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17-β雌二醇对牙龈卟啉单胞菌作用下人牙周膜细胞表达白细胞介素6、8的影响
目的 观察17-β雌二醇(estradiol,E2)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg) W83作用下人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)白细胞介素(interleukin,IL)6和IL-8表达的影响.方法 原代培养hPDLC,传至第4代,分别以①10-10 mol/L E2(E21组)；②10-7 mol/L E2(E22组)；③感染复数为10∶1的Pg( Pg1组)；③感染复数为100∶1的Pg(Pg2组)；⑤感染复数为100∶1的Pg+ 10-10 mol/L E2(Pg2 +E21组)；⑥感染复数为100∶1的Pg+10-7 mol/LE2(Pg2+ E22组)处理hPDLC 12和24h;以0.1％无水乙醇为对照组,酶联免疫吸附测定法榆测细胞IL-6和IL-8蛋白的表达水平,实时荧光定量反转录聚合酶链法检测24 h mRNA水平.采用单因素方差分析比较各组IL-6、IL-8蛋白和mRNA表达水平的组间差异,小显著性差异事后比较检验进行组间差异的两两比较,采用独立样本t检验分析各组12和24 h IL-6、IL-8表达水平的差异,检验水准为双侧α=0.05.结果 Pg2组24h时IL-6蛋白表达水平[(2482.88±26.53) ng/L]显著高于Pg1组[(734.09±87.90)ng/L]、对照组[(425.8±77.25) ng/L]和12 h时的Pg2组[(1157.50±234.65) ng/L,P=0.000]；Pg2组24 h时IL-8蛋白表达水平[(4965.81±1072.55) ng/L]显著高于Pg1组[(803.51 ±162.08) ng/L,P=0.007]、对照组[(400.75±2.27) ng/L,p=0.005]和12h时的Pg2组[(1431.12 ±82.78)ng/L,P=0.001].E2对hPDLC IL-6和IL-8的表达无显著调节作用.与感染复数100∶1的Pg单独作用相比,E2和Pg联合处理24 h显著促进了hPDLC IL-6的表达水平,而未影响IL-8的表达水平:Pg2 +E21组、Pg2+ E22组IL-6 mRNA相对于磷酸甘油醛脱氢酶的表达水平(分别为0.49±0.15、0.53±0.16)显著高于Pg2组(0.19±0.06) (P =0.021,P=0.036),两组IL-6蛋白水平[分别为(5512.66±1022.07)、(6988.78±2279.13) ng/L]亦显著高于Pg2组[(3138.46±183.72) ng/L](P=0.012,P=0.000).结论 PgW83促进hPDLC IL-6和IL-8的表达呈剂量和时间依赖性；无牙周致病菌感染时E2对hPDLC IL-6和IL-8的表达无显著调节作用；而在牙周感染Pg时E2可能与Pg协同直接促进hPDLC产生IL-6,从而可能促进了牙周炎症过程.
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基因疫苗预防牙周炎的实验研究
目的将已构建的P.gingivalis kgpcd基因的真核重组表达质粒pcDNA3.1+/kgpcd作为基因疫苗,免疫SD大鼠并观察其在预防牙周炎中的作用.方法 pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,采用间接ELISA法检测唾液中特异性抗体的水平,并经组织化学染色观察免疫对SD大鼠牙周炎的保护情况.结果重组质粒pcDNA3.1+/kgpcd经颌下腺靶向注射免疫SD大鼠,可诱导机体产生高水平的唾液中抗KGPcd sIgA抗体,显著高于对照组,并且实验组牙槽骨的破坏程度显著低于对照组.结论颌下腺靶向注射免疫可引起有效的黏膜免疫应答,KGPcd作为有效的免疫原产生的抗体对P.gingivali引起的牙周炎可起到保护作用.
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牙龈卟啉单胞菌Hgp44基因的克隆表达与纯化
目的 克隆表达牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)牙龈素中黏附素区域的Hgp44基因,并纯化目的蛋白.方法 通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术,克隆得到PgATCC33277的Hgp4基因,插入到克隆载体pMD18-T中并测序鉴定.经过酶切后将目的基因片段与表达载体pET22b相连,构建出表达质粒pET22b-Hgp44.将重组质粒转化到感受态细胞BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达融合蛋白,通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹法进行分析.用固定化金属亲和层析法对重组蛋白进行分离纯化.结果 目的基因片段约为1100 bp,与预期大小相符,测序结果与GenBank中ATCC33277国际标准菌株的RgpA的等位基因序列U15282一致.IPTG诱导后的菌体经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后形成一个以包涵体形式存在的44 000的融合蛋白.蛋白质印迹法检测证实其具有免疫原性.用镍离子金属螯合层析柱纯化出了目的蛋白,后得到约3.5 mg/L的目的蛋白.结论 成功克隆表达了PgHgp44基因,并纯化出了目的蛋白.
