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Notch通路对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导人牙周膜细胞表达RANKL/OPG的影响
目的:探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCS)后Notch信号通路的表达及其对RANKL/OPG表达的影响.方法:酶消化法结合组织块法原代培养hPDLCs,取第三代至第五代细胞给予0.1、1、10μg/mlPg-LPS刺激72h,Real-time PCR检测RANKL/OPG mRNA的表达,并选择佳诱导浓度1μg/ml组,采用Real-time PCR检测Notch通路Notch1-2、Notch4、Jagged-1、Jagged-2、DLL-1以及Hey-1表达受体配体及目的基因表达.随后,以γ-分泌酶抑制剂DAPT预处理hPDLCs 1h,予1μg/ml Pg-LPS刺激72h后,Real-time PCR、Western-Bloting检测Noah通路目的基因Hey-1及RANKL/OPG mRNA、蛋白水平的表达.结果:1 μg/ml Pg-LPS可显著上调hPDLCs RANKL、Notch通路受体Notch4、配体DLL-1、Jagged-1及目的基因Hey-1的表达(P＜0.05);而对OPG、Nocth1-2、Jagged-2 mRNA水平表达无明显影响(P＞0.05).此外,γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制Pg-LPS诱导RANKL及Hey-1 mRNA及蛋白的表达上调,而仅对OPGmRNA表达有影响(P＜0.05).结论:Notch信号通路参与调控Pg-LPS诱导的hPDLCs RANKL/OPG表达.
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补肾通络方对骨质疏松大鼠骨吸收的影响
目的 研究补肾通络方对去卵巢骨质疏松(OP)大鼠骨代谢相关因子细胞核因子κΒ受体活化因子配体/骨保护素(RANKL/OPG)的影响.方法 通过卵巢去势的方法造成大鼠OP模型,分别进行补肾通络方、补肾中药、通络药灌胃,每日1次,连续70 d.并设立阳性对照组、模型组及假手术组.实验结束后,取血、大鼠脊椎及股骨,分别进行血清学检测、骨密度(BMD)检测.通过Western印迹检测骨组织RANKL/OPG蛋白表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠血清白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、RANKL/OPG蛋白表达均显著增加(P<0.01),BMD水平显著减少(P<0.01).与模型组相比,给药组BMD均不同程度增加,RANKL/OPG表达均不同程度下降(P<0.05).结论 补肾通络方通过抑制RANKL/OPG蛋白表达,从而抑制破骨细胞活性,减少骨吸收.
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血清可溶性RANKL/OPG在预测胸腺瘤术后复发中的价值
目的 探讨术前血清中可溶性RANKL/OPG水平与胸腺瘤术后复发的相关性,从而评价其在预测胸腺瘤术后复发中的价值.方法 采用酶联免疫吸附试验检测行正中切口手术的115例胸腺瘤患者术前血清OPG、RANKL水平,随访28(12-72)个月后25例出现了复发.结果 ①复发组的血清RANKL、RANKL/OPG水平显著高于未复发组;②佳截断点上血清RANKL/OPG诊断胸腺瘤术后复发的敏感性、特异性和正确率分别为90.1%、85.4%、87.7%.结论 术前血清可溶性RANKL/OPG水平与胸腺瘤术后复发相关,它可作为术前评价胸腺瘤远期复发的辅助临床指标,指导手术方式的选择和术后辅助治疗.
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RNAi技术沉默大鼠骨髓间充质干细胞OPG基因对RANKL/OPG表达变化研究
目的:探讨RNAi技术体外沉默大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) OPG基因提高RANKL/OPG比例的可行性.方法:设立空载组(空慢病毒载体转染BMSCs)和OPG沉默组(含OPG基因干扰片段的慢病毒载体转染BMSCs),RT-PCR检测OPG及RANKL的mRNA表达变化,Western blot检测OPG及RANKL的蛋白表达变化.结果:与空载组比较,OPG沉默组OPG的mRNA和蛋白表达显著降低,RANKL的mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);两组RANKL的蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);OPG沉默组RANKL/OPG mRNA和蛋白表达比例均显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:以慢病毒为载体,通过RNAi技术体外沉默大鼠骨髓间质干细胞OPG基因提高RANKL/OPG比例的方法是可行的.
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新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞RANKL/OPGmRNA表达的影响
目的 研究新疆马鹿角提取物对MC3T3-E1成骨细胞核因子-kβ受体活化因子配体(RANKL)/护骨素(OPG)mRNA表达的影响.方法 体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分别加入含不同剂量新疆马鹿角提取物的培养液,72 h后分别提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测RANKL/OPG mRNA表达.结果 培养72 h后RANKL/OPG mRNA表达的灰度值(0.312±0.0710),与对照组(2.017±0.1320)比较,新疆马鹿角提取物呈浓度依赖性降低RANKL mRNA的表达,增加OPG mRNA的表达,各剂量组RANKL/OPG mRNA吸光度比值降低.结论 新疆马鹿角提取物可能通过调节成骨细胞RANKL/OPG的基因表达,而抑制破骨细胞介导的骨吸收.
