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葡聚糖凝胶柱层析法分离纯化埃博霉素B
目的:以葡聚糖凝胶LH-20柱层析为主要纯化手段,确定埃博霉素B分离纯化的适层析条件.方法:通过单因素及重现性考察,主要研究了不同流动相、流速、上样浓度及柱床高径比对埃博霉素B的纯度及回收率的影响.结果:以丙酮为流动相,流速为1.0mL·min-1,上样浓度为3.0 mg·mL-1,柱床高径比为8:1,其纯度可达(91.6±1.3)％,回收率为(85.9±1.0)％.结论:葡聚糖凝胶柱层析法可得到较高的埃博霉素B纯度及回收率,从而有利于工业化生产.
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埃博霉素新药研发与技术创新初探
埃博霉素类化合物是一种新型抗肿瘤药物,通过与肿瘤细胞中的微管蛋白结合,促进微管蛋白聚合并抑制微管的解聚,使细胞周期停止,终诱导细胞凋亡.已经或正在开发的几种埃博霉素类似物有伊沙匹隆、埃博霉素B、沙戈匹隆、埃博霉素D、21-氨基埃博霉素B和KOS-1584,特别是沙戈匹隆极有可能成为高效候选抗肿瘤新药.本文对具有代表性的几个埃博霉素类化合物的临床药代动力学及其毒性反应研究进行综述并从结构特点和作用机制出发,重点论述伊沙匹隆和沙戈匹隆的研发和技术创新.
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基于生物合成途径的埃博霉素B发酵工艺优化
目的:从已知代谢途径出发,优化新型抗肿瘤药物埃博霉素B的发酵工艺,提高埃博霉素B的产量.方法:采用HPLC法分析检测埃博霉素B在发酵液中的含量,通过Plackett-Burman设计和响应面法优化埃博霉素B的发酵工艺.结果:确定出重要因素的优浓度为:丙酸钠0.95 mg· L-1,L-异亮氨酸15.18mg·L-1,L-甲硫氨酸29.32 mg· L-1,在此优条件下埃博霉素B的产量可达到49.37 mg· L-1,与模型预测值接近,发酵产量比优化前提高了38.29％.结论:通过添加适量的前体物质和其他的外源物质,一定程度上提高了埃博霉素B的产量,响应曲面法优化埃博霉素B发酵工艺是有效可行的.
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埃博霉素B、D及其衍生物的研究进展
埃博霉素是以微管为靶点的大环内酯类药物.已经或正在开发的几种埃博霉素类药物有:埃博霉素B内酰胺衍生物、埃博霉素D、埃博霉素B、埃博霉素F、埃博霉素A,其中埃博霉素D内酰胺衍生物极有可能成为高效候选抗肿瘤新药.本文从结构特点和作用机制出发,重点综述埃博霉素B、D及其衍生物的研发进展.
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LC-MS法测定Beagle犬血浆中埃博霉素B及其药动学研究
目的 建立液相色谱串联质谱(LC-MS)法测定Beagle犬血浆中埃博霉素B含量,分析埃博霉素B在Beagle犬体内的药动学参数.方法 采用LC-MS方法测定Beagle犬接受0.05,0.10和0.15 mg/kg埃博霉素B静脉给药后不同时间点的血浆浓度,药物浓度-时间数据通过DAS2.0版软件进行分析.结果 血浆中埃博霉素B在0.1～18 ng/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),血浆中样品提取回收率大于70％,日内和日间的精密度(RSD)均小于15％.药动学参数t1/2β分别为(76.20±7.24)、(71.41±10.62)和(64.62±9.76)h,AUC0-∞分别为(43.89±7.95)、(95.16±20.82)和(127.43±31.41)μg/(L.h).结论 LC-MS测定方法操作简便,专属性强,灵敏度高,适用于Beagle犬体内埃博霉素B的浓度测定和药动学研究.Beagle犬静脉注射3个剂量埃博霉素B后的药物浓度-时间数据符合二室模型特征,且埃博霉素B在犬体内半衰期较长.
关键词： 埃博霉素B Beagle犬 药动学 液相色谱串联质谱(LC-MS) -
LC-MS测定埃博霉素B血浆蛋白结合率
目的 建立液相色谱串联质谱(LC-MS)测定方法并检测犬以及人体埃博霉素B的血浆蛋白结合率.方法 建立LC-MS联合检测方法,以犬和人体血浆为对象,结合甲衡透析法检测埃博霉素B的血浆蛋白结合率.结果 3种浓度(100、50和10 ng/mL)埃博霉素B与犬血浆蛋白结合率分别为(85.4％±2.5％)、(81.3％±2.2％)和(83.7％±3 4％),与人体血浆蛋白结合率分别为(74.4％±3 8％)、(81.0％±2.9％)和(75.6％±2.2％),且灵敏度高,重现性好,操作简单.结论 埃博霉素B血浆蛋白结合率高,LC-MS可用于埃博霉素B血浆蛋白结合率的检测.