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排龈术用于楔状缺损修复后牙周状况评价
目的 评估排龈术用于楔状缺损修复后患牙的牙周状况.方法 选择楔状缺损下颌双尖牙138颗,分成A、B两组,A组排龈后再用单组分光固化复合体(Dyract)充填,B组直接Dyract充填,于术前、术后1周、1个月、3个月、6个月分别以菌斑指数、牙龈指数、龈沟出血指数、牙周探诊深度、龈沟液量及龈沟液中天冬氨酸转氨酶水平为指标,评估楔状缺损修复后的牙周状况.结果 术前、术后1周及1个月A、B两组所有指标差异均无统计学意义(P＞0.05);术后3个月及6个月A、B两组菌斑指数、牙龈指数、龈沟出血指数、牙周探诊深度差异无统计学意义(P＞0.05),而龈沟液量、龈沟液中天冬氨酸转氨酶水平差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 排龈术用于楔状缺损修复能减少牙周损伤,获得较好的远期疗效.
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维吾尔族151名青年前牙、附着龈及唇部颜色的调查
目的 分析维吾尔族青年口腔软硬组织的颜色特点,以期为临床提供参考.方法测量151名18～22岁维吾尔族青年(男性48名,女性103名)前牙、附着龈及唇部的色度值.结果男女上中切牙向尖牙方向L*ab降低,C*ab增大,H*ab减小;下前牙除L*ab外,C*ab、H*ab的变化趋势与上前牙相同.男性附着龈、上唇及下唇的L*ab分别为50.50±3.59、41.92±4.10、45.02±3.06,C*ab分别为29.94±3.21、27.00±2.47、30.35±2.67,H*ab分别为30.00±3.27、31.71±3.69、27.73±3.27;女性附着龈、上唇及下唇的L*ab分别为54.28 ±5.06、41.73±3.70、47.27±2.97,C*ab分别为27.98±3.93、27.23±2.42、31.22±2.59,H*ab分别为33.39±3.67、32.28±3.68、27.57±2.65.结论维吾尔族青年牙齿颜色存在自中心向两侧明度递减、彩度递增、色相角减小的趋势.牙齿、附着龈及唇部颜色存在性别差异.男女下唇颜色均比上唇更亮、更偏红且颜色深.
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人牙龈结合上皮、口腔龈上皮及沟内上皮中细胞角蛋白的表达
目的检测人牙龈上皮的细胞角蛋白(CK)谱,探讨结合上皮(JE)与口腔龈上皮(OE)、沟内上皮(SE)的不同.方法 5例人磨牙及前磨牙牙龈颊舌向石蜡切片,采用免疫组化SP法行CK5/6、7、8/18、10/13、16、17、19、20染色.结果 CK7、17在3种上皮中均无表达;CK5/6、20在3种上皮的基底上层(尤其是近表层)为弱阳性及阳性表达,基底层无表达;CK10/13、16在JE全层均有表达,在OE和SE仅限于基底上层,其中CK10/13为强阳性,CK16为弱阳性及阳性;CK19在JE全层强阳性,在OE和SE仅限于基底层,JE和SE分界明显;CK8/18与CK19相似,只是表达较弱,近基底层的基底上层也有少量表达.结论 JE是一种不同于OE和SE的特殊低分化上皮,CK19可作为JE的特征性标记物区别于OE和SE,CK10/13、16可用于体外培养的上述3种细胞的鉴别.
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注射牙龈紫质单胞菌脂多糖引发猪牙槽骨组织吸收的实验研究
牙周袋内革兰阴性厌氧菌在牙周病发病中起重要作用,其中龈紫质单胞菌(Porphyromonas gingi-valis, Pg)的作用更是研究的焦点[1].细菌来源的可溶性因子可能是导致骨吸收的直接原因.Pg来源的脂多糖具有独特的化学结构及特征性免疫生物学活性[2].活体条件下Pg脂多糖对牙槽骨组织的生物学作用尚待研究.本研究旨在探讨局部注射Pg脂多糖对猪牙槽骨组织的影响.
