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爪蟾卵母细胞中PPARγ-PPRE调控系统的建立和应用
目的在爪蟾卵母细胞中建立人类PPARγ-PPRE调控系统,为PPARγ配体类药物筛选提供一个可靠的实验平台.方法将调节蛋白PPAR基因构建在爪蟾卵母细胞启动子XOE下游,构成pXOE-PPARγ重组质粒;将PPRE反应元件构建在增强型绿色荧光蛋白d2EGFP报告基因的上游,得到pPPRE-d2EGFP重组质粒.将pXOE-PPARγ质粒和pPPRE-d2EGFP质粒共注射入爪蟾Ⅴ,Ⅵ期卵母细胞中,建立PPRE调控通路的表达系统,分别在含前列腺素E1(PGE1)、吡咯列酮的培养液中培养3 d,对照组共注射pXOE-PPARy质粒和pTAL-d2EGFP质粒,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果在含PGE1,吡咯列酮的卵母细胞中观测到绿色荧光蛋白;对照组未见到荧光.结论PGE1,吡咯列酮可以通过影响PPRE反应元件上调其下游基因的表达;通过核内共注射的方法在爪蟾卵母细胞中建立的PPARγ-PPRE调控系统,可作为PPAR配体类药物快速筛选和作用机制研究的细胞模型.
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吡格列酮提高C57bl小鼠胆盐肠肝循环相关基因的表达
目的:观察吡格列酮对小鼠胆盐肠肝循环转运相关基因的表达影响.方法:将16只小鼠随机分为两组:对照组(normal control,NC)、药物组(medicine,M),分别给予普通饮食、普通饮食加吡格列酮(pioglitazone)灌胃,喂养10周后处死小鼠取血、胆汁、小鼠肝脏、小肠组织,生化分析仪分析小鼠血样代谢指标,qRT-PCR技术检测各组小鼠组织内胆盐肠肝循环相关基因的表达.结果:M组小鼠胆汁中胆盐含量NC组显著升高,肝脏法尼醇X受体(famesoid X receptor,FXR)及胆盐合成相关基因胆固醇7羟化酶(eytochrome P450 enzyme7 A1,CYP7A1)、胆固醇27羟化酶(CYP7A1eytochrome P450 enzyme27 A1,CYP27A1)以及胆盐转运基因胆盐输出泵基因(bile salt export pump,BSEP)、牛黄胆酸钠转运基因(sodium/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的表达较NC组也明显升高(P＜0.01).肝脏组织免疫组化证实了M组BSEP在蛋白层面表达升高.M组小肠组织内胆盐转运基因顶膜钠离子依赖性胆汁酸转运体(apical sodium dependent bile acid transporter,ASBT)的表达较NC组明显升高(P＜0.01).结论:吡格列酮能够诱导胆盐合成相关基因的表达,并上调胆盐在肝脏以及小肠内的转运相关基因的表达,在转录水平参与胆盐肠肝循环的调控.
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葛根素对大鼠脂肪细胞葡萄糖摄入的影响
目的:观察葛根素对大鼠脂肪细胞葡萄糖摄入的影响.方法:无菌条件下取雄性大鼠附睾脂肪组织于高浓度葡萄糖和不同浓度葛根素、罗格列酮或赋形剂中培养,观察其葡萄糖的摄入量,检测PPARY基因表达.结果:葛根素各剂量组和罗格列酮组葡萄糖摄入量增加均明显高于对照组(P<0.05);但葛根素各浓度组明显低于罗格列酮组(P<0.05).结论:葛根素能够增加胰岛素抵抗的脂肪细胞对葡萄糖的摄入.
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葛根素对代谢综合征病理因子内皮细胞功能障碍影响的体外研究
葛根素是一种从野葛中萃取的一种异黄酮.在治疗糖尿病和心血管疾病中有着广泛的药理作用.本研究旨从代谢综合征角度研究葛根素对内皮细胞的保护作用,探索其基本机制.研究结果显示,葛根素可以抑制肿瘤坏死因子诱导的内皮细胞凋亡和内皮细胞活力丧失.这些影响很通过抑制肿瘤坏死因子诱导的细胞内游离钙离子在内皮细胞的堆积,抑制钙紊乱来实现的.总体来说,我们的研究将葛根素的药理反应与代谢综合症中内皮细胞的发病机理联系起来,提出了研究葛根素作用机制的新角度.