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重组人骨形态发生蛋白2缓释体对铬磨损颗粒诱导的溶骨效应的影响
目的 建立大鼠植骨气囊模型,观察在不同浓度重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)缓释体干预下气囊内组织的破骨细胞分化因子(RANKL)、骨破坏素(OPG)表达情况.方法 在大鼠背部注入空气形成气囊,取同源大鼠的颅骨植入气囊内.将已制成的植骨气囊模型大鼠分成5组:空白组、铬颗粒组、50 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组、100 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组和200 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组.各组分别用药处理,2周后取出囊腔内组织进行RANKL、OPG的Wester-blot、Rt-PCR检测,并对囊腔内骨片行TRAP染色,用计算机图像分析技术测定骨片破骨细胞染色面积,进行药效评价.结果 RANKL、OPG在各组囊腔组织中均有表达.骨片破骨细胞染色面积、RANKL、OPG的Wester-blot和RT-PCR结果及RANKL/OPG值,在铬颗粒组中明显高于其他4组(P＜0.05)；在3个rhBMP-2缓释体干预组内,随着rhBMP-2缓释体浓度增高呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P＜0.05)；在空白组和200 μg/L rhBMP-2缓释体+铬颗粒组间未见明显差异(P＞0.05).结论 大鼠植骨气囊模型成功的模拟了人工关节无菌性松动的生物学和组织学特征.铬颗粒可以引起RANKL/OPG值升高,促进溶骨；rhBMP-2缓释体通过降低RANKL/OPG值,从而促进成骨、抑制骨吸收效益.
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活血壮骨汤联合夹板外固定治疗老年桡骨远端骨折愈合效果的临床评价及对患者体内骨代谢的影响
目的:观察活血壮骨汤联合夹板外固定治疗老年桡骨远端骨折的临床疗效及其对骨代谢的作用.方法:选取146例骨质疏松性桡骨远端骨折患者随机分为2组,对照组71例,观察组75例,2组均采用夹板外固定的方法进行治疗,对照组患者给予阿仑膦酸钠联合骨化三醇治疗,连续治疗3个月.观察组给予活血壮骨汤,每日1剂,分早晚2次温服,连续治疗3个月.比较2组患者治疗前后血清中的骨钙素(BGP)、骨形态发生蛋白～2(BMP-2)、骨碱性磷酸酶(B-ALP)、骨保护素(OPG)及核因子κB受体活化因子配基(RANKL);比较2组患者治疗3个月及6个月后桡骨高度、掌倾角及尺偏角;2组患者6个月后疼痛VAS评分、Gartland-Werley腕关节功能评分及2组临床疗效.结果:2组患者桡骨高度、掌倾角、尺偏角无显著差别(P＞0.05);观察组比对照组的BGP、BMP-2升高的幅度更明显(P＜0.05),而观察组的B-ALP及RANKL/OPG水平显著较对照组低(P＜0.05).观察组的疼痛VAS评分及Gartland-Werley腕关节功能评分均优于对照组(P＜0.05);治疗后对照组的总有效率为63.4％,观察组的总有效率为80.0％,2组的临床疗效具有显著性差异(P＜0.05).结论:活血壮骨汤方联合夹板外固定治疗老年桡骨远端骨折的疗效确切,其机制可能与调节骨代谢相关.
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玉女煎加减对牙周炎患者龈沟液中病原菌及RANKL/OPG水平的影响
目的:观察玉女煎加减对牙周炎患者龈沟液中病原菌及RANKL/OPG水平的影响.方法:选取自2015年1月～2016年1月我院收治的牙周炎患者100例,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组各50例.入院后,两组患者均给予常规治疗,观察组在此基础上再给予玉女煎加减治疗.比较两组患者治疗前后牙周组织相关指标、牙周骨参数及GCF中病原菌、RANKL/OPG水平的变化情况.结果:与治疗前相比,各组治疗后的牙周组织相关指标(PLI、BOP、AL、PD)及GCF中牙周病原菌(Pg、Tf、Aa)检出率均降低,GCF中RANKL浓度降低,OPG浓度增高,而RANKL/OPG降低,治疗前后上述指标比较差异均具有统计学意义(P＜0.05);且以观察组治疗后上述指标改善更为显著,治疗后组间上述指标比较差异具有统计学意义(P＜0.05).疗程结束时,观察组成骨细胞数较对照组多,而破骨细胞数较对照组少,比较差异具有统计学意义(P＜0.05),而组间牙槽骨嵴高度丧失量、附着丧失量比较无统计学意义(P＞0.05).结论:玉女煎加减治疗牙周炎的效果显著,既能减轻对牙周组织的损害、促进牙周再生,又能降低龈沟液中病原菌含量及促进牙槽骨改建.
