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痛稳素和痛稳素(10～17)对孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2镇痛作用的影响
目的研究痛稳素及其碳末端八肽在小鼠脑内对孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2镇痛作用的影响.方法以固相多肽合成法合成了痛稳素及其碳末端八肽,侧脑室注射孤啡肽、痛稳素及其碳末端八肽,用辐射热甩尾法测定痛阈.结果孤啡肽可对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2的镇痛作用;痛稳素及其碳末端八肽不影响小鼠的基础痛阈,但可逆转孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2的镇痛作用.结论痛稳素及其碳末端八肽在脊髓以上水平可逆转孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2的镇痛作用.
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小鼠神经生长因子前导肽和人内吗啡肽-2融合基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:制备并鉴定携带小鼠神经生长因子前导肽(PN)和人内吗啡肽-2(EM-2)融合基因的重组非增殖型腺病毒.方法:PN-EM-2目的基因经酶切插入pAxCAwt载体,构建PN-EM-2-pAxCAwt重组黏粒,脂质体转染293细胞获取重组腺病毒.PCR鉴定后扩增不含野生型病毒的阳性克隆并纯化,采用TCID50法测定病毒滴度;体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,酶联免疫反应(EIA)法测定表达产物浓度.结果:融合基因序列正确,PCR可检测到401 bp的融合基因条带并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度为2.03×1010pfu/ml.NIH3T3细胞转染病毒后,细胞培养液内可检测到EM-2的表达,明显高于空转染及未转染细胞(P＜0.05),且随时间的延长,表达水平逐渐上升.结论:成功构建能够在非神经内分泌细胞内转基因表达成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,为进一步将其应用于慢性疼痛的基因治疗奠定了基础.
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内吗啡肽对小鼠树突状细胞免疫功能的影响
目的 研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2对小鼠骨髓来源树突状细胞表型和免疫功能的影响.方法 从7～8周龄的C57BL/6J小鼠提取骨髓前体细胞培养,经CD11c免疫磁珠分选,获得纯化的树突状细胞(dendritic cells,DC).未成熟DC用脂多糖或脂多糖+不同浓度内吗啡肽共培养,流式细胞术检测DC的表型;检测内吗啡肽对DC趋化性的影响.在DC和T淋巴细胞共培养的条件下,用氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入测定的方法检测T淋巴细胞的增殖能力.结果 内吗啡肽抑制DC的趋化性;与T淋巴细胞体外共培养时,经内吗啡肽-1或内吗啡肽-2处理的DC能抑制T淋巴细胞的增殖反应.上述内吗啡肽的作用都能被Mu阿片受体特异性拮抗剂CTOP翻转或部分翻转,提示内吗啡肽的作用是由Mu受体介导的.结论 内吗啡肽可通过作用于Mu阿片受体,改变树突状细胞的部分免疫功能,调节免疫反应.
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高效液相色谱法纯化内吗啡肽-2
内码啡肽-2是一种具有镇痛作用的四肽,其序列为Tyr-Pro-Phe-Phe-N H2.本论文使用高效液相色谱法对内啡肽-2进行分离纯化,先使用反相色谱进行纯化,得到纯度98％ 以上的内啡肽-2三氟乙酸溶液,再使用DEAE离子色谱除去三氟乙酸,得到纯度大于98％ 的醋酸型内啡肽-2.该方法简单,快捷,成本低,且可放大至生产规模.
