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埃及伊蚊中肠上皮细胞的原代培养和细胞的持续培养
目的探讨蚊虫中肠上皮细胞的培养,建立细胞的原代培养和细胞持续培养. 方法用含抗生素的10%蔗糖水喂养新羽化出的埃及伊蚊成蚊,3 d后,在无菌的条件下解剖中肠,用含抗生素的平衡盐溶液洗3次,放入Grace's培养基中(含有7%小牛血清,0.5%庆大霉素,1 mg/ml抗酵母菌素和6 μl/ml 复合维生素),25℃培养箱中培养. 结果培养3 d后,95%的细胞生长良好,7 d后,大约25%的细胞死亡.第3 d的细胞死亡率明显低于以后的任何时间(P<0.05),从第7 d到35 d细胞死亡率差异无显著性(P>0.05).成功地建立起中肠上皮细胞的原代培养并能持续存活40多天,保持细胞的连续培养. 结论所发展的埃及伊蚊中肠上皮细胞的原代培养和细胞的持续培养的方法是成功的.
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2009-2014年云南省登革热流行病学调查与分析
目的 分析云南省2009-2014年登革热流行特征,为登革热防控措施提供依据. 方法 收集云南省2009-2014年法定传染病报告系统中的登革热数据资料,采用描述性流行病学方法统计分析;采用RT-PCR检测登革病毒血清型和采用蚊虫幼虫采集法调查登革热媒介埃及伊蚊的分布. 结果 2009-2014年云南省共报告登革热病例2 040例,其中本地感染病例1 579例,输入病例461例;在输入病例中,缅甸和老挝输入病例比例高(占79.83％);全年均有病例报告,8～11月为高发季节;病例主要集中于云南边境地区的西双版纳州(1 382例,占67.75％)和德宏州(562例,占27.55％);男女比例为1.05∶1,各年龄组均有发病,以青壮年为主,20～59岁病例1 538例(占75.39％),职业以商业服务、家务及待业、农民和学生为主,分别为523例(占25.64％)、224例(占10.98％)214例(占10.49)和200例(占9.80％).对景洪市307份血清用RT-PCR和NS1抗原进行检测,两种方法吻合率在70％以上,NS1抗原检测方法敏感度为86.39％,特异度为57.76％;对瑞丽市73份血清用一步法实时荧光RT-PCR检测进行复核,NS1抗原检测方法敏感度为100％,特异度为91.67％;4个登革病毒血清型在云南均有发现,其中西双版纳州景洪市以登革病毒血清型Ⅲ型为主(99.50％),德宏州瑞丽市以Ⅰ型为主(72.00％);白纹伊蚊广泛分布,埃及伊蚊分布区扩大到9个边境县市. 结论 云南省登革热流行势态较为严峻,周边缅甸和老挝输入病例数逐年增加,媒介埃及伊蚊分布区域不断扩大,建议进一步加强云南边境地区登革热监测和媒介控制工作.
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除虫脲对登革热媒介伊蚊拟除虫菊酯类抗性种群的作用效果研究
目的 了解除虫脲对登革热媒介埃及伊蚊和白纹伊蚊的作用效果,为蚊虫抗药性治理和蚊媒控制提供依据.方法 用WHO推荐的昆虫生长调节剂的抗药性测定方法,以采自景洪市登革热疫区的埃及伊蚊和白纹伊蚊及实验室敏感品系为研究对象,研究除虫脲对这2种伊蚊的作用效果及其特点;用SPSS 24.0软件进行概率回归分析,得到除虫脲对伊蚊敏感品系和抗性种群的半数抑制剂量(IE50),计算抗性倍数;通过观察不同浓度除虫脲作用下伊蚊的虫态构成及死亡情况,分析除虫脲对伊蚊的作用特点.结果 景洪市埃及伊蚊和白纹伊蚊拟除虫菊酯类抗性种群对除虫脲的IE50及95％CI分别为0.00233(0.00198～0.00312)和0.00253(0.00216～0.00289)μg/ml,其抗性倍数分别为1.77和1.71倍,属于敏感水平,除虫脲与拟除虫菊酯类药物无交互抗性;使用除虫脲后,埃及伊蚊和白纹伊蚊的死亡高峰均在第4～6天,表明与常用的化学杀虫剂比较,除虫脲致死作用比较缓慢;不同浓度除虫脲对蚊虫作用效果不同,低浓度主要在成蚊阶段死亡,高浓度均出现蛹和/或幼虫死亡.结论 景洪市埃及伊蚊和白纹伊蚊抗性种群对除虫脲均敏感,推荐使用剂量为0.006μg/ml,但其致死作用比较缓慢,适用于蚊虫的抗性治理和可持续控制.
