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LC-MS/MS研究异羟肟酸类化合物F1在大鼠体内的药动学
目的 建立测定大鼠血浆中F1含量的LC-MS/MS方法,研究F1在大鼠体内的药动学和生物利用度.方法 大鼠分别经灌胃(10 mg· kg-1)、静脉注射(5 mg·kg-1)给药后,运用所建立的LC-MS/MS测定其血药浓度,选用DAS2.0软件求算药动学参数,根据灌胃、静脉注射给药药-时曲线下面积和给药剂量,计算F1的绝对生物利用度.结果 灌胃和静脉注射后ACU0.分别为(27.052±10.068)和(153.878±88.777) ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(31.425±9.261)和(179.054±116.794)ng·h·mL-1;MRT0-t分别为(10.722±4.335)和(2.398±1.344)h;MRT0-∞分别为(15.651±5.917)和(6.925 ±7.013)h;t1/2分别为(4.294±1.534)和(6.052±3.633)h;ρmax分别为(18.394±17.856)和(219.079±142.207)ng·mL-.F1在大鼠体内的绝对生物利用度为8.79％.结论 建立了可用于测定大鼠血浆中F1的含量的方法,实验结果能指导F1进行结构优化,改善F1在体内的药动学特性,为提高F1的生物利用度提供实验依据.
关键词： LC-MS/MS F1 药动学 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 绝对生物利用度 -
邻苯二甲酸二丁酯对亲代和子代斑马鱼生殖毒性的比较研究
目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对亲代(F0)、子代(F1)斑马鱼的生殖毒性.方法 将48对成年斑马鱼随机分为4组:空白对照组、溶剂对照组、625 mg/L DBP低剂量组和1 250 mg/LDBP高剂量组.连续染毒DBP 30 d后,将各组F0代斑马鱼交配,记录产卵数、受精率以及72 h孵化率.将F0和F1代斑马鱼在清水中饲养180d,进行F1代斑马鱼交配试验,且将F1代DBP高剂量组与对照组斑马鱼进行置换交配,记录产卵数、受精率及孵化率.进行F0代和F1代斑马鱼性腺组织病理学检查,并测定卵黄蛋白原(VTG) mRNA的表达水平.结果 与对照组和DBP低剂量组相比,DBP高剂量组F0代和F1代斑马鱼的生殖能力显著下降；置换交配实验显示DBP对雄性斑马鱼的生殖能力影响更为显著.组织病理学检查显示F0代雄鱼精巢中精子数量减少,间质细胞稍有增多,精母细胞增多.而F1代雄鱼精巢发育受到明显抑制,出现生精小管畸形,精子数量明显减少,以及间质细胞增生.RT-PCR结果显示DBP各剂量组F0代和F1代雄性斑马鱼VTG基因无明显表达,提示DBP对斑马鱼无雌激素样效应.结论 DBP高剂量组染毒可影响F0代和F1代斑马鱼的正常发育,使产卵量减少,受精率显著下降.F0代和F1代雄性斑马鱼生精小管畸形、精巢中精子数量减少与间质细胞增生同时存在.
关键词： 斑马鱼 邻苯二甲酸二丁酯(DBP) 生殖毒性 F0 F1 -
青藤碱对NZB/W F1代狼疮鼠外周血CD4~+T细胞比例及Bax、BCL-2 mRNA表达的影响
目的:观察青藤碱对NZB/W F1代狼疮鼠外周血 CD4~+T细胞及Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响.方法:随机选择NZB/W F1代狼疮鼠32只分为4组:对照组、青藤碱低、中、高剂量组.分别采用流式细胞计数法和realtime RT-PCR法检测NZB/WF1代狼疮鼠外周血中CD4~+T细胞数量及Bax、BCL-2 mRNA表达.结果:青藤碱干预三周后,NZB/W F1代狼疮鼠外周血CD4~+T细胞数量升高;Bax mRNA表达明显升高,Bcl-2 mRNA表达明显降低.结论:青藤碱能减轻NZB/W F1代狼疮鼠的T细胞等病变.
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抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析
目的 在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析.方法 将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证.然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H.构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株.扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化.纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价.结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确；Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞；SDS-PAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性；小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同.结论 成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体.
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呼吸道合胞病毒融合蛋白F1和截短F1蛋白的表达差异研究
目的 构建呼吸道合胞病毒融合蛋白F1和截短F1蛋白的原核表达载体,并对它们在大肠杆菌中的表达差异进行了初步研究.方法 用DNAstar软件对呼吸道合胞病毒F1蛋白进行亲疏水性和抗原表位可能性分析后,将其两端的疏水区域截去之后与pET -42b(+)构建表达载体,同时用相同的表达系统构建F1蛋白的表达载体并将2种重组蛋白进行诱导表达.实验对2种蛋白在Rossata/pET - 42b(+)菌株中的表达难易度、表达形式及初步洗涤的包涵体纯度进行了比较.结果 与F1蛋白相比,截短的F1蛋白相对更容易表达,表达的可溶性蛋白含量更高,洗涤纯化后的包涵体纯度也更高.结论 呼吸道合胞病毒F1蛋白截去两端疏水氨基酸后更容易表达,为后期蛋白的大量制备及其免疫原性研究奠定了基础.