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卵巢切除小鼠骨髓间充质干细胞RANKL、OPG促进破骨细胞发育并增强其功能
目的 研究雌激素调控骨髓间充质干细胞(BMSC)表达核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护因子(OPG)对破骨细胞发育和功能的影响.方法 选用健康雌性小鼠行双侧卵巢切除术(OVX),建立绝经后骨质疏松模型.选用同一批次健康小鼠行双侧卵巢脂肪组织部分切除,建立假手术组(sham).用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、RANKL诱导小鼠单核细胞为破骨细胞,同时分别加入sham和OVX组BMSC与单核细胞共培养.抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数2组BMSC对骨髓诱导发育为破骨细胞的数量.甲苯胺蓝染色检测2组共培养体系中破骨细胞骨吸收陷窝的数量.RT-PCR和Western blot法检测sham和OVX组BMSC中OPG、RANKL的表达.结果 TRAP和甲苯胺蓝染色显示,OVX组中破骨细胞数目及吸收陷窝数大于sham组(P＜0.05).RT-PCR和Western blot法结果显示OVX组较sham组OPG表达显著降低,RANKL显著增强(P＜0.05).结论 雌激素能够影响BMSC中OPG和RANKL的表达,雌激素缺乏环境下,BMSC促进破骨细胞发育并增强其功能.
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人牙周细胞压力作用下Hif-1 alpha及Rankl/Opg变化
目的:探讨过大压力对人牙周膜细胞三维微球中Hif-1 alpha和Rankl/Opg表达的影响.方法:体外构建人牙周膜细胞三维微球,压力组给予0.2 MPa,4h静态压力,对照组不给予额外压力,实时定量PCR检测Hif-1 alpha、Rankl和Opg表达.结果:压力组人牙周膜细胞微球Hif-1 alpha和Rankl mRNA表达增加,而Opg mRNA表达降低.结论:过大压力可以使人牙周膜细胞上调Hif-1 alpha并且升高Rankl/Opg mRNA比值,使其分泌的因子向促破骨方向发展.
关键词： 人牙周膜细胞微球 压力 Hif-1 alpha RANKL/OPG -
辛伐他汀抑制破骨细胞和调节 RANKL／OPG 系统的关系研究
目的：探讨辛伐他汀对根尖周炎大鼠 RANKL／OPG 及破骨细胞的影响。方法：选取8周龄雄性 Wistar 大鼠（n ＝50），髓腔直接暴露法建立条件对照组模型（n ＝25），开髓术后0、3、6、9、12、15、18、21 d 局部注射1 g／L 辛伐他汀溶液建立载药组模型（n ＝25）；两组于术后1、3、7、14、21 d 各时间点分别处死5只大鼠，组织切片标本，免疫组化检测 RANKL／OPG 的表达；酶组化检测破骨细胞数量。结果：载药组 RANKL 表达量在术后3～21 d 显著低于对照组（P ＜0．05）；载药组 OPG 表达量除1 d 组，其余均高于对照组（P ＜0．05）；载药组 RANKL／OPG 与对照组相比明显降低（P ＜0．05）；载药组大鼠 TRAP 阳性多核细胞数量较对照组明显减少（P ＜0．05）。结论：局部注射辛伐他汀，通过降低 RANKL／OPG，从而抑制大鼠根尖周炎模型破骨细胞的活动。
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静压力对人牙周膜干细胞骨向分化能力的影响
目的：观察静压力对人牙周膜干细胞（hPDLSCs）骨向分化能力的影响。方法：体外培养 hP-DLSCs，并将其随机分为4个组；置于压力加载装置内分别给予0（对照组）、20、100、200 kPa 的静压力刺激，连续加压6 h 后分别采用 Quantitative RT－PCR 和 Western－blots 法检测 hPDLSCs 的破骨细胞核因子 KB 受体活化因子配基（RANKL）及骨保护因子（OPG）的表达。结果：与对照组相比，当压力值为20 kPa 时，RANKL mRNA和蛋白的表达量变化不明显（P ＞0．05），但 OPG 的表达量明显升高（P ＜0．05），RANKL／OPG 的比值明显降低（P ＜0．05）；当压力值为100 kPa 时，RANKL mRNA 和蛋白的表达量明显升高（P ＜0．05），但 OPG 的表达量降低（P ＜0．05），RANKL／OPG 的比值明显升高（P ＜0．05）；当压力值为200 kPa 时，RANKL、OPG mRNA 和蛋白的表达量均明显降低（P ＜0．05），其中以 RANKL 下降的程度更加明显，RANKL／OPG 的比值明显降低（P ＜0．05）。结论：持续的静压力作用可使 hPDLSCs 表达 OPG 和 RANKL 的水平发生明显变化，并具有力值依赖性。
关键词： 静压力 人牙周膜干细胞(hPDLSCs) RANKL/OPG -
类风湿关节炎继发骨质疏松的骨侵蚀的研究进展
骨质疏松是类风湿关节炎常见的并发症之一,也是类风湿关节炎骨与关节受累的表现,RANKL/OPG比值被认为是反映骨重建环境的标志,高比例代表骨形成,而低比有利于骨吸收.补肾抗风湿中医药被认为具有很好的调节RANKL/OPG的比值,本文就RANKL/OPG与类风湿关节炎骨质疏松的骨侵蚀关系进行综述.
