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蛇毒蛋白与血小板血栓形成
多种蛇毒蛋白具有与血小板表面整合素、膜糖蛋白I b(GP I b)或血管性血友病因子(VWF)相互作用而影响血栓形成的功能.影响血小板血栓形成的蛇毒蛋白目前分为3类:去整合素、VWF调节蛇毒蛋白及GPI b结合蛋白.其中,去整合素具有高效抑制血小板聚集的功能；VWF调节蛇毒蛋白具有体外介导VWF依赖型血小板聚集的功能；而GPI b结合蛇毒蛋白又分为2组:GPI b激动剂和GPI b拮抗剂,分别起诱导血小板聚集与抑制VWF介导的血小板聚集的功能.本文将对上述影响血小板血栓形成的蛇毒蛋白的结构、功能及其在临床上的研究与应用进行综述.
关键词： 蛇毒蛋白 血小板血栓形成 去整合素 VWF-调节蛋白 GP I b结合蛋白 -
血小板膜糖蛋白GPIb受体拮抗剂的研究进展
血小板膜糖蛋白GPIb受体与血管性血友因子(vWF)相互作用是血小板在血管损伤部位发生黏附和动脉血栓形成的始动环节,同时也是高剪切力下血小板在血管病理性狭窄部位发生黏附和聚集的重要机制,因此,GPIb受体被认为是抗血栓治疗的重要靶点.GPIb受体拮抗剂通过阻GPIb复合物与vWF相互作用而抑制血小板黏附和聚集,达到抗血小板血栓形成的目的,对于心、脑血管疾病防治有着重要的意义.本文综述当前一些GPIb受体拮抗剂研究进展,将要探讨的有:6B4-Fab、SZ2,属于抗GPIbα鼠源单克隆抗体;RAM.1,属于抗GPIbβ的鼠源单克隆抗体;Agkisacucetin、Jerdonibitin、Rhodocetin-αβ,均属蛇毒蛋白.
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人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段噬菌体文库的初建
目的 构建人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体单链可变区片段(scFv)噬菌体文库.方法 采用Trizol试剂提取尖吻蝮蛇咬伤后恢复期患者的外周血淋巴细胞的总RNA,用Oligotex@mRNA Mini Kits纯化获得总mRNA,逆转录合成总cDNA,针对人抗体轻链和重链可变区基因设计一系列特异性引物,以合成的总cDNA为模板,扩增得到抗体轻链和重链可变区基因库,再通过重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)将轻链和重链拼接得到scFv文库;将scFv基因双酶切后,插入T7噬菌体骨架进行包装,以尖吻蝮蛇蛇毒蛋白抗原进行4轮淘选,建立蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,采用噬斑法检测scFv噬菌体文库滴度并进行PCR及测序鉴定.结果 成功地将轻链和重链可变区基因库混合拼接得到scFv文库;经4轮淘选,蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库滴度为6.0×1014PFU/ml,抗体基因在噬菌体中表达的阳性率达50％以上,表达的scFv片段均为轻链和重链的杂合体,可较好的重现可变区的多样性.结论 已成功构建了人源尖吻蝮蛇毒蛋白抗体scFv噬菌体文库,为下一步噬菌体文库的克隆构建和筛选奠定了基础.
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尖吻蝮蛇毒PCA对血管内皮细胞的影响
目的：观察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂（PCA）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）活性及表达组织因子（TF）、血管性血友病因子（ vWF）的影响，探讨PCA对血栓性疾病的防治机制。方法：常规培养HUVEC，MTT法检测细胞活性，ELISA检测细胞上清液中TF和vWF的含量，Western blot法检测细胞内TF蛋白表达，RT－PCR法检测细胞内TF和vWF mRNA的表达。结果：低浓度的PCA（＜2．5 mg／L）对HUVEC活性和形态没有明显影响，但可明显减轻LPS引起的HUVEC生长抑制和形态改变；高浓度的PCA（＞2．5 mg／L）可显著抑制HUVEC存活率并引起其形态改变。 PCA实验组与对照组比较，其上清中TF和vWF的含量、细胞内TF及vWF mRNA的表达无明显变化，而LPS损伤组各个细胞因子及相关蛋白的表达量明显增加（ P＜0．05）；对于PCA＋LPS组，各指标无明显变化。结论：低浓度PCA在一定程度上可减轻LPS引起的HUVEC损伤；PCA可拮抗内毒素引起HUVEC的TF和vWF的表达；PCA可能通过这种拮抗作用来防治血栓性疾病。
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蝮蛇蛇毒磷脂酶A2肌肉毒素
肌肉坏死是毒蛇咬伤引起的局部症状,它会引起永久性组织损伤、肢体残废甚至截肢.在过去的几年中,人们对蛇毒蛋白中引起肌肉坏死的成分及其作用模式进行了广泛研究.一些来源于蝮蛇的肌肉毒素被分离和定性,并在研究它们的作用机理和肌肉坏死的病理过程方面取得了一些进展[1～3].所有这些肌肉毒素都具有磷脂酶A2(PLA2)结构,但有的不具酶活性.本文对蝮蛇肌肉毒素作简要介绍.
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蛇毒蛋白基因的大肠杆菌表达研究进展
蛇毒是多种生物活性蛋白和多肽的混合物,由于蛇毒在基础医学和临床上的特殊作用以及天然蛇毒蛋白获取方法的局限性,采用生物工程方法规模化生产高纯度的蛇毒蛋白已成为当前及今后的研究方向.该文就蛇毒蛋白基因在大肠杆茵中表达的研究近况进行介绍.
