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云南大理某农村猪星状病毒分子流行病学调查
目的 了解云南大理某农村猪群中星状病毒(astrovirus,AstV)感染情况,为AstV的防控提供理论依据.方法 利用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术,对云南大理某农村采集的42份猪粪便样品进行PAstV799 bp基因部分片段扩增、克隆,并测序;利用NCBI BLAST进行数据库比对,Mega 4.1软件进行序列同源性比较和系统进化树构建.结果 Trizol试剂提取42份猪粪便样品上清总RNA,经RT-nested PCR扩增,5份样品可见799 bp的目的基因片段,阳性率为11.90％;PAstV 799 bp片段同源性分析显示,5个毒株与PAstV-1、2、3、4和5的同源性为46.3％ ～ 87.9％,与PAstV-4的同源性高,为75.5％ ～ 87.9％;PAstV 799 bp片段的系统进化分析显示,分离的毒株属于PAstV-4,同源性为80.0％～ 99.5％.结论 云南省PAstV-4流行病学调查将有利于中国AstV的预防及治疗.
关键词： 猪星状病毒 逆转录巢式聚合酶链反应 流行病学 -
纳米免疫磁珠联合RT-nest-PCR法检测胰腺癌外周血微转移的敏感度及特异性
目的: 通过胰腺癌外周血微转移模型,探讨纳米免疫磁珠联合RT-nest-PCR检测微转移的敏感度及特异性.方法: 将胰腺癌细胞PANC-1稀释分别加入到正常人外周血单核细胞中,再按比例加入Fcλ非特异性受体阻断剂以及上皮细胞EP-CAM抗体,4 ℃下混匀孵育30 min,经分选柱阳性分选后提取RNA,RT-nest-PCR法检测肿瘤基因人端粒酶亚单位(h-TERT)和癌胚抗原(CEA).结果: 联合纳米免疫磁珠和RT-nest-PCR,平均1×107外周血单核细胞可以检测到1个肿瘤细胞.10例良性疾病对照组均未见表达.结论: 免疫磁珠联合RT-nest-PCR是敏感度及特异性都较高的检测微转移的方法,可显著提高肿瘤微转移的早期检测率.
关键词： 胰腺癌 微转移 免疫磁珠 逆转录巢式聚合酶链反应 -
外周血有核细胞胰岛素样生长因子ⅡmRNA检测对肝癌的诊断价值
目的:分析肝癌患者外周血有核细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因片段,观察它在肝癌诊断和判断预后中的临床价值.方法:从肝病患者外周血中制备有核细胞总RNA,经随机引物和逆转录酶合成IG F-Ⅱ-cDNA,分别以巢式聚合酶链反应扩增IGF-Ⅱ基因片段,分析肝病患者外周血中IGF-Ⅱ基因标志物检测的临床价值.结果:(1)肝癌患者外周血中IGF-Ⅱ的检出率为34.2%,明显高于其它肝病、肝外肿瘤和正常对照组(P<0.05).在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中,IGF-Ⅱ基因片段阳性率分别为14.3%、19.4%和45.5%;(2)IGF-Ⅱ基因片段的检出率在肝内有无转移的肝癌组间存在明显差异(P<0.05),伴有肝外远处转移肝癌中,IGF-Ⅱ基因片段阳性率为100%.结论:外周血中IGF-Ⅱ基因标志物有助于肝癌的诊断、肝癌远处转移的判断以及肝癌术后复发的监测.
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传染性非典型肺炎疑似病例实验室快速诊断的初探
目的对传染性非典型肺炎(SARS)疑似病例进行实验室快速诊断.方法采集SARS疑似病例血清,先对标本进行病毒颗粒浓缩,再用特异性引物进行Nested RT-PCR,检测SARS冠状病毒RNA;另外,采用免疫荧光法进一步同时检测血清中9种呼吸道病原体(嗜肺军团菌血清型1、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒)IgM抗体.结果对21例SARS疑似病例血清进行Nested RT-PCR,结果均未扩增出目标条带.进一步对21例患者血清进行同步检测血清中9种病原体IgM抗体,共有14例患者甲型流感病毒IgM抗体阳性,阳性率为67%.结论对SARS疑似病例进行SARS冠状病毒RNA和其他9种呼吸道病原体IgM抗体检测是实用可行的.
关键词： SARS冠状病毒 逆转录巢式聚合酶链反应 间接免疫荧光 -
HIV感染者中ELISA法与RT-nPCR法检测HCV的比较
目的 比较酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测HIV感染者血清中抗-HCV与HCV RNA的结果是否有差异.方法 采用ELISA法和RTn-PCR法对300例HIV感染者的血清进行抗-HCV与HCV RNA检测.结果 在300份血清标本中,抗-HCV与HCV RNA均为阳性者114份,占38％ (114/300);抗-HCV阴性、HCV RNA阳性者41份,占13.67％ (41/300)；抗-HCV阳性、HCV RNA阴性者32份,占10.67％ (32/300)；两者均阴性113份,占37.67％ (113/300)；两种方法检测结果的一致率为75.67％,两种方法结果的差异无统计学意义(x2=1.11,P＞0.05).结论 ELISA法与RTn-PCR法在HIV感染者中诊断丙型肝炎其结果差异无统计学意义,但二者联合检测可提高检出率,在HIV感染者中存在免疫抑制造成血清学结果假阴性率较高,因此,对HIV感染者中抗-HCV阴性者应进行HCV RNA检测,降低漏诊率.
关键词： HIV 丙型肝炎 酶联免疫吸附试验 逆转录巢式聚合酶链反应