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云南省边境地区2016年登革热媒介监测结果分析
目的 调查云南省边境地区登革热媒介分布、季节消长及其孳生环境情况,为制定登革热媒介控制措施提供科学依据.方法 2016年在云南省17个边境县(市)的蚊虫孳生地捞捕蚊幼虫,记录孳生容器类型,带回实验室饲养至4龄蚊幼虫进行鉴定;计算布雷图指数(BI)、容器指数(CI)及房屋指数(HI),利用SPSS 17.0软件录入2016年17个监测县(市)统计的暂时性积水容器和永久性积水容器的CI数据,通过两独立样本t检验进行比较.结果 2016年8月BI、CI和HI高,分别为9.45、4.15％和6.65％.蚊幼虫孳生地中永久性容器和暂时性容器的CI差异无统计学意义(t=-1.391,P=0.174),17个边境县(市)均有白纹伊蚊分布,其中耿马、景洪、陇川、勐腊、瑞丽、盈江和勐海县(市)有埃及伊蚊分布.结论 云南省边境地区仍存在登革热疫情暴发的风险,应继续加强蚊媒监测和控制.
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两种重要登革热媒介蚊虫的种间竞争研究
目的了解白纹伊蚊和埃及伊蚊的种间关系.方法在温度25～28℃、RH 65%～80%、光周期(L:D)12:12的实验条件下,将两种伊蚊Ⅳ龄幼虫各100条混合饲养(亲代P0),用电动吸蚊器吸取各代成蚊约1 000只进行分类观察.结果在各代中,白纹伊蚊的种群数量大于埃及伊蚊,且随着传代次数的增加而增大,到子2代(P2)时,该混合群落中已经观察不到埃及伊蚊.结论白纹伊蚊和埃及伊蚊存在着激烈的种间竞争关系,并以白纹伊蚊优胜.
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泰国Kret岛埃及伊蚊控制合作研究Ⅱ.实验室及现场控制效果
目的:探讨埃及伊蚊现场控制措施.方法:在试验区根据不同种类结构的积水容器,分别采用微生物农药B.t.i.H-14缓释剂、1%双硫磷砂粒剂及食蚊鱼网斑花鱼将(Poceilia reticalata)3种措施,互相协调、配合使用.结果:试验区采用3种措施1个月后,布雷图指数下降47.62%,两个月后在雨季对照区布氏指数上升29.55%的情况下,试验区布氏指数下降达69.4%.结论:在埃及伊蚊的大面积现场控制中,根据积水容器的种类、结构情况,联合采用B.t.i.H-14缓释剂、1%双硫磷砂粒剂、食蚊鱼网斑花鱼将3种措施,可取得较好的防制效果.