关键词： 埃博霉素B 血浆蛋白结合率 平衡透析法 液相色谱串联质谱(LC-MS) -
PEG-Epothilone B的合成及其初步抗肿瘤活性研究
以埃博霉素B为先导化合物,用不同分子量的聚乙二醇衍生物(PEG-NH2或PEG-SH)对其进行修饰,合成了11个水溶性埃博霉素B衍生物,并通过NMR和MS确证了其结构.采用MTT法考察了目标化合物对人体肝癌细胞HepG2的抑制作用,并通过考察其对人体原代肝细胞的半数致死率评价了目标化合物的毒性.结果表明,目标化合物对HepG2均表现出较好的抑制作用,对人体原代肝细胞毒性明显下降,水溶性也得到明显改善.
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埃博霉素B的大鼠体内药动学及组织分布
分别建立了液相色谱-质谱法和高效液相色谱法测定大鼠血浆和组织中的埃博霉素B,并考察该化合物在大鼠体内的药动学及组织分布情况.大鼠按3个剂量(0.5、1和2 mg/kg)静脉给药后测定不同时间点的血浆浓度,数据经拟合处理,符合二室开放模型特征,主要药动学参数如下:t1/28(7.17±0.68)、(7.65±1.40)和(6.68±0.36)h,AUC0(_1) (60.4±6.5)、(160.4±37.8)和(428.8±67.1) ng·ml-1-h.荷瘤Wistar大鼠1 mg/kg静脉给药后,于不同时间点测定各组织药物浓度,结果显示药物迅速从血浆分布到组织,并且在肿瘤中的滞留时间较长.
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UPLC-Q-TOF/MS分析埃博霉素B
目的 采用UPLC-Q-TOF/MS(超高效液相色谱联合飞行时间串联质谱)对埃博霉素B纯化产品及黏细菌发酵液提取物进行分析.方法 运用ACQUITY HSS T3超高效液相色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8 μm),以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相梯度洗脱;质谱使用ESI离子源,负离子模式下采集数据.结果 运用UPLC-Q-TOF/MS方法可以检测到埃博霉素B纯化产品中的微量杂质以及发酵液提取物中主要产物.结论 UPLC-Q-TOF/MS方法操作简单、快捷,可作为埃博霉素B的检测方法.
关键词： 黏细菌 埃博霉素B UPLC-Q-TOF/MS -
高效液相色谱法分析微生物代谢物埃博霉素B的含量
目的 建立检测黏细菌纤维堆囊茵发酵液中代谢物埃博霉素B(EpoB)含量的方法.方法 用高效液相色谱法测定EpoB的含量,色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-水(60:40),流速为1.0mL/min,进样量为3μL,检测波长为247nm.结果 平均回收率为99.55%,RSD为1.94%(n=9),精密度试验表明,日内RSD为0.94%(n=5),日间RSD为1.98%(n=5),EpoB在0.625-10mg/mL浓度范围内呈线性关系.低检测限为1.25μg/mL.结论 此法可以用于检测代谢产物的含量,具有良好的准确度和精密度.
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LC-MS/MS法测定人血中埃博霉素B浓度及其在Ⅰ期临床药代动力学研究中的应用
建立一种快速测定人全血中埃博霉素B血药浓度的LC-MS/MS法,并研究其在中国晚期肿瘤患者体内的Ⅰ期临床药代动力学行为.以埃博霉素A作为内标,采用C18色谱柱(150 mm×2.0 mm,4.6 μm),柱温40℃.流动相为乙腈-水(含0.05％甲酸)(64:36),流速0.2 mL/min,电喷雾离子化(ESI),正离子扫描,多反应监测(MRM).药物和内标分别为埃博霉素B(m/z 508.3→490.4)和埃博霉素A(m/z494.3→476.1).在本文建立的方法下,埃博霉素B在0.1～20 ng/mL以及5～500 ng/mL呈良好的线性关系(r=0.999 5和0.999 4),方法回收率、日内及日间精密度均符合方法学要求.该方法适用于埃博霉素B血样的定量分析.
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基因组重组技术选育埃博霉素B高产菌株
目的 用基因重组技术选育埃博霉素高产菌株.方法 本研究首先从不同生境中分离筛选到4株能产生埃博霉素B的纤维堆囊菌,以这些野生菌株作为Genome shuffling递归原生质体融合出发菌株.结果 通过五轮基因组重组成功选育到了3株遗传稳定的高产埃博霉素B重组菌株,其中一株重组菌株So F5-09的埃博霉素B产量达到了15.8mg/L,比原始出发菌株So 07-9埃博霉素B产量提高了35.1倍.结论 本研究证明使用野生菌株作为Genome shuffling递归原生质体融合出发菌株也能有效提高目标代谢产物的产量.
