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唾液富组蛋白5抑制牙龈卟啉单胞菌与具核梭杆菌共聚的初步研究
目的 研究唾液富组蛋白5抑制牙龈卟啉单胞菌与具核梭杆菌共聚的能力并进行初步的机制分析,以期揭示富组蛋白5在抑制慢性牙周炎发生过程中的作用.方法 收集49例就诊于中国医科大学口腔医学院牙周科的慢性牙周炎患者(慢性牙周炎组)和27名牙周健康者(牙周健康组)的唾液及龈上、龈下菌斑,采用酶联免疫吸附测定试剂盒检测唾液中富组蛋白5的含量,实时荧光定量PCR(绝对定量)检测龈上、龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)和总细菌的DNA拷贝数;采用黏附实验和扫描电镜分别检测25 mg/L富组蛋白5对Pg-Pg、Pg-Fn共聚的影响;实时荧光定量PCR(相对定量)技术检测25 mg/L富组蛋白5对Pg血凝素基因、精氨酸牙龈素基因及Fn FomA基因表达的影响.实验组(加入25 mg/L富组蛋白5)与对照组(未加入富组蛋白5)之间差异的比较采用独立样本t检验,以双侧P<0.05为差异有统计学意义.结果 慢性牙周炎组唾液富组蛋白5与龈上菌斑中Fn、Pg均呈负相关关系(r=-0.379, r=-0.624);与龈下菌斑中的Fn、Pg也均呈负相关关系(r=-0.404,r=-0.314).牙周健康组富组蛋白5仅与龈上、龈下菌斑中的Pg呈负相关关系(r=-0.572,r=-0.533).25 mg/L的富组蛋白5能抑制Pg-Pg及Pg-Fn的共聚;实时荧光定量PCR(相对定量)结果显示,唾液富组蛋白5使Pg血凝素基因表达升高(14.52±3.25)倍,使Fn FomA基因表达下降至原来的(0.22±0.10).结论 唾液富组蛋白5可能通过调节Pg血凝素基因、Fn FomA基因的表达抑制Pg-Pg和Pg-Fn的共聚.
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外源性色素吸附于人唾液蛋白质膜表面的动力学观察
目的 通过实时动态监测茶黄素、姜黄素和矢车菊素吸附于人唾液富组蛋白5表面的动力学过程,探讨牙面着色的形成机制.方法 通过表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)芯片表面自组装富组蛋白5单分子膜,监测茶黄素、姜黄素和矢车菊素吸附于该膜表面的过程,根据Langmuir和Freundlich吸附等温线的相关系数(R2)建立3种色素在富组蛋白5表面的吸附模型,并计算Langmuir和Freundlich吸附常数(KL和Kf)、大吸附量(Mm)、结合和解离速率常数(κa和kd)、结合和解离平衡常数(KA和KD),比较3种色素与富组蛋白5的亲和力差异.使用配对t检验、单因素方差分析和SNK-q检验比较色素与富组蛋白5之间吸附动力学常数的差异,检验水准为双侧α=0.05.结果 Freundlich模型较Langmuir更适于描述色素吸附于富组蛋白5表面的过程.吸附动力学常数分析证实,色素对富组蛋白5表面的亲和力大小为茶黄素[KD=(1.664±0.072)×10-4 mol/L]＞矢车菊素[KD=(1.932 ±0.034)×10-4 mol/L]＞姜黄素[KD=(2.867 ±0.137)×10-4 mol/L] (P ＜0.05).结论 3种外源性色素中茶黄素对唾液富组蛋白5具亲和力,可导致较严重的牙着色.