关键词： 埃及伊蚊 B.t.i.H-14缓释剂 双硫磷砂粒剂 网斑花鱼 将 -
埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道3'端cDNA的克隆及序列分析
目的 扩增埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3'末端,并对其核苷酸序列进行分析.方法 提取埃及伊蚊雌蚊总RNA,以Trsa为反转录引物反转录成单链cDNA,继而设计阳性与阴性对照,采用巢式聚合酶链反应(PCR)和快速扩增cDNA 3'末端(3'RACE)技术,对埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3'末端进行PCR扩增、克隆与测序.结果 获得钠离子通道基因的3'端核苷酸序列共809 bp,包括编码区和非编码区poly(A)尾,编码区共编码208个氨基酸.相似性分析结果 显示编码区氨基酸序列与家蝇钠离子通道基因3'端氨基酸序列相似性为65%左右.结论 成功获得埃及伊蚊钠离子通道基因3'端,为进一步研究该基因的分子生物学特性奠定了基础.
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不同地理株埃及伊蚊经口接种登革2型病毒的感染性研究
目的研究海南、广东、台湾和印尼Baro等4个地理株埃及伊蚊对登革2型病毒的感染情况.方法分别用鼠血和猪血配制不同病毒滴度的病毒混悬液经口接种埃及伊蚊,间接免疫荧光检测蚊脑液病毒抗原.结果用鼠血病毒混悬液时,印尼Baro株对登革2型病毒的感染率与海南株、台湾株的感染率差异有显著性(海南株:P=0.007 9＜0.01;台湾株: P=0.011 6＜0.05),与广东株的感染率差异无显著性(P＞0. 05),随着病毒滴度的下降,各株埃及伊蚊对病毒的感染率呈明显下降趋势;鼠血和猪血各株饱血雌蚊经口接种登革2型病毒的感染率差异无统计学意义(χ2=1.632 0, P=0.201 4＞0.05).结论不同地理株埃及伊蚊对登革2型病毒易感性存在差异.
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滇西南地区埃及伊蚊种群微卫星标记筛选研究
目的 研究滇西南地区埃及伊蚊种群遗传学特征,针对该地区的埃及伊蚊种群筛选新的微卫星位点.方法 从美国国立生物技术信息中心GenBank数据库中下载埃及伊蚊全基因组数据,利用Tandem Repeats Finder软件查找全基因组中的微卫星位点,选择重复单位为2～4 bp且重复次数<30的微卫星位点,对其侧链进行BLAST比对,选择在基因组中单拷贝的位点设计引物,再对引物进行BLAST比对,选择扩增产物为单拷贝的引物进行相关筛选.结果 从17个全基因组中共获得80条微卫星序列,并成功设计出11对多态性引物,核心序列包括5对2碱基重复,5对3碱基重复以及1对4碱基重复,共有98个等位基因,平均每对引物有9个等位基因,观察杂合度平均值为(0.394±0.026).结论 设计引物可稳定地扩增出目标条带,且多态性较高,可以用于埃及伊蚊的种群遗传学研究.
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埃及伊蚊蚊体元素测定
目的:测定埃及伊蚊蚊体的6种微量元素(钙、锌、铁、铝、铅、锶).方法:等离子原子发射光谱分析技术.结果:蚊体中各元素的含量随蚊虫的发育而明显变化,并随其不同生长期而有明显消长趋势,具有非常明显的差异.结论:唯Fe元素明显升高,其余5种元素均明显降低.
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海南省埃及伊蚊和白纹伊蚊对常用杀虫剂的敏感性测定
目的 了解海南省原登革热流行区埃及伊蚊和白纹伊蚊对常用杀虫剂的敏感性.方法 采用幼虫浸渍法,测定蚊虫对常用杀虫剂的抗性系数.结果 埃及伊蚊对溴氰菊酯抗性系数为2.04～2.82,而三亚市埃及伊蚊对高效氯氰菊酯的抗性系数为3.76.白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性系数为2.40～3.60,而海口市白纹伊蚊对仲丁威和残杀威抗性系数分别为2.63和2.07.结论 海南省原登革热流行区埃及伊蚊和白纹伊蚊对供试杀虫剂敏感性下降.