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动脉粥样硬化斑块中牙周可疑致病微生物的检测
目的:检测动脉粥样硬化斑块中是否存在牙周致病菌.方法:共选取在手术过程中剥离的、已有动脉粥样硬化改变的动脉内膜标本10例,采用PCR扩增16S rDNA(16S ribosomal DNA)片段的方法,检测7种牙周可疑致病菌,包括牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivdis,Pg)、福赛坦菌(Tannerella forsythia,Tf)、伴放线聚生杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans,Aa)、中间普氏菌(Prevotella intermedia,Pi)、变黑普氏菌(Prevotella nigrescen,Pn)、牙密螺旋体(Treponema denticola,Td)及直肠弯曲菌(Campylobacter rectus,Cr).结果:10例标本中有3例检测出了牙周可疑致病菌,3例样本均检出了Pg,这3例中有1例同时检出了Tf,另1例同时检出了Pn;其余7例标本未检出相关牙周致病菌.结论:动脉粥样硬化斑块样本中检出了部分牙周可疑致病菌,为牙周炎与动脉粥样硬化之间可能存在联系提供了初步证据.
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N-乙酰半胱氨酸影响脂多糖调节骨唾液酸蛋白基因转录
目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)调节成骨细胞(ROS 17/2.8)骨唾液酸蛋白(BSP)基因表达和转录的影响.方法:将ROS17/2.8细胞随机分为4组:空白对照组、LPS(0.01 mg/L P.g.LPS)组、NAC(20mmol/L)组、NAC+LPS组(NAC提前30min预刺激后,NAC与P.g.LPS共同作用),持续作用细胞12 h后,用实时荧光定量PCR检测BSP mRNA的表达,用瞬时转染法分析BSP启动子的转录活性.结果:各组细胞BSP mRNA表达量均与空白对照组的表达量取比值,0.01 mg/L P.g.LPS使比值升高(F=9.998,P<0.05),NAC使其降低(F=6.821,P<0.05),NAC使LPS对比值的升高变化降低(F=6.744,P<0.05);各组细胞BSP基因启动子(pLUC3)转录活性值与空白载体(pLUCB)活性值取比值,0.01 mg/L P.g.LPS使比值升高(F=5.546,P<0.05),NAC使其降低(F=11.544,P<0.01),NAC使LPS对比值的升高变化降低(F=5.624,P<0.05).结论:NAC抑制0.01 mg/L P.g.LPS对ROS17/2.8细胞BSP基因表达和转录的增强调节.
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大蒜素抑制牙龈卟啉单胞菌诱导人肺上皮细胞凋亡的作用
目的：探讨不同浓度大蒜素对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）诱导人肺上皮细胞A549凋亡的影响。方法以微量肉汤稀释法，通过检测不同浓度大蒜素在不同时间点对P. gingivalis的抑制作用，测定大蒜素对P.gingivalis的低抑菌浓度（MIC）以及低杀菌浓度（MBC）。分别于12 h及24 h时，以四唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（64、96、128 mg/L）大蒜素对P.gingivalis感染后的A549存活率的影响，以流式细胞术FITC/PI染色法检测24 h时，P.gingivalis与大蒜素（128 mg/L）分别以及共同作用对A549细胞凋亡率的影响。结果大蒜素对P.gingivalis的MIC为64 mg/L，MBC为128 mg/L。MTT检测结果显示，P.gingivalis感染后，随着大蒜素浓度的增加，细胞存活率增加，差异有统计学意义（P<0.05）。大蒜素（128 mg/L）组的存活率与细胞对照组比较差异无统计学意义，表明大蒜素对A549无明显细胞毒性。流式细胞术检测结果显示，各组细胞凋亡率由高到低为：P. gingivalis组>P.gingivalis+大蒜素组>大蒜素组>细胞对照组，差异有统计学意义（P<0.01），大蒜素对P.gingivalis感染后A549的凋亡有明显抑制作用。结论大蒜素可有效抑制P.gingivalis对肺上皮细胞的感染，对于治疗牙周炎合并肺部感染有良好的应用前景。
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排龈线一次法与二次法排龈对牙龈健康的影响
在固定修复的基牙和上颌双尖牙上作金属烤瓷冠时,常常将冠颈边缘置于龈下.在龈下预备时为避免损伤牙龈,通常要使用排龈线压排技术.传统的压排技术是两次压排法,即先排龈后备牙,牙体预备完成后再次排龈,然后取模.这种二次排龈法不仅耗费时间,而且排龈线取出后不久,被分开的牙龈很快又会塌向牙颈部,妨碍了操作者的视线,颈部预备时难以做到不损伤牙龈.为解决牙龈损伤问题,本研究采用一次压排法,与二次压排法对照,比较两种方法对牙龈健康的影响,探讨一次法在临床使用的可行性.