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抗菌肽促进创伤愈合研究进展
抗菌肽（antibacterial peptide），由10～50个氨基酸组成，存在于上皮和免疫组织中，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤活性，人类抗菌肽构成了机体先天性免疫系统的第一道防线，被广泛研究［1］。目前越来越多的研究表明，抗菌肽的作用远不止于此，它广泛参与维持机体完整性的一系列相关生物学活动，包括创伤修复［2］。国内相关报道较少，现将其中3种抗菌肽与创伤修复研究进展综述如下。
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富组蛋白1对人表皮细胞株HaCaT增殖和迁移功能的影响
目的 了解富组蛋白1( Hst1)对人表皮细胞株HaCaT增殖、迁移功能的影响. 方法 (1)常规培养HaCaT细胞,按照随机数字表法(分组方法下同)分为对照组与100、30、3μg/mL Hst1组以及10 ng/mL重组人表皮生长因子(rhEGF)组、30 μg/mL Hst1+ 10 ng/mL rhEGF组,每组样本数为27.对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度Hst1和(或)rhEGF,培养24、48、72 h采用细胞计数法检测各组细胞增殖水平.(2)将HaCaT细胞分为对照组与100、30、3μg/mL Hst1组,每组样本数为27.对照组不添加刺激因素,后3组分别加入相应浓度Hst1,培养24、48、72 h采用流式细胞术检测各组细胞周期,计算增殖指数(PI).(3)将HaCaT细胞分为对照组、30 μg/mL Hst1组、10 ng/mL rhEGF组、30 μg/mL Hst1+10 ng/mL rhEGF组、15 μg/mL Hst1+5 ng/mL rhEGF组、15 iμg/mL Hst1+ 10 ng/mL rhEGF组,每组样本数为10.对照组不添加刺激因素,后5组分别加入相应浓度的Hst1和(或)rhEGF培养.将各组细胞分为2份,一份用丝裂霉素C处理2h,另一份不作处理,均行划痕实验,划痕后0(即刻)、16、24 h观测细胞迁移情况并计算划痕愈合面积百分比.对数据行方差分析、LSD-t检验或Dunnettt检验. 结果 (1)培养24 h,10 ng/mL rhEGF组、30 μg/mLHst1+ 10 ng/mL rhEGF组细胞数显著高于对照组(t值分别为3.813、5.410,P＜0.05或P＜0.01).与培养48 h时30、3 μg/mL Hst1组比较除外,其余各Hst1和(或)rhEGF处理组培养48、72 h细胞数均显著高于对照组(t值为7.754～24.979,P值均小于0.01).培养72 h,100 μg/mL Hst1组细胞数为(19.21±0.59)×104个,明显高于30 μg/mL Hst1组的(16.19±0.53) ×104个及3 μg/mL Hst1组的(15.38±0.13)×104个(t值分别为11.391、19.017,P值均小于0.01)；30.μg/mLHst1+ 10 ng/mLrhEGF组细胞数高于30、3μg/mL Hst1组及10 ng/mL rhEGF组(t值为4.579 ～34.884,P＜0.05或P ＜0.01).各组细胞数均随培养时间的延长而增加.(2)与对照组培养24、48 h比较,100、30 μg/mL Hst1组G0/G1期细胞百分比降低,S期细胞百分比提高(30 μg/mL Hst1组与对照组培养24 h比较除外),PI值显著提高(t值为4.752 ～16.104,P值均小于0.01).3μg/mL Hst1组仅在培养48 h时PI值较对照组显著增加(t=4.609,P＜0.01).培养72 h,仅100 μg/mL Hst1组PI值显著高于对照组(t =8.005,P＜0.01).各Hst1处理组组间比较,各时相点随Hst1浓度降低,G0/G1期细胞百分比呈升高趋势,S期细胞百分比及PI值均呈下降趋势.各Hst1处理组组内比较,随着培养时间的延长,G0/G1期细胞百分比先降低后增加,S期细胞百分比、PI值均先增加后降低.(3)未用丝裂霉素C处理:划痕后16h,30 μg/mL Hst1组划痕愈合面积百分比为(75.9±3.9)％,显著高于对照组、10 ng/mL rhEGF组[(53.0±3.5)％、(61.7±2.5)％,t值分别为12.241、7.598,P值均小于0.01],低于30 μg/mL Hst1+10 ng/mL rhEGF组、15 μg/mL Hst1+5 ng/mL rhEGF组、15 μg/mLHst1+ 10 ng/mL rhEGF组[(95.0±4.1)％、(97.0±3.7)％、(80.5±5.9)％,t值为-11.324～-2.502,P＜0.05或P＜0.01].丝裂霉素C处理:划痕后16h,30 μg/mL Hst1组划痕愈合面积百分比为(54.1±4.5)％,高于对照组[(35.8±5.7)％,t =7.790,P＜0 01],但较未用丝裂霉素C处理时明显下降(t=- 10.863,P＜0.01)；与其他Hst1和rhEGF联合处理组相近(t值为0.061 ～2.030,P值均大于0.05).未用丝裂霉素C处理时及丝裂霉素C处理后各组内划痕后24 h与16 h划痕愈合面积百分比相近(F值为0.856～3.062,P值均大于0.05). 结论 Hst1能促进HaCaT细胞增殖和迁移,与rhEGF联合应用时对细胞增殖有协同促进作用,但对细胞迁移无明显协同作用.