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云南省瑞丽市埃及伊蚊和白纹伊蚊对常用 杀虫剂的抗药性调查
目的 掌握云南省瑞丽市埃及伊蚊和白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为登革热媒介伊蚊综合治理提供依据.方法 于2016年6-9月分别从云南省瑞丽市城区和姐告口岸采集埃及伊蚊和白纹伊蚊蛹或幼虫,实验室繁殖至子一代(F1),采用成蚊滤纸接触筒法,测定其对常用杀虫剂的抗药性,判定其抗性程度.结果 瑞丽市城区埃及伊蚊对0.25%氯菊酯、0.03%氯氟氰菊酯、8.00%顺式氯氰菊酯、0.80%马拉硫磷、0.25%杀螟硫磷、0.10%残杀威和4.00%DDT的24 h后校正死亡率分别为1.40%(抗性)、20.12%(抗性)、80.31%(可疑抗性)、100%(敏感)、100%(敏感)、100%(敏感)和14.93%(抗性);姐告口岸埃及伊蚊对上述杀虫剂24 h后校正死亡率分别为0.55%(抗性)、2.13%(抗性)、62.35%(抗性)、100%(敏感)、100%(敏感)、100%(敏感)和0(抗性).另外,瑞丽市城区白纹伊蚊对0.75%氯菊酯、1.80%氯氟氰菊酯、8.00%顺式氯氰菊酯、0.10%溴氰菊酯、3.00%高效氯氰菊酯、0.44%马拉硫磷、0.18%杀螟硫磷和0.06%残杀威的24 h后校正死亡率分别为8.11%(抗性)、83.85%(可疑抗性)、75.18%(抗性)、4.97%(抗性)、89.13%(可疑抗性)、99.23%(敏感)、100%(敏感)和100%(敏感).结论 瑞丽市埃及伊蚊和白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂均产生了不同程度的抗药性;对有机磷类和氨基甲酸酯类杀虫剂仍敏感.
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用随机扩增多态DNA(RAPD)技术研究不同地理株埃及伊蚊的分化
目的用RAPD技术对实验室饲养的广东、海南、台湾和印尼Baro等4个不同地理株的8只雌蚊进行随机扩增多态DNA分析.方法随机扩增多态性DNA(RAPD)技术.结果选用20个随机引物进行扩增,有8个引物表现清晰的RAPD谱带并呈显著多态性.UPGMA法构建的分子系统树表明埃及伊蚊4个地理株之间存在着一定程度的遗传分化.结论用RAPD方法可以区分不同地理株埃及伊蚊.
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云南省耿马县2016年居民区登革热媒介伊蚊孳生情况调查
目的 掌握云南省耿马县蚊虫密度高峰期登革热媒介伊蚊孳生情况,为制定虫媒传染病的防控策略提供科学依据.方法 2016年8月在耿马县6个居民区采用布雷图指数(BI)法调查各类型积水容器的伊蚊幼虫孳生和组成情况;采集阳性容器内的蚊幼虫进行鉴定;计算BI、房屋指数(HI)和容器指数(CI);运用SPSS 19.0软件处理数据,采用χ2检验、χ2分割法和Fisher精确概率法对不同调查点伊蚊构成及孳生容器阳性率进行比较.结果 共调查居民361户,阳性62户,积水容器1216个,阳性106个,总BI、HI和CI分别为29.36、17.17、8.72％,均以勐简乡高,分别为85.00、60.00和18.48％,其中4个调查点BI达登革热高暴发风险等级;积水容器和阳性容器数均以水桶多,分别为408和31个;轮胎伊蚊孳生阳性率高,达32.89％(显著水平α=0.004,P=0.002);孟定镇城区与清水河口岸伊蚊孳生构成差异无统计学意义(P=0.123).结论 耿马县存在登革热主要媒介埃及伊蚊和白纹伊蚊分布,特别是孟定镇城区和清水河口岸埃及伊蚊分布优势明显,且分布范围有扩大趋势;主要孳生容器以轮胎为主,其次为其他暂时性容器和废弃瓶罐等,在媒介生物控制中应以清除以上类型容器为主,辅以成蚊杀灭措施.
