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星点设计-效应面法优化O-羧甲基壳聚糖复凝海绵对凝血酶的固定化作用
目的 考察O-羧甲基壳聚糖复凝海绵对凝血酶的固定化作用.方法 以水溶性O-羧甲基壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,加入凝血酶作为复凝血剂,采用星点设计-效应面法优化O-羧甲基壳聚糖复凝海绵处方,通过测定固定化凝血酶的活性回收率,考察凝血酶的固定化条件.结果 O-羧甲基壳聚糖复凝海绵固定凝血酶的优处方为:O-CMC 2.49％;凝血酶49.87 U·mL-1;戊二醛0.49％.结论 O-羧甲基壳聚糖复凝海绵对凝血酶有良好的固定化作用.
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重组人凝血因子Ⅷ制备工艺中纳米膜的选择
目的 选择适用于重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factor Ⅷ,rhFⅧ)制备工艺中的纳米膜.方法 将rhFⅧ收获液Ⅰ(含吐温80)和收获液Ⅱ(不含吐温80)经4种不同型号的滤器(Duropore(R)、Kleenpak(R)、Minisart(R)、Virosart(R) max)进行预过滤,检测样品活性回收率及蛋白回收率.用不同厂家的20 nm孔径纳米膜(Nanol～Nano7)对预过滤样品进行过滤,检测样品的活性回收率、蛋白回收率及过滤通量.以粒径约20 nm的细小病毒(minute virus of mice,MVM)作为指示病毒,对筛选出的纳米膜进行病毒去除验证.结果 确定佳预过滤膜为minisart(R),收获液Ⅰ和收获液Ⅱ的活性收获率分别为87.9％和99.1％,蛋白回收率分别为97.3％和98.2％.确定收获液Ⅰ的佳过滤纳米膜为Nano6,样品活性回收率为100％,蛋白回收率为92.6％,过滤通量为16.44 L/(m2·h);收获液Ⅱ的佳纳米膜为Nano7,样品活性回收率为98％,蛋白回收率为86％,过滤通量为26.54 L/(m2·h).Nano6和Nano7的病毒去除验证均合格.结论 筛选的纳米膜可用于rhFⅧ的产业化生产工艺中.
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星点设计-效应面法优化壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用研究
目的 考察壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用.方法 本研究以壳聚糖微球为载体,以戊二醛为交联剂将凝血酶固定于空白微球上,以固定化凝血酶的活性回收率为指标,采用星点设计-效应面法优化固定凝血酶的条件.结果 试验结果表明,壳聚糖微球固定凝血酶的优条件是:凝血酶浓度69.32 U·mL-1、戊二醛浓度0.18％、固定化时间1.88 h、固定化pH 7.08,凝血酶的活性回收率为81.55％.结论 壳聚糖微球对凝血酶的固定化效果良好.
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凝血酶原复合物制备过程吸附条件的研究
目的 探讨凝血酶原复合物制备过程凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X的吸附条件,提高活性收率.方法 选择DEAE-SephadexA-50凝胶平衡体系中柠檬酸钠、氯化钠、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据L9(33)正交表设计试验,配制平衡液,分别对DEAE-SephadexA-50凝胶进行平衡处理后,按1.67g/L加入等量健康人混合去冷沉淀血浆,4℃搅拌,吸附凝血因子；吸附后凝胶洗涤、洗脱,检测洗脱液中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X活性并进行活性回收率正交试验直观分析,获得较优吸附条件并进行验证.此外,分析吸附平衡体系电导率与4种因子活性收率间关系.结果 柠檬酸钠、氯化钠、pH对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X吸附影响不同；在所考察范围内,pH对4种凝血因子吸附影响效应趋势一致,pH越低,吸附效果越佳；柠檬酸钠及氯化钠浓度对4种凝血因子吸附影响效应趋势不一致,柠檬酸钠浓度越高,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、X吸附越佳,而凝血因子Ⅸ在(0.012～0.02)mol/L水平较佳；氯化钠浓度越低,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ吸附越佳,而凝血因子X在(0.1 ～0.14)mol/L水平较佳；平衡体系电导率与4种因子活性收率间不存在线性关系.结论 吸附条件中pH及柠檬酸钠浓度对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X吸附效果影响较大.柠檬酸钠(0.02～0.028)mol/L,氯化钠(0.02～0.06)mol/L,pH6.6～6.9条件,4种凝血因子吸附效果相对较佳.电导率对4种因子吸附效果影响不明显.
关键词： 凝血酶原复合物/制备 吸附条件 活性回收率
