 -
静压力对碱性成纤维生长因子-聚乳酸-羟基乙酸缓释微球降解的影响
目的:体外模拟膝关节腔的静压力环境,观察静压力是否对碱性成纤维生长因子-聚乳酸-羟基乙酸(bFGF-PLGA)缓释微球的降解规律产生影响.方法:实验于2006-06/2007-05在四川大学生物力学实验室完成.①实验材料:采用复乳法制作bFGF-PLGA缓释微球,冷冻离心,干燥后保存备用.自行研制压力加载装置,分别可以提供0.065 MPa和5.0 MPa的大气压力,保压效果良好.②实验方法:将微球分为0.065 MPa实验组,5.0 MPa实验组和常压对照组进行实验.37 ℃恒温下,以磷酸盐缓冲液作为缓释微球降解和释药介质,分析静压力对bFGF-PLGA缓释微球降解规律的影响.结果:①0.065 MPa和5.0 MPa实验组,bFGF-PLGA缓释微球未发生突然性的变形破裂,微球表面光滑,球形良好.②0.065 MPa实验组与常压对照组体外聚合物重均分子质下降和质量丧失趋势一致.③5.0 MPa实验组与常压对照组相比,聚合物重均分子质量下降、质量丧失均加快.结论:静压力对bFGF-PLGA缓释微球体外降解的各项指标产生较大影响,以5.0 MPa的静压力下效果明显.bFGF-PLGA缓释微球在临床上直接用于膝关节腔给药时,必须考虑关节腔压力值的影响.
关键词： 静压力 缓释微球 降解 碱性成纤维细胞生长因子 聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物 生物材料 -
静压力对CHO细胞表达hGM-CSF的影响
目的研究静压力对CHO细胞系DR1000L4N表达hGM-CSF的影响.方法应用25cm2T形瓶,装入5.0ml培养基,接种2.4×105cells/ml,在37℃、5%CO2孵箱中培养24h后,移入压力器中加压培养(0.1～0.9 Mpa),并分别检测细胞浓度和hGM-CSF的表达.结果当静压力从0.15 MPa升到0.9 MPa时,细胞的比生长速度几乎不受影响,而hGM-CSF的表达量从1.23×10-13 mg/cell·h提高到1.62×10-13 mg/cell·h.结论静压力可提高CHO细胞对hGM-CSF的表达.
关键词： 静压力 CHO细胞 hGM-CSF mRNA -
不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响
目的:就不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响进行探讨.方法:加载压力分别为36kPa、24kPa、12kPa、0kPa,持续静压1h,在加力后立即(0h)收集细胞进行检测,并且开展流式细胞术检测.结果:当加载压力分别为36kPa、12kPa时,与0kPa相比,髁突软骨细胞的各个增殖、凋亡指数都呈现出明显的下降趋势,具有统计学意义(P＜0.05).当加载压力为12kPa时,细胞凋亡指数减幅大;当加载压力为36kPa时,细胞增殖指数减幅大.结论:不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡有一定的影响,但并非线性关系,值得深入研究.
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静压力对体外培养动脉中层血管平滑肌细胞的影响
为探讨压力在血管重建中的作用,观察了不同静压力条件下,体外培养动脉中层平滑肌细胞的形态学变化、增殖与凋亡及其相关蛋白的变化趋向.本文选用成年雄性金华猪颈总动脉4～7cm,在不同静压力(160mmHg、100mmHg)下培养1、4、7天(控制血管内流体流量≤6ml/h)后,4%多聚甲醛固定,以新鲜血管为对照组,血管常规石蜡切片后,应用HE染色、免疫组织化学、TUNEL、Hoechst33258荧光染色、透射电镜等方法进行观察.
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不同静压力下髁突软骨细胞MMP-13的表达变化研究
目的：探讨在不同强度及不同时间的静压力作用下，髁突软骨细胞中MMP-13表达的变化及意义。方法：体外分离培养SD 大鼠髁突软骨细胞，用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行鉴定；分别用0、50、100、150、200 kPa静压力进行2 h的加压处理。另外在200 kPa静压力下，分别对髁突软骨细胞进行0、1、2、4、8和12 h的加压，采用Western blot免疫印迹及实时荧光定量PCR，分析髁突软骨细胞在不同强度及不同时间的静压力加载后， MMP-13的mRNA和蛋白表达变化。结果：在50~200 kPa的静压力范围内，随着压力的增大，MMP-13蛋白及mRNA表达水平均呈下降趋势,实验组表达水平均降至对照组（0 kPa组）以下，且差异有统计学意义（P<0.05)。在200 kPa的静压力下，随着加压时间的延长，MMP-13表达呈先上升后下降的趋势，且4 h实验组达高水平（P<0.05)。结论：髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有较好的适应能力，压力的改变可能影响颞下颌关节的适应性改建。
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静压力作用下人牙周膜细胞差异表达蛋白质的质谱分析
目的:观察人牙周膜细胞静压力下细胞内蛋白质表达的变化,为进一步探讨静压力与人牙周膜细胞代谢之间的关系奠定基础.方法:采用固相pH梯度/SDS-PAGE双向电泳和质谱分析技术,对人牙周膜细胞静压力干预组和未加力组细胞胞内总蛋白质进行分析.应用Image Master 2D Platinum Software 5.0分析软件,鉴定2组细胞的双向电泳图谱,差异表达的蛋白质点为30个,选择其中5个新出现的差异点进行质谱分析和数据库检索.结果:第3和第5个蛋白质点得到了鉴定,分别为早老蛋白(presenilin 2)和儿茶酚胺-O-甲基转移酶(catechol O-methyltransferase),2种蛋白质在加力组中新表达.结论:早老蛋白与Notch蛋白具有相关性,而Notch通路可能是参与牙周膜细胞生物力学改建的一条信号传导途径;儿茶酚胺-O-甲基转移酶与降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)有关,而CGRP在骨代谢中发挥重要作用.
