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鼠疫耶尔森菌DNA标识序列的鉴定及其应用研究
目的确定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,以用于鼠疫耶尔森菌的快速检测和鉴定.方法通过芯片比较基因组杂交和PCR验证,鉴定鼠疫耶尔森菌DNA标识序列,针对标识序列设计特定的PCR引物.结果鼠疫耶尔森菌基因组中存在3个区段,共28条基因,均是鼠疫耶尔森菌DNA标识序列.针对其中3条基因设计PCR引物,能特异性扩增出鼠疫耶尔森菌,与来自其他非鼠疫耶尔森菌的DNA无交叉反应.结论鼠疫耶尔森菌存在DNA标识序列,并能用于鼠疫耶尔森菌的快速检测与鉴定.
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鼠疫耶尔森菌特异基因扩增引物应用于鼠疫菌的鉴定研究
目的 研究一种快速鉴定鼠疫菌的PCR方法.方法 选用针对鼠疫菌特异序列的6对引物进行PCR扩增,以其它近缘的肠道致病菌做对照,并测序比较鉴定.结果 鼠疫菌均能扩出预期产物,而其他近缘的肠道致病菌菌株均不能扩出预期产物.结论 这些引物具有较高的特异性,可迅速、有效地鉴定鼠疫菌,并与其它近缘的肠道致病菌相鉴别.
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荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究
目的利用LightCycler建立一种简便、特异的荧光定量PCR检测方法,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速检测.方法采用SYBR Green I随机掺入法,以Roche 试剂盒为标准,比较两公司的DNA聚合酶,用鼠疫菌31004建立荧光PCR反应体系;针对鼠疫耶尔森氏菌特异的染色体标识序列和质粒上F1抗原基因设计引物,检测其灵敏度和特异性,以盲测试验进行验证;在此基础上鉴定275株鼠疫耶尔森氏菌,并测试该法检测脏器污染模拟标本的灵敏度.结果建立以一个公司试剂为主较低成本的PCR反应体系;EV76的检测灵敏度可达每反应体系1.6个菌;检测我国18个生态型共计275株鼠疫耶尔森氏菌及28株非鼠疫菌株的PCR扩增结果表明,鼠疫菌株均出现特异的扩增结果,28株对照菌株均为阴性;肝、脾、肺模拟标本检测灵敏度可达每反应体系4 000个菌.结论该方法对于检测鼠疫耶尔森氏菌具有简便、快捷、高敏感性和特异性的特点,适用于鼠疫紧急疫情时的快速诊断和疫源地监测.
关键词： 鼠疫耶尔森氏菌 荧光定量PCR 标识序列 LightCycler