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埃及伊蚊蚊幼肠道cDNA合成研究
目的合成埃及伊蚊蚊幼肠道cDNA,为进一步构建伊蚊蚊幼肠道cDNA基因文库奠定基础.方法饲养埃及伊蚊,收集蚊幼肠道并提取mRNA,合成cDNA.结果成功地合成了埃及伊蚊蚊幼肠道cDNA 6μg,纯度达到A260/A2801.95,片段大于400 bp.结论使用Invitrogen Life technologies公司的FastTrack试剂盒和Copy Kit试剂盒成功地合成了高质量的cDNA,为伊蚊蚊幼肠道cDNA基因文库构建奠定了基础.
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景洪市登革热媒介伊蚊对吡丙醚的敏感性及其作用特点
目的 测定景洪市登革热媒介埃及伊蚊和白纹伊蚊幼虫对吡丙醚的敏感性,并观察吡丙醚在不同剂量下蚊虫的死亡特点,为当地蚊虫控制及抗性治理提供依据.方法 2015年10-11月,在景洪市登革热暴发期间,采集媒介伊蚊幼虫,用世界卫生组织推荐的昆虫生长调节剂抗药性测定方法,计算吡丙醚对蚊虫的半数抑制剂量(IE50),并以实验室敏感品系为对照,获得抗性倍数;同时,通过逐日观察不同药剂浓度下试虫的死亡率和死亡虫态构成,来分析吡丙醚对两种伊蚊的毒杀作用特点.结果 景洪市埃及伊蚊和白纹伊蚊种群幼虫对毗丙醚的IE50及其95％CI分别为0.024 47(0.022 09～0.027 07)和0.135 20(0.117 10～0.156 60)g/L,分别是敏感品系的0.85和13.44倍;景洪市的白纹伊蚊比埃及伊蚊对吡丙醚的耐受力高5.53倍.3龄试虫在接触不同浓度的吡丙醚后,其死亡高峰均在第4～6天;敏感品系的埃及伊蚊和白纹伊蚊死亡高峰分别在第4～5天和第4天;景洪种群的埃及伊蚊和白纹伊蚊死亡高峰较宽,在第4～6天.低浓度药物作用下的死亡虫态以畸形成蚊与蛹在羽化中死亡为主;当抑制率＞60％时,敏感品系开始持续出现蛹的死亡,且蛹的死亡比例随浓度增加而增大;景洪种群有波动.结论 景洪市埃及伊蚊对吡丙醚敏感,因其是该地区登革热的主要传播媒介,且主要分布在市区,可以在市区推广使用;尽管白纹伊蚊幼虫产生了中度抗性,但可与其他杀虫剂配合使用,以延缓抗性发展.因此,吡丙醚可应用于当地蚊虫控制及抗性治理,但应定期开展蚊虫抗药性监测工作,及时了解其抗性发展动态.
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高温处理不同龄期埃及伊蚊对其发育的影响
目的 研究水体高温处理不同阶段幼虫后对埃及伊蚊成虫体型、体重和性别比例的影响,探究水体高温对埃及伊蚊这些特征产生影响的关键龄期.方法 将不同龄期埃及伊蚊(卵期、1～4龄幼虫)置于36℃水浴中,使埃及伊蚊在水浴锅中度过一个龄期后,移至标准条件下[温度(25±1)℃,湿度(75±5)％]常规饲养,羽化为成虫后记录雌雄蚊数量,60℃烤箱中干燥15 min测量翅长及体重；同时将同批埃及伊蚊(分别按卵、1～4龄幼虫)置于饲养室常规饲养得到标准值.结果 高温作用2～4龄幼虫,其长成的雌蚊翅长明显小于正常值；2龄和4龄幼虫受高温作用后发育的雌蚊体重下降,而卵期、1龄和3龄体重下降不明显；3龄和4龄受高温作用后发育的成虫中雌蚊比例升高,雄∶雌分别为0.88和0.95,2龄幼虫则情况相反,雄∶雌=2.43∶1.结论 埃及伊蚊不同阶段受高温作用的影响不同,卵期和1龄幼虫受高温影响较小,2～4龄受高温影响较大,说明2龄雌性埃及伊蚊是发育的关键阶段,而3龄雄性埃及伊蚊是发育的关键阶段.