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静压力下兔髁突软骨细胞COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达变化
目的:研究兔髁突软骨细胞对静压力的分子生物学响应.方法:体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞,使用形态学观察,COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色方法对P2代髁突软骨细胞进行鉴定;100kPa静压力条件下,分别对P2代髁突软骨细胞进行0、1、2、3和4h的加压处理;采用CCK-8检测压力加载后各组细胞活性的变化;通过Western免疫印迹分析髁突软骨细胞COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达变化.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:兔髁突软骨细胞呈多角形,“铺路石”样排列,细胞爬片COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色鉴定结果为阳性.100kPa静压力加载1h时,细胞活性显著降低(P=0.04),但在2～4 h后,细胞活性恢复并与对照组无显著差异.Western印迹结果显示,压力加载3h和4h时,COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达显著升高.其中,在压力加载4h组ALP的表达量比3h组低.结论:兔髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有一定的适应能力,100kPa静压力加载4h不会对髁突软骨细胞活性产生不可逆损伤.适宜的压力加载对髁突软骨细胞的成软骨和成骨能力有促进作用.髁突软骨细胞压力微环境的改变,可能影响颞下颌关节适应性改建和颞下颌关节紊乱病的病理过程.
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Ihh-PTHrP信号轴介导髁突软骨细胞对压力微环境改变的调控研究
目的：探究Ihh-PTHrP负反馈信号通路与静压力下髁突软骨细胞生物学响应的关系。方法体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞，100 kPa 静压力条件下，分别对 P2代髁突软骨细胞进行0、1、2、3、4 h 的加压处理；采用Western印迹的方法比较分析髁突软骨细胞 COL2A1、Ihh 和 PTHrP的蛋白表达变化；通过 RT-qPCR检测分析静压力对 Ihh 和PTHrP基因水平表达的影响；选取0 h和3 h 组，使用扫描电子显微镜扫描分析静压力对髁突软骨细胞形态的影响；采用 SPSS 19．0软件包对数据进行统计学分析。结果 Western印迹实验发现：压力加载3 h后，COL2A1出现明显高表达；Ihh蛋白表达在0～2 h内逐渐升高，在2～4 h内却逐渐降低；PTHrP在0～2 h内蛋白表达逐渐升高，并在2～4 h内维持着一个较高水平的表达。RT-qPCR检测发现Ihh在压力加载1 h时出现明显高表达，而PTHrP则在2 h时出现明显高表达。100 kPa静压力加载3 h后，髁突软骨细胞突起增多、变长。结论兔髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有一定的适应能力；适宜的静压力可以提高髁突软骨细胞的成软骨能力；Ihh-PTHrP负反馈信号通路参与髁突软骨细胞对压力微环境改变的适应性改建过程。
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RCP与G蛋白偶联在静压力促血管平滑肌细胞增殖中的作用
目的 探讨受体组分蛋白(RCP)在静压力促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖信号跨膜转导中的作用.方法 以鼠源性A10血管平滑肌细胞(A10VSMC)作为研究对象,用静压力处理细胞,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性;Western blot 检测增殖细胞核抗原(PCNA)、RCP和G蛋白的表达;RT-PCR检测RCP mRNA表达水平;免疫共沉淀检测G蛋白和RCP间相互作用.结果 静压力呈压力和时间依赖性地增加A10VSMC活性、PCNA蛋白表达和RCP表达,并在120 mmHg静压力和6 h达到大.静压力在增加细胞 p-Akt表达水平(P<0.05)的同时,减少RCP与Gαs的相互作用,增加RCP与Gβ的作用,但对Gγ不明确.结论 静压力可使VSMC增殖和RCP表达增加,其作用可能涉及到细胞G蛋白信号转导机制.
