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亚临床甲状腺功能减退合并妊娠期糖尿病的临床研究
目的 观察亚临床甲状腺功能减退(SCH)合并妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血、胎盘中白细胞介素34(IL-34)、人成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)的表达差异,并探讨其临床意义.方法 将42例SCH合并GDM孕妇设为为GDM组,同时选择同期在我院进行健康体检的正常孕妇40例作为对照组.比较2组空腹血糖、空腹胰岛素、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、促甲状腺激素(TSH)、外周血和胎盘中的IL-34和FGF-21的水平,探讨GDM组患者IL-34和FGF-21与TSH的关系.结果 GDM组和对照组空腹血糖分别为(6.17±0.52),(4.34±0.25) mmol·L-1;空腹胰岛素分别为(91.83±16.76),(29.61±2.53)pmol·L-1;hs-CRP分别为(7.85±1.31),(1.02±0.19)mg·L-1;TSH分别为(5.94±1.32),(1.66±0.53)mlU·L-1;外周血IL-34分别为(85.47±13.04),(52.35±11.92) pg·mL-1;外周血FGF-21分别为(94.35±13.63),(68.09±9.55) ng·mL-1;胎盘组织中IL-34蛋白相对表达量分别为4.84±0.16和4.23±0.15;胎盘组织中FGF-21蛋白相对表达量分别为1.53±0.14和1.01±0.23,差异均有统计学意义(均P＜0.05).GDM组孕妇外周血IL-34、FGF-21与TSH均呈正相关(r=0.671,0.684,P＜0.05).结论 IL-34、FGF-21在SCH合并GDM孕妇的外周血、胎盘中表达较高,可能经多种途径积极参与SCH合并GDM孕妇的发病,并对此类孕妇有较高的预测价值.
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糖尿病候选药物FGF-21的研究进展
世界卫生组织的调查报告显示糖尿病是导致人类死亡的三大主要原因之一。糖尿病患者基数大、传统药物治疗专一性不足，因此高效、专一、副作用小的糖尿病药物成为药物研究的热点问题。人成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是由FGF基因家族成员编码的细胞生长因子，具有广泛的生物学活性。研究表明其可以独立于胰岛素摄取葡萄糖，并与胰岛素有协同作用；可以显著降低血糖及血脂水平，改善胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能。随着研究的深入，FGF-21将有望成为与胰岛素替代、竞争或联合用药的2型糖尿病治疗的一线药物。本文对FGF-21的结构、功能和现阶段研究进展分别进行了阐述。
关键词： 人成纤维细胞生长因子-21 糖尿病 研究进展 -
密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21在毕赤酵母中的表达
目的 在毕赤酵母中表达密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21(hFGF-21),为探讨hFGF-21在糖尿病治疗方面的作用奠定基础.方法 经密码子优化合成hFGF-21基因,构建表达载体pPICZαA-hFGF-21,电转化毕赤酵母GS115,斑点免疫印迹法筛选工程菌株,甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并对诱导条件进行优化.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确.筛选出5株阳性菌株,诱导上清经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约为25 000的目的 蛋白条带,目的 蛋白的表达量约为6 μg/L.Western blot显示该蛋白具有良好的反应原性.诱导96 h和培养液pH值为4.0时,目的 蛋白的表达量高,甲醇浓度对表达量无影响.结论 已成功构建了密码子优化的hFGF-21真核表达载体,并在毕赤酵母GS115中分泌表达了hFGF-21.
关键词： 人成纤维细胞生长因子-21 毕赤酵母 电转化 表达 -
携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定
目的 包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力.方法 对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度.然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达.结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40 ～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108 VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109 VG/mL；重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21 mRNA表达,免疫荧光测到Veto细胞中有hFGF21蛋白表达.结论 成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达.
关键词： 人成纤维细胞生长因子-21 慢病毒颗粒 细胞 表达 -
人成纤维细胞生长因子-21单克隆抗体的制备及抗原表位的确定
目的 制备小鼠抗人成纤维细胞生长因子(hFGF)-21单克隆抗体(mAb),通过细菌展示确定该mAb的抗原表位.方法 用hFGF-21作为检测和免疫抗原,间接ELISA筛选分泌抗人hFGF-21 mAb的杂交瘤细胞株；用FITC标记该mAb,并克隆hFGF-21的不同片段到展示载体Apex上,通过流式细胞仪筛选其抗原表位.结果 成功筛选出1株抗hFGF-21抗体的细胞株,其分泌抗体重链的亚型为IgG 2b,轻链为Kappa链；该杂交瘤细胞株腹水的效价为1:4.096×106；传30代及液氮中保存3个月,该细胞株能稳定分泌抗hFGF-21 mAb,且效价稳定；Western blot法检测证明该抗体与人FGF-21有很好的特异性；该mAb与小鼠FGF-21有交叉反应；通过流式细胞仪对抗原表位的筛选,该mAb可与hFGF-21下游的第107～121个氨基酸反应.结论 成功的制备出特异性、高稳定性的小鼠抗hFGF-21 mAb,确定了该mAb的抗原表位在第107～121位氨基酸.
关键词： 人成纤维细胞生长因子-21 单克隆抗体 细菌展示 流式细胞术
