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芍药内酯苷通过TLR4通路对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及Tollip表达的调控作用
芍药内酯苷为白芍中的主要活性成分.本文研究芍药内酯苷通过调节TLR4通路和Tollip表达治疗实验性溃疡性结肠炎的药效作用.应用三硝基苯磺酸治疗大鼠溃疡性结肠炎模型,通过测定TNF-α、IL-1、IL-10、5-HT、MPO,结合病理组织切片和TLR4通路和Tollip相关蛋白的表达,观察芍药内酯苷对溃疡性结肠炎的疗效.研究结果显示,芍药内酯苷可通过显著降低TNF-α、IL-1、IL-10、5-HT水平,显著降低TLR4、MyD88和NF-KB p65的蛋白表达和上调Tollip的表达,发挥治疗溃疡性结肠的作用.由此可见,芍药内酯苷可作为治疗溃疡性结肠炎的潜在天然药物.
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关于Tollip在宫颈癌发生过程中的作用及机制探讨
目的 探讨Tollip在宫颈癌发生过程中的作用机制.方法 2012年～2014年,收集正常宫颈组织、CIN1、CIN2、CIN3及宫颈浸润癌癌组织各80例,对比HPV感染情况,检测宫颈鳞状上皮凋亡,Cyclin Dl、c-myc、p53表达.取细胞分为正常鳞状上皮组,Siha组,Siha+Tollip质粒转染组,Siha+空质粒对照组,进行Tollip的细胞转染实验.结果 TLR4、MyD88与宫颈鳞状上皮凋亡(r=0.484、0.427)、HPV感染(r=0.671、0.405)、P53 (r=0.487、0.581)存在相关性(P＜0.05).正常鳞状上皮组、Siha组、Siha+Tollip质粒转染组、Siha+空质粒对照组的细胞增殖、培养第3代贴壁生长比重差异显著.Tollip过表达对象,P53表达明显上调.结论 Tollip在宫颈癌发生过程中可能通过调节TLR4、MyD88、NF-KB、P53表达,终影响细胞凋亡、宫颈上皮内瘤病变与宫颈癌的发生.
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Tollip体外转染HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制
目的 探讨Tollip转染人肝癌细胞系HepG2215细胞对HBsAg和HBeAg分泌的影响及其机制,为乙型肝炎的治疗寻找新的靶点.方法 含HA标签的重组表达质粒pCMV-HA-Tollip经EcoR Ⅰ和Kpn Ⅰ双酶切鉴定后,采用脂质体LipofectamineTM 2000转染HepG2215细胞,共设4个转染组:脂质体转染对照组(15μl脂质体)、空质粒转染对照组(6μg空质粒、15μl脂质体)、空质粒重组质粒共转染组(3 μg空质粒、3μg pCMV-HA-Tollip、15μl脂质体)及重组质粒转染组(6μgpCMV-HA-Tollip、15μl脂质体),转染48 h后,收集细胞,经Western blot检测AKT、p-AKT、NF-κB以及HA标签蛋白的表达；收集上清,ELISA法检测HBsAg和HBeAg的水平.结果 重组质粒pCMV-HA-Tollip经双酶切鉴定构建正确.空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组均有HA标签蛋白的表达,而脂质体转染对照组和空质粒转染对照组无HA标签蛋白表达；与空质粒转染对照组比较,空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组中NF-κB和p-AKT蛋白的表达明显降低(P＜0.01),而AKT蛋白的表达无明显变化(P＞0.05)；空质粒重组质粒共转染组和重组质粒转染组细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量明显低于空质粒转染对照组(P＜0.01),对HBsAg的抑制率分别为24％和41％,对HBeAg的抑制率分别为13％和31％.结论 pCMV-HA-Tollip重组质粒在HepG2215细胞中能有效抑制HBsAg和HBeAg的分泌,其机制可能与抑制AKT的磷酸化和下调NF-κB的表达有关.
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Toll样受体4及其负性调控因子Tollip在结肠炎大鼠肠黏膜中的表达
目的 探讨Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65及负性调控因子Tollip在三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎大鼠肠黏膜中的表达.方法 40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组和模型组.采用免疫组织化学及RT-PCR方法比较两组大鼠肠黏膜TLR4、NF-κB p65和Tollip的表达.结果 TLR4、NF-κB p65 mRNA在模型组肠黏膜中的表达高于正常对照组(TLR4:0.376±0.029 vs 0.215±0.049,t=2.731,P=0.013; NF-κB p65:0.746±0.049 vs 0.206±0.063,t=6.055,P=0.000),与大体形态损伤评分(TLR4:r=0.754,P=0.000; NF-κB p65:r=0.548,P=0.012)及组织学损伤评分(TLR4:r=0.866,P=0.000; NF-cB p65:r=0.919,P=0.000)呈正相关.Tollip mRNA在模型组及正常组中表达差异无统计学意义(0.288±0.050 vs 0.140±0.046,t=1.993,P=0.061)；Tollip蛋白在模型组肠黏膜固有层的表达高于正常组；Tollip的表达与大体形态损伤评分(r=-0.497,P=0.026)及组织学损伤评分(r=-0.551,P=0.012)呈负相关.结论 Toll样受体4与负性调控因子Tollip的表达失衡参与了炎症性肠病的发病机制.
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Toll作用蛋白(Tollip)在急性阑尾炎时的表达
目的 分析Toll作用蛋白(Toll-interacting protein,Tollip)在阑尾组织的表达及其在急性炎症中的意义.方法 选择急性阑尾炎33例,以无炎症阑尾6例作对照(阑尾组织无炎性病理改变);阑尾切除术前1 h检测脉搏、体温(BT)、白细胞(WBC)计数和中性粒细胞(NEUT)计数;阑尾标本经H-E染色和病理检查确诊后分为4组(A组无炎症,B组单纯性炎症、C组化脓性炎症、D组坏疽性炎症),采用免疫组化染色和数字图像分析法对Tollip的蛋白表达进行定性、定位和半定量分析,并统计分析Tollip与脉搏、BT、WBC及NEUT的相关性.结果 按照病理类型分组,组间BT、WBC和NEUT存在显著差异(P<0.05);中性粒细胞低表达或不表达Tollip,Tollip主要表达于阑尾黏膜上皮和腺上皮细胞;阑尾从无炎症状态到发生单纯性炎症、化脓性炎症以及坏疽性炎症的过程中,Tollip的表达逐步升高,并与WBC显著相关(P<0.05).结论 在急性阑尾炎发生和发展过程中,阑尾组织局部的Tollip表达上调并与WBC升高等炎症全身反应密切相关.
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Tollip参与Src家族酪氨酸激酶Fyn在人食管鳞状细胞癌中负调控机制
目的 探讨人食管鳞状细胞癌中Tollip对Src家族酪氨酸激酶Fyn表达的负调控机制.方法 收集3例新鲜食管鳞状细胞癌组织(ESCC)和食管正常黏膜上皮组织(UNR),采用免疫印迹法分析Tollip蛋白表达水平的变化.同时转染人Tollip质粒DNA人TE1细胞株中观察其对Fyn表达的影响.结果 免疫印迹结果 显示食管鳞癌组织Tollip蛋白表达低于食管正常黏膜组织.转染Tollip质粒DNA可以降低人食管鳞状细胞癌TE1细胞中Fyn的表达.结论 Tollip可能是人食管鳞状细胞癌中Src家族酪氨酸激酶ryn的负调控因子,在食管鳞状细胞癌的发生发展过程中起重要作用.