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静压力与白介素-1β诱导兔纤维环细胞损伤效果的比较
目的:比较持续静压力与白介素-1β(IL-1β)诱导藻酸盐凝胶培养的兔纤维环细胞损伤模型的效果.方法:构建体外兔纤维环细胞凝胶培养模型,并将其分入5组:A组(空白对照组),B组(IL-1β 10ng/ml,干预24h),C组(IL-1β 10ng/ml,干预48h),D组(1Mpa静压力,持续24h),E组(1Mpa静压力,持续48h).CCK-8法及流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;RT-PCR检测Ⅰ、Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达情况.结果:①两种方法均使纤维环细胞增殖减缓、凋亡增加.在D、E两组中这种作用更加明显.②RT-PCR结果显示,两种方法均使Ⅰ、Ⅱ型胶原表达减弱,其中E组Ⅱ型胶原表达较A组下降约75%(P<0.01),为明显;随着干预时间延长,两种方法均使MMP-3表达增强;两种损伤模型中,TIMP-1的表达在24h干预后均出现降低,而干预48h后又有所回升.结论:体外持续静态压力能够诱发与IL-1β干预相似的兔纤维环细胞损伤,可作逐步发展为构建体外纤维环细胞损伤模型的常规方法.
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髁突软骨细胞受压力刺激前后的差异蛋白质电泳分析
目的:建立体外培养的髁突软骨细胞加载压力刺激前后双向电泳差异表达谱.方法:利用已建立的髁突软骨细胞的体外培养模型,抽提各组细胞总蛋白质,进行等电聚焦双向电泳,建立压力刺激前后髁突软骨细胞双向电泳差异表达谱.结果:加压组的体外培养的髁突软骨细胞蛋白质双向电泳表达谱与对照组的相比具有显著性的差异,主要表现为图谱斑点的增减以及部分斑点的染色面积和染色深浅发生了明显变化,本实验共发现了10个加压后差异表达蛋白点,其中3个在加压培养后表达消失,1个在加压培养后出现表达,4个在加压培养后表达减弱,有2个蛋白点呈进行性表达增强.结论:压力刺激髁突软骨细胞细胞会造成其表达差异性的蛋白质.
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静压力对髁突软骨超微结构的影响
目的:观察静压力对髁突软骨组织超微结构的影响.方法:取24只6日龄乳鼠双侧髁突软骨,体外培养3 d后随机分为对照组、100 kPa加压4 h组、300 kPa加压4 h组和300 kPa加压12 h组,施加相应静压力,利用透射电镜观察加压后髁突软骨组织的变化.结果:与100 kPa加压4 h组相比,300 kPa加压4h和12 h后,下列变化依次更加明显:髁突软骨细胞内粗面内质网发达,核仁明显,胞周基质结构清晰,胶原纤维和蛋白多糖颗粒增加.结论:300 kPa以下、12 h作用时间内的静压力能够增强髁突软骨细胞基质合成能力.
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静压力对Caveolin-1调节ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞荷脂的影响
目的 观察静压力对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)荷脂情况的影响.方法 原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,取第4～10代与ox-LDL 50 μg/mL共孵育,用自行研制的压力可调细胞培养箱以不同压力加压处理(0 kPa、8 kPa、16 kPa和24 kPa).HPLC法观察静压力对VSMCs荷脂的影响;用免疫印迹法检测小凹蛋白1(caveolin-1)的表达与磷酸化情况;用下调caveolin-1活性的药物干预后再用HPLC法观察血管平滑肌细胞胆固醇含量.结果 静压力可以减少ox-LDL诱导的VSMCs内胆固醇含量,上调caveolin-1的磷酸化;其中以16 kPa压力时作用明显.SB203580可显著抑制caveolin-1磷酸化,从而导致16 kPa静压力下VSMCs内胆固醇含量增加.结论 静压力可通过调节caveolin-1磷酸化抑制ox-LDL诱导的VSMCs胆固醇蓄积.
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静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响
目的 研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响.方法 用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1h.加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性.结果 流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)％、(49.89±0.75)％、(55.77±1.57)％,呈递增趋势(P＜0.05)；静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)％.MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P＜0.05)；静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04.结论 适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖.
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静压力大小对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达影响的研究
目的 研究不同大小静压力对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响.方法 采用第4代人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs),对照组不加力,实验组用静压力加载装置分别施加15 kPa、30 kPa、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1h.加力后立即收集样本,用免疫细胞化学染色技术检测细胞内Ⅰ型腔原蛋白的表达情况,用彩色病理图像分析仪分析各组细胞的阳性表达.结果 与对照组比较,15 kPa压力下,实验组Ⅰ型胶原蛋白表达显著增多(t=5.806,P＜0.05),30 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达有所下降但仍高于对照组(t=4.933,P＜0.05);45 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组明显减少(t=5.654,P＜0.05).结论 适当大小的静压力能促进人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达,但静压力过强则会抑制其表达.
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门脉高压症的药物治疗
门静脉高压症是一组由门静压力持久增高引起的症候群.正常门静脉压力为10～14cm水柱(7～10mmHg),当门静脉与下腔静脉之间压力梯度上升至12mmHg或更高时,就会发生门静脉高压的并发症.
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可调压式细胞培育箱的研制
为研究离体培养细胞在静压力作用时的生长行为,研制了可调压式细胞培育箱.本装置包括持续性加压系统、间歇性加压系统、静压力控制测量系统、变形测量显示系统等.该系统不仅能模拟出细胞在密封培养箱内所承受的静压力效果,也可模拟出牵张力的力学作用效果,对研究细胞的应力生长关系十分有用.
