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应用寡核苷酸芯片技术检测IGF-Ⅱ基因SNP方法的建立及其在运动能力相关基因研究中的应用
目的:杰出运动能力受控于基因与环境的相互作用,由多基因控制.寡核苷酸芯片技术是近年出现的一类基因结构分析技术,此项技术出现使基因突变检测更加程序化和规模化.本研究选取与运动能力有关的胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因为该方法学及其应用研究的突破点,尝试把DNA 芯片技术引入体育科研.方法:寡核苷酸芯片技术.结果:(1)IGF-Ⅱ基因SNP的分析中,基因组DNA采用1∶20的套式扩增,杂交液中加氯化四甲氨,杂交温度42℃,杂交时间60 min效果好;(2)国家自行车队的6名队员基因型相同.结果表明:(1)PCR产物可以直接用于检测突变,不对称PCR产物杂交阳性点信号更强;(2)由碱基组成计算的Tm值与其实际的Tm值有一定的差距,会影响杂交温度;(3)有效的DNA载波片的处理效果直接影响杂交结果,是芯片制备中关键环节之一;(4)IGF-Ⅱ是研究运动能力相关基因的一个很好的候选基因.
关键词： 寡核苷酸芯片 胰岛素样生长因子-Ⅱ基因 单核苷酸基因多态性 运动能力 -
外周血有核细胞胰岛素样生长因子ⅡmRNA检测对肝癌的诊断价值
目的:分析肝癌患者外周血有核细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因片段,观察它在肝癌诊断和判断预后中的临床价值.方法:从肝病患者外周血中制备有核细胞总RNA,经随机引物和逆转录酶合成IG F-Ⅱ-cDNA,分别以巢式聚合酶链反应扩增IGF-Ⅱ基因片段,分析肝病患者外周血中IGF-Ⅱ基因标志物检测的临床价值.结果:(1)肝癌患者外周血中IGF-Ⅱ的检出率为34.2%,明显高于其它肝病、肝外肿瘤和正常对照组(P<0.05).在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中,IGF-Ⅱ基因片段阳性率分别为14.3%、19.4%和45.5%;(2)IGF-Ⅱ基因片段的检出率在肝内有无转移的肝癌组间存在明显差异(P<0.05),伴有肝外远处转移肝癌中,IGF-Ⅱ基因片段阳性率为100%.结论:外周血中IGF-Ⅱ基因标志物有助于肝癌的诊断、肝癌远处转移的判断以及肝癌术后复发的监测.
