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人MAGE-12基因的克隆与序列分析
目的克隆人MAGE-12基因并测序.方法从人肺癌组织中提取mRNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-12基因片段,对其进行PvuⅡ酶切鉴定;将扩增片段克隆于pGEM-T easy载体中,转化JM109菌;进行蓝白筛选后,运用pGEM-T easy质粒的T7/SP6作为引物对重组子鉴定,并进行DNA测序.结果 PCR扩增得到944bp的基因片段,经PvuⅡ酶切初步证实为MAGE-12基因;阳性克隆经筛选鉴定连接有目的基因;目的基因测序结果与GenBank比较,结果完全相同,表明靶基因成功插入pGEM-T easy.结论成功克隆MAGE-12基因,为MAGE-12用于肿瘤的生物治疗做出准备工作.
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MAGE-12的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位肽的预测及其三维结构构建
[目的]从理论上分析预测肿瘤抗原MAGE- 12(melanoma antigen- 12)的HLA-A2(histocompatility leukocyte antigen-A2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位肽并构建其三维结构.[方法]以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CTL表位预测方法.[结果]预测出的MAGE-12的表位中有4个符合HLA-A2限制性CTL表位要求.[结论]预测出的4个HLA-A2限制性CTL表位为MAGE-12的表位的可能性较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究.
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MAGE-12的新B细胞表位抗原肽的设计、合成及免疫原性研究
[目的]设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其免疫原性.[方法]在预测MAGE-12的B细胞表位序列为LEQRSQHCKPEE(3～14)、MAGE-1282-93(QSDEGSSNEEQE)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体.[结果]免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体.[结论]证明所预测的表位LEQRSQHCKPEE(3～14)为MAGE-12的新B细胞表位.
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人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体增效作用研究
目的:研究人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体的增效作用.方法:将C-57BL/6小鼠随机分为对照组、MAP组、人参总皂苷组,MAP组在预测MAGE-12的B细胞表位序列为QSDEGSSNEEQE(82-93)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体.人参总皂苷组在MAP抗原肽免疫小鼠的同时,人参总皂苷灌胃给药,0.2mL/20g,每日1次.结果:免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且人参总皂苷组抗体效价高于MAP组,达1∶256.结论:人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体有增效作用.
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MAGE-12的新B细胞表位抗原性研究
目的:在已设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位基础上对其进行鉴定.方法:在预测MAGE-12的B细胞表位序列为LEQRSQHCKPEE(3～14)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体.结果:免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,抗体效价高达1:256,证明为MAGE-12抗原肽的特异性抗体. 结论:证明所预测的表位LEQRSQHCKPEE(3～14)为MAGE-12的B细胞新表位,具有抗原特异性.
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肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位4分支多重抗原肽的合成及鉴定
目的设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定.方法在预测MAGE-12的B细胞表位序列为QSDEGSSNEEQE(82-93)的基础上,采用4分支多重抗原肽结构合成抗原肽,免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA实验及免疫组化实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体.结果免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,抗体滴度可达1∶64.结论证明所预测的表位为MAGE-12的B细胞表位.
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MAGE-12 mRNA在肺癌中的表达及其意义
目的探讨肺癌组织中MAGE-12 mRNA的表达及其意义.方法采用RT-PCR技术,检测了MAGE-12在50例临床病人肺癌标本中mRNA水平的表达.结果 50例临床肺癌标本中有17例表达(17/50,34%),且肺鳞癌(15/33,45.5%)与肺腺癌(2/17,11.8%)有显著差异(P<0.05).结论 MAGE-12基因在肺癌有较高的表达率,基于MAGE-12基因及其产物作为新的疫苗可能是一个有前途的治疗肺癌的免疫治疗方法.
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肿瘤抗原MAGE-12的表位及二级结构预测
目的预测肿瘤抗原MAGE-12的a-螺旋二级结构、B细胞表位和MAGE-12的HLA-A2限制性CTL表位.方法用Garnier Robson和Chou-Fasman方案预测肿瘤抗原MAGE-12的α-螺旋二级结构;用Kyte-Doolittle亲水方案预测肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位;用简单基序(simple motifs)和延展基序(extended motifs)对肿瘤抗原MAGE-12的HLA-A2限制性CTL表位进行预测.结果 MAGE-12可能含有较多的α-螺旋;B细胞识别的表位可能在82～93残基(QSDEGSSNEE-QE)或附近和3～14残基(LEQRSQHCKPEE)或附近;发现1个HLA-A2限制性CTL表位为FLWGPRALV(271～279).结论用亲水性方案和基序法预测肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位和MAGE-12的HLA-A2限制性CTI表位,为实验方法探索MAGE-12的表位提供有用线索.
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MAGE-12蛋白在肺癌中的表达及其意义
目的探讨肺癌组织中MAGE-12的蛋白表达、定位及其与临床病理分型之间的关系.方法采用免疫组化方法检测17例肺癌标本中MAGE-12蛋白表达及细胞内定位.结果17例中11例蛋白水平表达,表达率为64.7%,其中15例肺鳞癌中10例表达MAGE-12蛋白,2例肺腺癌中1例表达.11例蛋白水平表达的样本及1例已知阳性表达MAGE-12的LB373-MEL细胞株均定位于细胞质,反应呈棕黄色.结论MAGE-12蛋白在肺癌有较高的表达率,基于MAGE-12基因及其蛋白作为新的疫苗可能是一个有前途的治疗肺癌的免疫治疗方法.
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MAGE-12 B细胞表位联合应用的免疫原性研究
目的 设计合成肿瘤抗原MAGE-12的B细胞表位并研究其表位联合应用的免疫原性.方法 在MAGE-12的B细胞表位序列MAGE-12_(3-14)(LEQRSQHCKPEE)、MAGE-12_(82-93)(QSDEGSSNEEQE)的基础上,采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽后分MAGE-12_(3-14)组、MAGE-12_(82-93)组、MAGE-12_(3-14)联合MAGE-12_(82-93)组,分别以MAGE-12_(3-14)、MAGE-12_(82-93)、MAGE-12_(3-14)联合MAGE-12_(83-93)抗原肽免疫C-57BL/6小鼠,产生多克隆抗体,应用ELISA和免疫组化实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体.结果 免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体,且多表位抗原肽联合使用组抗体效价高于单表位抗原肽组产生的抗体效价.结论 证明MAGE-12的B细胞多表位抗原肽联合使用的免疫原性强于单个B细胞表位抗原肽的免疫原性.
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肿瘤抗原MAGE-12新的HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测
目的预测黑色素瘤抗原MAGE-12的HLA-A2限制性CTL表位.方法采用SYFPEITHI超基序远程预测系统与量化基序多项式法、延展基序联合应用,筛选MAGE-12抗原HLA-A0201限制性CTL表位.结果共预测出5个MAGE-12抗原HLA-A2限制性CTL表位.结论超基序法与量化基序,延展基序联合应用可以提高预测效率,为实验方法探索MAGE-12的表位提供有用线索.
关键词： 肿瘤抗原 MAGE-12 细胞毒性T淋巴细胞表位 预测