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上唇、唇龈沟和梨状孔进路在鼻科手术中的应用
目的:探讨更优良的鼻科手术入路,以缩短手术切口,不遗留瘢痕,扩大手术适应证范围.方法:切开上唇、唇龈沟和梨状孔黏膜,从骨膜面分离、牵开组织瓣,充分暴露梨状孔和上颌骨前部结构,以处理鼻腔深部病变.结果:11例均满意地去除了病变,切口均一期愈合,未遗留明显瘢痕.结论:该手术进路能理想地暴露术野,操作方便、实用,减少了术后瘢痕和畸形,且减少了对面部的损伤.
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细菌脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞产生IL-1β
目的:在细菌脂多糖诱导下探讨人牙龈成纤维细胞(HGF)在牙周炎症反应中的作用.方法:用细胞培养法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养液上清中的IL-1β浓度;用MTT法检测人牙龈成纤维细胞对细菌脂多糖(LPS)的增殖反应.结果:LPS对HGF具有促增殖作用;LPS以剂量依赖方式诱导HGF产生IL-1β,6h达大分泌量.结论:HGF是一种能分泌炎性细胞因子参与牙周组织破坏的细胞.
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复方氯已定含漱液对牙龈炎与菌斑的疗效观察
目的:研究复方氯已定含漱液对牙龈炎与茵斑的临床效果.方法:随机抽取临床确诊为慢性牙龈炎患者250例,分为3个实验组,即复方氯已定合漱液、呋喃西林液、蒸馏水组.用药前后检查牙龈炎指数(GI)、牙龈出血指数(SBI)、菌斑指数(PLI)作为观察指标.结果:用药后复方氯已定含漱液组PLI、GI、SBI均较用药前明显下降,对慢性牙龈炎的有效率达98.3%,同呋喃西林、蒸馏水组比较有高度显著性差异(P＜0.01).结论:复方氯已定含漱能有效控制茵斑和牙龈炎.
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金瓷修复中牙龈处理及保护的临床分析
1997年以来,我科收治了782例金瓷修复体,均取得良好效果,现报告如下.
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牙龈卟啉单胞菌慢性感染对大鼠颈动脉结构影响
目的 探讨牙龈卟啉单胞菌慢性感染对SD大鼠颈动脉结构及其粥样斑块影响.方法 将80只10周龄SD大鼠随机分为对照组和牙龈炎组,通过牙颈部丝线结扎并局部接种牙龈卟啉单胞菌的方法建立牙龈炎动物模型,分别在实验第1天(T0)、第1个月(T1)、第3个月(T2)、第6个月(T3)分批处死SD大鼠,取颈动脉,苏木精-伊红(HE)染色进行病理学观察,计算颈动脉横断面内膜与中膜面积的比值(I/M);采用巢式聚合酶链反应(PCR)法检测动脉壁及血液中牙龈卟啉单胞菌16S rDNA.结果 T0、T1时牙龈炎组与对照组I/M值比较差异无显著性(P＞0.05),T2、T3时牙龈炎组I/M值大于对照组(F=38.02,q =8.26、10.32,P＜0.01).T1、T2、T3时牙龈炎组血液中检出牙龈卟啉单胞菌16S rDNA,T2、T3时在颈动脉斑块中检测到牙龈卟啉单胞菌16S rDNA.对照组各时期动脉粥样硬化斑块及血液中均未检测到牙龈卟啉单胞菌16S rDNA.结论 牙龈卟啉单胞菌慢性感染可加快颈动脉内膜粥样斑块的发展.
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青年人牙龈缘的测量研究
①目的为计算机技术应用于全口义齿磨光面牙龈缘的制作提供测量方法和基础数据.②方法选择17～25岁学生400名,灌取上、下颌模型,利用自行设计的多媒体计算机诊断与预测系统对牙龈缘形态进行测量.③结果得到牙龈缘形态的测量方法及其弧长与弦高的数据.④结论牙龈缘形态有规律可循,记录弦高、弧长实测值与牙冠宽度的相对值能科学地反映个体差异.
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排龈线在烤瓷冠桥修复中的应用
1998～1999年,我们采用成品排龈线,对35例(60颗牙)烤瓷冠桥修复病人进行基牙预备前后牙龈排龈处理,临床效果较好,现报告如下.
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烤瓷全冠龈缘修复效果观察
目的:了解前牙金属烤瓷冠粘戴后基牙游离龈变色的特点.方法:肉眼观察83颗前牙在修复前后游离龈的色泽变化.结果:修复后,19颗基牙游离龈无明显变色,其中包括8颗用金合金烤瓷冠修复的基牙、36颗基牙游离龈轻度变色,28颗游离龈重度变色.结论:由于游离龈的光透过性及金属基底冠对牙根的阻光作用,基牙游离龈变色是一种不可避免的可逆光学现象.死髓变色基牙游离龈变色较重,贵金属烤瓷冠有助于减轻这种游离龈变色.