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埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因片段的克隆测序
目的:探讨我国登革热的重要媒介蚊种埃及伊蚊唾液中的抗凝血因子Xa基因.方法:用兼并引物PCR方法从我国的埃及伊蚊基因组DNA扩增抗凝血因子Xa基因片段,克隆入测序T载体进行测序.结果:扩增出抗凝血因子Xa基因片段长度约300bp,测序后发现与报道的埃及伊蚊的cDNA基因相应序列多了一段63bp内含子,并有几个碱基和氨基酸序列变化.结论:我国海南岛的埃及伊蚊抗凝血因子Xa基因有一定差异,可能对应的是一个新的基因型.
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广东省雷州市埃及伊蚊和白纹伊蚊分布现状调查
目的 掌握埃及伊蚊和白纹伊蚊在广东省雷州市的分布现状,评估其传播登革热和寨卡病毒病的风险.方法 2017年7-8月,利用遥感技术和地理信息系统定位,采用幼虫吸管法和诱蚊诱卵器法对广东省雷州市乌石、企水镇和沿海村落伊蚊的分布进行调查.结果 乌石镇调查了79处住宅和23艘渔船,共检出伊蚊阳性点34个,其中埃及伊蚊阳性点17个,白纹伊蚊阳性点14个,二者共生点3个;企水镇调查了55处住宅和28艘渔船,共检出伊蚊阳性点17个,其中埃及伊蚊阳性点4个,白纹伊蚊阳性点13个.流沙镇到纪家镇的15个沿海村落308处积水,未发现埃及伊蚊,检出伊蚊均为白纹伊蚊.埃及伊蚊多孳生于居民住宅和渔船的储水容器中,而白纹伊蚊主要孳生于室外容器和轮胎积水.结论 埃及伊蚊在雷州市仅分布于乌石和企水镇,并有逐渐减少的趋势;两镇的靠港大型木制渔船存在埃及伊蚊分布,是埃及伊蚊侵入的可能来源.
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云南省芒市埃及伊蚊分布调查
目的 了解埃及伊蚊在芒市的分布,为登革热媒介控制提供科学依据.方法 采用人工诱捕法对定点或不定点村寨进行成蚊采集,以了解当地白天成蚊种类组成及分布情况；对村内外的各类积水容器进行蚊幼虫采集,以观察当地蚊幼虫阳性容器指数、布雷图指数、房屋指数、千人指数情况.结果 在定点村寨,共捕获成蚊4种38只,其中白纹伊蚊18只(47.37％)；检查各类积水容器408个,伊蚊幼虫阳性积水容器7个,阳性容器指数为1.72,布雷图指数0.92,房屋指数1.23,千人指数12.26；在不定点村寨,共捕获成蚊4132只,其中埃及伊蚊7只(0.17％),白纹伊蚊2614只(63.26％)；野外竹林调查各类幼虫积水容器170个,其中阳性容器20个,阳性容器指数11.76；居民点共调查31户,幼虫各类积水容器152个,其中阳性积水容器9个,阳性容器指数5.92,布雷图指数6.12,房屋指数22.58,千人指数60.80.结论 首次在芒市发现埃及伊蚊分布,白纹伊蚊分布较广并属于当地的优势蚊种,建议有关部门加强登革热疫情及其媒介监测工作.
