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AngiostatinK(1-3)裸DNA治疗人脑胶质瘤的实验研究
探讨AngiostatinK(1-3)[AK(1-3)]裸DNA治疗人脑胶质瘤的可行性和作用机制.用脂质体包埋法将AK(1-3)基因的真核表达载体pcDNA-SAK(1-3)注入裸鼠皮下SHG44人脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,结合PCR、免疫组化、电镜、微血管和瘤体坏死区计数,确定抗血管生成基因治疗人脑胶质瘤的特点.AK(1-3)裸DNA在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤血管生成能力显著下降,肿瘤生长受到抑制,抑瘤率达43%.本研究证明,AK(1-3)裸DNA能抑制人脑胶质瘤生长,为非病毒载体介导的抗血管生成基因治疗的应用奠定了基础.
关键词： AngiostatinK(1-3) 裸DNA 治疗 胶质瘤 -
非病毒性载体在肝脏疾病基因治疗中的研究进展
基因治疗肝脏疾病的新策略已引起高度关注,在肝病的基因治疗中,关键的是如何将治疗基因特异性地导入肝细胞中并适当表达.在过去的二十多年里,受体介导的基因给药系统广泛用于肝靶向基因递送,但一些非病毒载体的基因传递效率不高.本文综述了目前常用的非病毒载体,包括其理化性质、优点和局限性,基因递送作用机理以及修饰后在肝靶向基因治疗中的应用,并综述了在肝细胞基因传递中常用的电穿孔技术和流体力学注射法等物理方法以及如何实现其优化的转染率.
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经门静脉高通量注射裸DNA FasL质粒导入大鼠肝脏表达的实验研究
目的 建立经门静脉高通量注射将裸DNA质粒导入大鼠肝脏表达的实验方法,观察FasL在肝脏的表达、对肝损伤及肝功能生化指标变化的影响.方法 对大鼠经门静脉高通量注射质粒pDC316-LacZ,观察LacZ基因在大鼠肝脏的表达情况.将11只大鼠随机分为实验组6只(注射pDC315-rFasL),对照组5只(注射pDC316-LacZ),经门静脉高通量注射将大鼠FasL真核质粒导入大鼠肝脏.分别于术后第1、3～4、6天处死大鼠,术前、术后取血查ALT和AST,肝组织进行RT-PCR、Western印迹及常规HE染色和免疫组织化学实验.结果 经门静脉高通量注射了pDC316-LacZ的大鼠肝脏,可观察到蓝色沉淀物质在肝组织表达.经门静脉将FasL质粒导入大鼠肝脏,24 h后取肝组织通过RT-PCR和Western印迹实验证实FasL在肝脏中表达.免疫组织化学结果表明在术后实验组肝组织大量表达FasL.常规HE染色显示实验组术后肝小叶中肝细胞嗜酸性变及凋亡小体明显高于对照组.术后第1天实验组与对照组ALT、AST水平显著升高.第3～4天对照组恢复正常,但实验组于术后第6天才基本正常.结论 初步建立了门静脉高通量注射将裸DNA质粒导入大鼠肝脏表达的实验方法.肝细胞表达FasL可能成为效应细胞致邻近肝细胞凋亡.
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基因治疗中非病毒载体研究进展
肿瘤基因治疗的大挑战之一是研制安全有效的基因转染载体.在基因转染载体中,非病毒载体以其低毒性、低免疫原性、低致瘤性及易于制备等优点具有良好的应用前景.本文以裸DNA、阳离子脂质体、阳离子多聚物聚乙烯亚胺及壳聚糖、分子偶联体等为代表,从其性质、介导转染的机制、影响转染效率的因素等方面阐述非病毒载体在肿瘤基因治疗方面的研究进展.
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IFN-β裸DNA对人脑胶质瘤生长的抑制作用
目的探讨β干扰素(IFN-β)基因对人脑胶质瘤生长的抑制作用,以及人IFN-β裸DNA治疗人脑胶质瘤的可行性.方法建立裸鼠SHG44胶质瘤模型,用脂质体包埋法将含IFN-β基因的真核表达载体(pSV2IFN β)注入裸鼠皮下SHG44脑胶质瘤,观察肿瘤生长情况并计算肿瘤体积,通过免疫组化、原位末端转移酶标记(TUNEL)染色以及瘤体坏死区计数检测,了解IFN-β基因对人脑胶质瘤生长的抑制作用.结果 IFN-β在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠皮下胶质瘤生长受到抑制,并诱导SHG44胶质瘤细胞凋亡.结论 IFN-β裸DNA能够抑制人脑胶质瘤生长,该实验为IFN-β基因治疗人脑胶质瘤的应用奠定了初步基础.
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联合应用angiostatinK(1-3)和endostatin裸DNA对人脑胶质瘤生长的抑制作用
目的:探讨联合应用angiostatinK(1-3){ASK(1-3)}和endostatin(ES)裸DNA对人脑胶质瘤生长的影响和作用特点.方法:在15只裸鼠皮下接种SHG44人脑胶质瘤细胞并分A,B和C组(n=5);在接种后第12日,A组:给予瘤体内注射20μL脂质体包裹的各5μg的pcDNA-S-ASK(1-3)和pcDNA-S-ES质粒;B组:瘤体内注射20μL脂质体包裹的10μg pcDNA 3.1质粒;C组:瘤体内注射20 μL无菌生理盐水;3 d后重复注射1次.每日定时观察肿瘤生长情况.40 d后处死裸鼠,检测和计算肿瘤体积、坏死率、血管数和抑瘤率.结果:A,B和C组肿瘤的终体积分别是4.416±1.88 cm3,8.034±1.85 cm3和8.056±1.91 cm3,A组抑瘤率为46.8%;A,B和C组肿瘤的平均坏死率分别为39.12±7.35%,9.17±7.89%和9.21±7.48%,A与B或C组比较差异显著(P＜0.01),B,C组比较差异不显著(P＞0.05).3组的血管计数分别为3.92±1.89,11.8±2.04和12.0±2.21,A与B或C组比较差异显著(P＜0.01),B,C组比较差异不显著(P＞0.05).结论:联合应用ASK(1-3)和ES裸DNA可抑制胶质瘤的血管生成、导致其坏死增加,进而抑制肿瘤生长.其作用机制有待深入研究,该实验为胶质瘤的抗血管生成治疗研究奠定了初步基础.
关键词： 血管抑素K(1-3) 内皮抑素 神经胶质瘤 裸DNA 治疗
